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巢式PCR-RFLP法对湖南省乙型肝炎病毒Bj和Ba基因亚型的初步鉴定 被引量:5
1
作者 温志立 谭德明 +1 位作者 杨铁一 徐铿 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第14期1770-1773,共4页
目的:检测湖南省乙型肝炎病毒(HBV)基因亚型(Bj或Ba)的分布情况,了解基因亚型与HBV致病性的关系,希望以此诠释相同基因型HBV导致不同病情的机制. 方法:随机选取经多对型特异性引物巢式PCR法鉴定为B 基因型HBV的血清标本50例,包括慢性HB... 目的:检测湖南省乙型肝炎病毒(HBV)基因亚型(Bj或Ba)的分布情况,了解基因亚型与HBV致病性的关系,希望以此诠释相同基因型HBV导致不同病情的机制. 方法:随机选取经多对型特异性引物巢式PCR法鉴定为B 基因型HBV的血清标本50例,包括慢性HBV携带者和慢性重型乙型肝炎患者各25例,采用巢式PCR-RFLP法鉴定其基因亚型(Bj或Ba). 结果:50例B基因型HBV均为Ba亚型,没有发现Bj亚型结论:湖南省B基因型HBV可能主要为Ba亚型.相同基因型HBV导致不同病情的机制可能还与其他因素(如HBV准种)有关. 展开更多
关键词 巢式pcr-rflp 湖南 乙型肝炎病毒 Bj基因亚型 Ba基因亚型 鉴定
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应用巢式PCR-RFLP方法鉴别微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫的研究 被引量:4
2
作者 姚龙泉 张西臣 +2 位作者 Lihua Xiao 李建华 尹继刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期446-449,共4页
应用巢式聚合酶链反应(NestedPCR)-限制片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymor-phism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(C.parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和火鸡隐孢子虫(C.melea-grides)的鉴别进行了研究。结果显示C.parvumBO... 应用巢式聚合酶链反应(NestedPCR)-限制片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymor-phism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(C.parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和火鸡隐孢子虫(C.melea-grides)的鉴别进行了研究。结果显示C.parvumBOCC2、C.andesoniBOCC2和C.meleagridesCHCC1扩增产物片段大小分别为830bp、828bp和828bp,扩增产物分别经VspⅠ酶切后形成3种不同的RFLP图谱,根据RFLP图谱可鉴别C.parvum、C.andersoni和C.meleagrides。本研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 安氏隐孢子虫 火鸡隐孢子虫 巢式pcr-rflp
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隐孢子虫SSU rRNA基因的巢式PCR-RFLP分析 被引量:8
3
作者 姚龙泉 张西臣 +3 位作者 Lihua Xiao 吴涛 李建华 尹继刚 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2004年第6期321-325,共5页
目的 建立用巢式聚合酶链反应 (NestedPCR) 限制片段长度多态性 (Restrictionfragmentlength polymor phism ,RFLP)检测、鉴别微小隐孢子虫 (Cryptospordium parvum)和安氏隐孢子虫 (C .andersoni)的方法。  方法 用巢式PCR技术扩... 目的 建立用巢式聚合酶链反应 (NestedPCR) 限制片段长度多态性 (Restrictionfragmentlength polymor phism ,RFLP)检测、鉴别微小隐孢子虫 (Cryptospordium parvum)和安氏隐孢子虫 (C .andersoni)的方法。  方法 用巢式PCR技术扩增长春市人和牛粪便中C .parvum与C .andersoni的Small SubunitrRNA (SSUrRNA)部分基因 ,并克隆和测序。扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切 ,进行RFLP分析 ,并与GenBank上的 17株隐孢子虫相应序列进行对比分析和系统发育分析。 结果 C .parvumHCC1、C .parvumBOCC1和C .andersoniBOCC1扩增产物片段大小分别为 83 0bp、83 0bp和 82 8bp ,经SspⅠ和VspⅠ分别单酶切后形成 2种不同的RFLP图谱 ,根据RFLP图谱可鉴别C .parvum与C .andersoni。序列分析结果显示 ,C .parvumHCC1与国外牛源C .parvumBOH 6、C .parvumGCH1、鹿源C .parvumDR1相应序列同源性均为 99.3 % ;C .parvumBOCC1与国外牛源C .parvumBOH6、C .parvumGCH1、鹿源C .parvumDR1相应序列同源性均为 99.5 % ;C .andersoniBOCC1与国外C .andersoni相应序列同源性为 99.9%。系统发育分析结果显示 ,隐孢子虫虫种形成了 2个群 ,1个群包括C .parvum、C .baileyi、C .meleagridis、C .felis和C .wrairi,另 1个群包括C . 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 安氏隐孢子虫 SSU RRNA基因 巢式pcr-rflp
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巢式PCR-RFLP法检测奶牛隐孢子虫及虫种鉴定 被引量:6
4
作者 曾晓华 陈铁桥 +2 位作者 王权 李建 李安平 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第4期15-18,共4页
采进口奶牛粪样200份,收集每份样品中的卵囊液,采用巢式PCR检测隐孢子虫(Cryptosporidium)18S rRNA基因,并用RFLP进行虫种鉴定,将目的片段克隆到pEGM-T easy vector,测序并进行同源性分析以进一步佐证虫种鉴定结果。结果表明,进口奶牛... 采进口奶牛粪样200份,收集每份样品中的卵囊液,采用巢式PCR检测隐孢子虫(Cryptosporidium)18S rRNA基因,并用RFLP进行虫种鉴定,将目的片段克隆到pEGM-T easy vector,测序并进行同源性分析以进一步佐证虫种鉴定结果。结果表明,进口奶牛隐孢子虫阳性率为3.5%(7/200),514bp的目的片段不能被EcoT14 Ⅰ酶切。测序分析表明,获得的18S rRNA基因序列与NCBI上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)相应序列同源性高达99.4%~100%,与安氏隐孢子虫(C.andersoni)同源性仅为91.1%。说明进口牛粪样中检测出的隐孢子虫为微小隐孢子虫。 展开更多
关键词 隐孢子虫 巢式pcr-rflp 奶牛粪便
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长白山四种赤杨丛枝菌根真菌侵染多样性的巢式PCR-RFLP分析 被引量:5
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作者 董甜 张惠文 +1 位作者 张粤 何兴元 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1796-1800,共5页
采集中国吉林长白山不同海拔的4种赤杨根须样本,利用巢式PCR-RFLP方法检测丛枝菌根真菌(AMF)对样品的侵染情况,PCR结果经限制性内切酶分析.结果表明,赤杨根内AMF存在丰富的基因多样性.AMF的侵染有从宿主混乱性向宿主专一性发展的趋势.... 采集中国吉林长白山不同海拔的4种赤杨根须样本,利用巢式PCR-RFLP方法检测丛枝菌根真菌(AMF)对样品的侵染情况,PCR结果经限制性内切酶分析.结果表明,赤杨根内AMF存在丰富的基因多样性.AMF的侵染有从宿主混乱性向宿主专一性发展的趋势.东北赤杨AMF的宿主专一性水平最强,球囊霉属已成为东北赤杨的优势侵染类群;其余3种赤杨的AMF则出现宿主混乱现象.宿主因素比海拔因素对AMF侵染有更重要的影响. 展开更多
关键词 赤杨 巢式pcr-rflp 丛枝菌根真菌(AMF) 多样性 长白山
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应用巢式PCR-RFLP方法鉴别我国常见的几种隐孢子虫 被引量:5
6
作者 李巍 张西臣 +3 位作者 李建华 李淑红 宫鹏涛 杨举 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期69-73,共5页
