目的真菌的细胞膜上普遍存在高渗透压信号蛋白1(high osmolarity signaling protein 1,Sho1),其结构相对保守,在致病机制中发挥重要作用。然而,Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响尚未见报道。因此,建立构建白念珠菌SHO1基因敲除株的方法...目的真菌的细胞膜上普遍存在高渗透压信号蛋白1(high osmolarity signaling protein 1,Sho1),其结构相对保守,在致病机制中发挥重要作用。然而,Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响尚未见报道。因此,建立构建白念珠菌SHO1基因敲除株的方法,为后续深入探索Sho1蛋白对白念珠菌生物学性状及致病能力的影响提供了理论基础。方法基因敲除技术选择采用SN152(His-/Leu-/Arg-)缺陷株为亲本株,运用融合PCR技术和同源互补的His和Leu质粒,目的基因可以被快速有效地敲除。通过结晶紫染色实验观察生物膜形成能力、聚苯乙烯孔板模型检测其黏附能力、革兰染色油镜观察菌丝形态,初步探索了Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响。结果构建了his和融合PCR-his基因敲除盒,leu和融合PCR-leu基因敲除盒并将它们电转化到SN152中,用缺陷培养基筛选敲除株。通过PCR、琼脂糖凝胶电泳和基因测序方法验证SHO1基因敲除株。实验结果提示敲除SHO1基因后会导致生物膜的形成能力下降。结论成功构建了白念珠菌SHO1基因敲除株,SHO1基因的敲除使白念珠菌的生物膜生成能力降低,致病力下降。展开更多
文摘目的真菌的细胞膜上普遍存在高渗透压信号蛋白1(high osmolarity signaling protein 1,Sho1),其结构相对保守,在致病机制中发挥重要作用。然而,Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响尚未见报道。因此,建立构建白念珠菌SHO1基因敲除株的方法,为后续深入探索Sho1蛋白对白念珠菌生物学性状及致病能力的影响提供了理论基础。方法基因敲除技术选择采用SN152(His-/Leu-/Arg-)缺陷株为亲本株,运用融合PCR技术和同源互补的His和Leu质粒,目的基因可以被快速有效地敲除。通过结晶紫染色实验观察生物膜形成能力、聚苯乙烯孔板模型检测其黏附能力、革兰染色油镜观察菌丝形态,初步探索了Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响。结果构建了his和融合PCR-his基因敲除盒,leu和融合PCR-leu基因敲除盒并将它们电转化到SN152中,用缺陷培养基筛选敲除株。通过PCR、琼脂糖凝胶电泳和基因测序方法验证SHO1基因敲除株。实验结果提示敲除SHO1基因后会导致生物膜的形成能力下降。结论成功构建了白念珠菌SHO1基因敲除株,SHO1基因的敲除使白念珠菌的生物膜生成能力降低,致病力下降。
