为建立同时检测小熊猫源星状病毒1型(Red Panda astrovirus 1,RpAstV-1)和小熊猫源星状病毒2型(Red Panda astrovirus 2,RpAstV-2)的双重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据RpAstV-1和RpAstV-2的ORF1b序列高保守区域分别设计特异性引物及Ta...为建立同时检测小熊猫源星状病毒1型(Red Panda astrovirus 1,RpAstV-1)和小熊猫源星状病毒2型(Red Panda astrovirus 2,RpAstV-2)的双重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据RpAstV-1和RpAstV-2的ORF1b序列高保守区域分别设计特异性引物及Taq Man探针,进行反应体系优化、特异性、敏感性及重复性试验,建立了可同时检测该病原体两种基因型的双重荧光定量PCR方法。采用该方法仅检测RpAstV-1和RpAstV-2时出现阳性扩增,对RpAstV-1重组质粒最低检测浓度为10^(2) copies/μL,RpAstV-2重组质粒最低检测浓度10^(1) copies/μL;组内和组间的变异系数均小于3%。应用该方法对成都大熊猫繁育研究基地的323份粪便样本和480份组织样本进行检测,其中RpAstV-1阳性率为3.36%(27/803),RpAstV-2阳性率为2.49%(20/803)。本研究成功建立了一种能同时检测RpAstV-1和RpAstV-2的Taq Man双重荧光定量PCR检测方法,该方法可用于小熊猫RpAstV-1和RpAstV-2的快速鉴别检测,为RpAstV-1和RpAstV-2监测和防控提供了技术支持。展开更多