应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)—限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)和猪隐孢子虫(C.suis)的鉴... 应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)—限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)和猪隐孢子虫(C.suis)的鉴别进行了研究。结果显示:牛源C.parvum、羊源C.parvum、C.suis、C.andersoni和C.baileyi扩增产物片段大小分别为212,213,213,213,210 bp;扩增产物先后经TaqⅠ、BstUⅠ与MseⅠ酶切,根据酶切后形成的不同酶切图谱可以鉴别C.parvum、C.suis、C.andersoni和C.baileyi。该研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学调查提供了新的方法。 展开更多
关键词 隐孢子虫 巢式PCR—RFLP 鉴别方法
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采用巢式PCR-RFLP检测胰液中突变的Kras基因 被引量:2
7
作者 刘华平 李方跃 +2 位作者 梁伟 徐阿曼 肖尚喜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期162-164,共3页
采用多聚酶链 限制性片段长度多态性检测技术 ,对临床上可疑的胰腺炎和胰腺癌患者 ,经收集胰液进行K ras基因第 12位密码子突变检测 ,以诊断或鉴别诊断胰腺癌。结果在 2 2份胰液标本中 ,11例胰腺炎均无K ras基因突变 ;在 11例胰腺癌病... 采用多聚酶链 限制性片段长度多态性检测技术 ,对临床上可疑的胰腺炎和胰腺癌患者 ,经收集胰液进行K ras基因第 12位密码子突变检测 ,以诊断或鉴别诊断胰腺癌。结果在 2 2份胰液标本中 ,11例胰腺炎均无K ras基因突变 ;在 11例胰腺癌病例中有 9例 (81 2 % )含K 展开更多
关键词 pcr-rflp 胰腺癌 基因突变 K-RAS基因
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18S rRNA基因巢式PCR-RFLP鉴定吉林、大庆地区断奶前奶牛隐孢子虫分离株 被引量:4
8
作者 苏艳 白光彦 +5 位作者 孙喜东 刘妍 王春仁 张静 宋军澎 尹继刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期347-351,共5页
利用18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)鉴定吉林、大庆地区牛源隐孢子虫分离株。采取吉林、大庆地区断奶前犊牛粪便,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增... 利用18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)鉴定吉林、大庆地区牛源隐孢子虫分离株。采取吉林、大庆地区断奶前犊牛粪便,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA4.0软件进行同源性和系统发育树分析。同时扩增产物分别用SspⅠ、VspⅠ和MboⅡ酶切后进行RFLP分析。通过18S rRNA基因PCR-RFLP分析和测序比对分析表明,吉林分离株包括2种隐孢子虫,分别为C.bovis和C.ryanae。大庆分离株包括3种,分别为C.bovis、C.ryanae和C.andersoni。 展开更多
关键词 安氏隐孢子虫 牛型隐孢子虫 C.ryanae 18S RRNA 巢氏pcr-rflp
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18Sr RNA基因巢式PCR-RFLP分析两株牛源隐孢子虫分离株 被引量:5
9
作者 刘晖 袁忠英 +2 位作者 沈玉娟 冯耀宇 曹建平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期115-118,共4页
目的18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymor-phism,RFLP)鉴定上海(简称SH-BOV)和徐州(简称XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫。方法改良-抗酸染色确定感染隐孢子虫的上海株和徐州株牛粪... 目的18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymor-phism,RFLP)鉴定上海(简称SH-BOV)和徐州(简称XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫。方法改良-抗酸染色确定感染隐孢子虫的上海株和徐州株牛粪,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA软件进行同源性和系统发育分析。同时扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切,且XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后进行RFLP分析。结果通过18S rRNA基因分析,SH-BOV与1株巴西牛隐孢子虫Cryptospridiumbovis同源性为100%,种系发育树上两者在同一分支;XZ-BOV与安氏隐孢子虫C.andersoni同源性为99%,种系发育树上两者在同一分支。扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切后,可鉴别出SH-BOV为C.bovis,XZ-BOV为C.andersoni或C.muris。XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后可鉴别出XZ-BOV为C.andersoni。结论上海株牛源隐孢子虫(SH-BOV)鉴定为牛隐孢子虫(C.bovis),徐州株牛源隐孢子虫(XZ-BOV)鉴定为安氏隐孢子虫(C.andersoni)。 展开更多
关键词 牛隐孢子虫 安氏隐孢子虫 18S RRNA基因 巢式PCR—RFLP
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巢式PCR-RFLP法对江西省乙型肝炎病毒Bj和Ba基因亚型的初步鉴定
10
作者 张华 温志立 +3 位作者 易冬英 黄神安 向天新 吴平 《肝脏》 2009年第3期215-218,共4页
关键词 pcr-rflp 基因亚型 巢式PCR 乙型肝炎病毒 江西省 Ba HBV基因型 鉴定
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巢式PCR-RFLP检测rs9263726位点的实验研究
11
作者 钟柳英 张泳 +1 位作者 顾取良 何震宇 《生物过程》 CAS 2021年第3期46-53,共8页
目的:rs9263726位点(G】A)之A等位基因是预测别嘌呤醇致严重不良反应风险的遗传标记,本研究旨在建立一种直接使用口腔上皮细胞进行PCR结合FokI酶切检测该位点基因型的方法。方法:自行设计扩增产物包含FokI内对照识别序列的引物,以样本... 目的:rs9263726位点(G】A)之A等位基因是预测别嘌呤醇致严重不良反应风险的遗传标记,本研究旨在建立一种直接使用口腔上皮细胞进行PCR结合FokI酶切检测该位点基因型的方法。方法:自行设计扩增产物包含FokI内对照识别序列的引物,以样本的口腔上皮细胞粗处理物为模板,通过巢式PCR扩增跨越rs9263726位点的靶片段,进而根据PCR产物的FokI酶切图谱判断样本基因型。结果:所检样本均能扩增出预期大小的PCR产物,3种基因型的酶切图谱特征明显,且经测序验证结果一致。结论:初步建立了一种基于巢式PCR-RFLP检测rs9263726位点的改良方法,具有简便、快速、准确、低成本等特点。 展开更多
关键词 巢式pcr-rflp rs9263726位点 别嘌呤醇 个体化用药
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半巢式PCR-RFLP法快速鉴定临床标本中的皮肤癣菌 被引量:1
12
作者 张明莉 杨国玲 +1 位作者 李文利 安利佳 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期729-732,共4页
目的探索快速鉴定皮肤癣菌病临床标本中致病菌的分子生物学方法。方法以皮肤癣菌的基因组DNA为模板,采用一对半真菌通用引物(NS5、ITS1、ITS4)行半巢式PCR扩增rDNA上的ITS段,用限制性内切酶BciT130Ⅰ及DdeⅠ酶切目的片段,凝胶电泳。结果... 目的探索快速鉴定皮肤癣菌病临床标本中致病菌的分子生物学方法。方法以皮肤癣菌的基因组DNA为模板,采用一对半真菌通用引物(NS5、ITS1、ITS4)行半巢式PCR扩增rDNA上的ITS段,用限制性内切酶BciT130Ⅰ及DdeⅠ酶切目的片段,凝胶电泳。结果7种65株常见皮肤癣菌培养菌株和17例临床标本的半巢式PCR-RFLP图谱特异;且临床标本与相应的培养菌株酶切图谱一致。结论半巢式PCR-RFLP方法适合培养菌株和临床标本病原菌的快速准确鉴定。 展开更多
关键词 皮肤癣菌 皮肤癣菌病 巢式PCR RFLP 鉴定
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不同身体测量指标与脑卒中发病风险的巢式病例对照研究
13
作者 王小楠 阮晓楠 +7 位作者 刘杨 吴抗 邱桦 刘庆平 宋家慧 高娇娇 周弋 刘晓琳 《中国全科医学》 北大核心 2026年第8期1020-1028,共9页
背景随着我国经济社会发展,超重/肥胖患病率显著上升,成为重大公共卫生问题。目前,常用的肥胖判断指标BMI和腰围(WC)无法区分皮下脂肪和内脏脂肪,而内脏脂肪与慢性病密切相关。因此,研究新型身体测量指标与脑卒中发病风险的相关性具有... 背景随着我国经济社会发展,超重/肥胖患病率显著上升,成为重大公共卫生问题。目前,常用的肥胖判断指标BMI和腰围(WC)无法区分皮下脂肪和内脏脂肪,而内脏脂肪与慢性病密切相关。因此,研究新型身体测量指标与脑卒中发病风险的相关性具有重要意义。目的探索不同身体测量指标与脑卒中发生的相关性及发生风险预测能力,旨在为社区开展慢性病健康管理及心脑血管疾病监测提供依据。方法基于浦东新区慢性病及其危险因素监测队列研究项目,采用巢式病例对照研究设计,选取参加2016年和2019年现场调查的研究对象,观察随访至2023-12-31,以发生脑卒中研究对象作为病例组,未发生者作为对照组。采用统一设计的流行病学调查表收集一般人口学资料、既往疾病史及家族史、相关疾病主要危险因素。收集体格检查和实验室检查指标。采用Logistic回归模型和限制性立方样条(RCS)回归模型分析不同身体测量指标与脑卒中之间的关联,并利用受试者工作特征(ROC)曲线评价不同身体测量指标对脑卒中的预测能力,采用DeLong检验进行两两比较。结果纳入分析的15440名研究对象中,共有930名发生脑卒中。BMI、WC、身体圆度指数(BRI)和中国人内脏脂肪指数(CVAI)每升高1个单位,脑卒中发生风险分别增加3.8%(OR=1.038,95%CI=1.017~1.058)、1.2%(OR=1.012,95%CI=1.004~1.020)、10.6%(OR=1.106,95%CI=1.042~1.174)、0.5%(OR=1.005,95%CI=1.003~1.007)(P<0.05)。RCS回归模型分析发现,BMI、WC和BRI与脑卒中发生风险之间存在线性剂量-反应关系(P_(总)<0.05,P_(非线性)>0.05),CVAI与脑卒中发生风险之间存在非线性剂量-反应关系(P_(总)<0.001,P_(非线性)=0.009)。ROC曲线结果显示,CVAI预测脑卒中发生风险的能力(AUC=0.66)优于BMI(Z=-12.713,P<0.001)、WC(Z=-13.512,P<0.001)和BRI(Z=-8.696,P<0.001)。结论BMI、WC、BRI和CVAI与脑卒中发病风险存在相关性。CVAI预测脑卒中发生风险优于BMI、WC和BRI,因此可作为预测脑卒中发生风险的适用指标。同时提示基层慢性病健康管理要进行综合管理,并做好体重管理,重点关注内脏肥胖的影响。 展开更多
关键词 脑卒中 内脏脂肪 巢式病例对照 LOGISTIC回归模型 风险预测
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高血压合并高脂血症患者短期血压控制影响因素的巢式病例对照研究
14
作者 农集刚 吕胜杰 +3 位作者 李丹 陈小琴 梁华信 汪向军 《齐齐哈尔医学院学报》 2026年第2期139-145,共7页
目的探究高血压合并高脂血症患者短期血压控制的影响因素。方法采用巢式病例对照研究方法,对血压控制不达标的高血压合并高脂血症患者进行第14天随访,选择281例随访血压不达标的患者为病例组,按照基线血压等级、性别和年龄±2岁进行... 目的探究高血压合并高脂血症患者短期血压控制的影响因素。方法采用巢式病例对照研究方法,对血压控制不达标的高血压合并高脂血症患者进行第14天随访,选择281例随访血压不达标的患者为病例组,按照基线血压等级、性别和年龄±2岁进行1︰1个体匹配选出281例随访血压达标的患者为对照组,影响因素分析采用单因素和多因素Logistic回归分析。结果病例组和对照组的锻炼、饮酒、服用降压药和服用降脂药的比例差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic单因素回归分析结果显示,锻炼(OR=0.655,95%CI:0.47~0.912)、规律服用降压药(OR=0.524,95%CI:0.319~0.861)和服用降脂药(OR=0.61,95%CI:0.408~0.913)的高血压合并高脂血症患者短期血压不达标的风险降低,饮酒(OR=1.709,95%CI:1.142~2.557)是短期血压不达标的危险因素。Logistic多因素回归分析结果显示,锻炼、规律服用降压药和服用降脂药是高血压合并高脂血症患者短期血压不达标的保护因素,饮酒患者的短期血压不达标的风险升高。结论锻炼、规律服用降压药和服用降脂药是高血压合并高脂血症患者短期血压不达标的保护因素,饮酒是短期血压不达标的危险因素。 展开更多
关键词 高血压 高脂血症 血压控制 巢式病例对照
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水貂病毒性肠炎巢式PCR,PCR-RFLP联合诊断方法的建立 被引量:5
15
作者 易立 闫喜军 +4 位作者 罗彬 王建科 赵传芳 吴威 程世鹏 《经济动物学报》 CAS 2008年第4期204-208,共5页
根据水貂肠炎细小病毒的VP2基因序列设计4条特异性引物,建立了检测水貂肠炎细小病毒的巢式PCR方法。采用一次扩增的敏感性来检测5个TCID50/mL的细小病毒MEVB株,二次扩增的敏感性来检测0.05个TCID50/mL的细小病毒MEVB株。同时,利用该方... 根据水貂肠炎细小病毒的VP2基因序列设计4条特异性引物,建立了检测水貂肠炎细小病毒的巢式PCR方法。采用一次扩增的敏感性来检测5个TCID50/mL的细小病毒MEVB株,二次扩增的敏感性来检测0.05个TCID50/mL的细小病毒MEVB株。同时,利用该方法第一轮PCR产物酶切,能够区分犬细小病毒与水貂肠炎细小病毒,具有重要的实用价值和应用的前景。 展开更多
关键词 水貂肠炎细小病毒 巢式PCR pcr-rflp
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半巢式PCR和PCR-RFLP法诊断耐青霉素肺炎链球菌的比较 被引量:1
16
作者 丁晶晶 张德平 +1 位作者 邵海枫 施毅 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期81-83,共3页
目的评价半巢式PCR和PCR-RFLP法用于诊断肺炎链球菌青霉素耐药性的价值。方法收集130株肺炎链球菌临床分离株和50株健康人定植株,琼脂稀释法测定青霉素最低抑菌浓度(MIC),半巢式PCR、PCR-RFLP法测定对青霉素耐药性。结果健康人定植株均... 目的评价半巢式PCR和PCR-RFLP法用于诊断肺炎链球菌青霉素耐药性的价值。方法收集130株肺炎链球菌临床分离株和50株健康人定植株,琼脂稀释法测定青霉素最低抑菌浓度(MIC),半巢式PCR、PCR-RFLP法测定对青霉素耐药性。结果健康人定植株均对青霉素敏感,临床分离株青霉素敏感率、中介率、耐药率分别为25.4%、23.1%和51.5%;当MIC为0.25~0.5μg/ml时,半巢式PCR法检测青霉素耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为86.7%、98.6%、86.7%和98.6%;当MIC≥1μg/ml时,对应值分别为96.2%、97.6%、97.4%和96.4%。而PCR-RFLP法诊断中介株的敏感性仅34.2%;诊断耐药株的阳性预测值仅67.5%。结论半巢式PCR法优于PCR-RFLP法,可用于对耐青霉素肺炎链球菌的快速检测;PCR-RFLP敏感性不高,可用于分子流行病学分析。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 青霉素 耐药性 巢式PCR pcr-rflp
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应用PCR-RFLP和巢式PCR检测黄瓜尖镰孢菌 被引量:7
17
作者 陈微 李永刚 文景芝 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期209-214,共6页
以3株黄瓜尖镰孢菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumarinum)、23株镰孢菌属(Fusarium spp.)真菌和分离自土壤的20株真菌、6株细菌和7株放线菌为材料,采用化学裂解法提取总DNA,进行PCR-RFLP和巢式PCR检测,试验证明PCR-RFLP程序不能完全... 以3株黄瓜尖镰孢菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumarinum)、23株镰孢菌属(Fusarium spp.)真菌和分离自土壤的20株真菌、6株细菌和7株放线菌为材料,采用化学裂解法提取总DNA,进行PCR-RFLP和巢式PCR检测,试验证明PCR-RFLP程序不能完全区分Fusarium属内不同种,而巢式PCR对黄瓜尖镰孢菌具有特异性。运用优化的PCR-RFLP和巢式PCR检测程序对染病黄瓜组织进行了检测,结果表明,两种方法均可在接种发病早期(未显症时)检测出黄瓜枯萎病菌,PCR-RFLP在感病品种接种后3d即可检测到病原菌,而巢式PCR在接种后5d才能检测到病原菌。 展开更多
关键词 黄瓜枯萎病 黄瓜尖镰孢菌 PCR—RFLP 巢式PCR
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多浪羊MHC-DRB1基因巢式PCR-RFLP多态性分析
18
作者 申红 杜迎春 +2 位作者 贾斌 陈玉林 彭林泽 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2010年第21期9-12,共4页
应用巢式PCR-RFLP方法,对200只多浪羊的MHC-DRB1外显子2的遗传多态性进行检测,并对基因型频率和等位基因频率进行统计。结果表明:多浪羊的MHC-DRB1基因外显子2在SacII和MvaⅠ的酶切位点存在多态性,分别检测出了2、2种等位基因,出现了3、... 应用巢式PCR-RFLP方法,对200只多浪羊的MHC-DRB1外显子2的遗传多态性进行检测,并对基因型频率和等位基因频率进行统计。结果表明:多浪羊的MHC-DRB1基因外显子2在SacII和MvaⅠ的酶切位点存在多态性,分别检测出了2、2种等位基因,出现了3、3种基因型。由于MHC-DRB 1为多碱基突变的基因位点,综合2种限制性内切酶的酶切结果,在多浪羊中共发现6种基因型;平均杂合度和多态信息含量处于中等多态程度,χ2适合性检验结果表明,多浪羊的MHC-DRB 1外显子2在MvaⅠ酶切位点达到Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),但Sac II酶切位点未达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。 展开更多
关键词 MHC-DRB1 pcr-rflp 多态性 多浪羊
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水貂震颤综合征-星状病毒的检测及半巢式RT-PCR检测方法的建立
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作者 王旭 刘德凯 +3 位作者 赵碧田 黄泽楷 李海名 张彦龙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期143-150,共8页
为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进... 为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进行组织病理学观察,采用RT-PCR方法对水貂常见病原[星状病毒(Astrovirus,AstV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)]进行检测,并对检测的病原进行遗传进化分析;然后建立针对病原建立半巢式RT-PCR检测方法,对建立的方法进行条件(退火温度、Taq酶体积、引物体积)优化、特异性试验、敏感性试验、重复性试验,并采用该方法对119份病死幼貂的脑组织样本进行检测。结果表明:病死水貂大脑-皮质内部分神经细胞变性、坏死,皮质内部分血管周围有炎性细胞浸润,出现管套现象,皮质内胶质细胞散在性浸润,与神经毒性AstV引起的特征性病理变化相似;其他组织未见明显病理变化。从病死幼貂脑组织中仅检测到AstV,命名为SMS-AstV-Harbin。从基于AstV ORF1b基因构建的遗传进化树中可见,SMS-AstVHarbin与Mink astrovirus isolate-SMS-AstV(登录号为GU985458.1)处于同一小分支,亲缘关系较近;与Human astrovirus UK1(登录号为KM358468.1)、Canine astrovirus strain HUN/2012/8(登录号为KX599354.1)、Feline astrovirus 2(登录号为KF499111.1)、Porcine astrovirus 3 strain NI-Brain/173-2016a/HUN(登录号为KY073231.1)、Bovine astrovirus CH13(登录号为KM035759.1)、Ovine astrovirus 2(登录号为NC_002469.1)处于不同小分支,亲缘关系较远。建立的半巢式RT-PCR检测方法的最优退火温度、Taq酶(5 U/μL)体积和引物(10μmol/L)体积分别为52℃、0.5μL和1μL。该方法能特异性地检出SMS-AstV,其cDNA最低检测限为1 pg/μL,且对3份样本的3次重复检测结果均一致。采用该方法检出SMS-AstV阳性样本117份,阳性率为98.32%。说明引起该养殖场幼貂死亡的病原为SMS-AstV,针对该病原建立的半巢式RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于快速检测。 展开更多
关键词 水貂震颤综合征 水貂星状病毒 病理学观察 病毒鉴定 遗传进化分析 巢式RT-PCR方法
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啮齿类实验动物4种常见病原菌多重巢式PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 席晓霞 孙婧 +3 位作者 郭家熙 张丽娟 刘晓玲 段天林 《中兽医医药杂志》 2025年第4期18-25,共8页
建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过... 建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过引物长短差异分别设计通用引物和特异性引物,通过巢式PCR检测各种样本中的病原菌。结果显示,优化后的四重巢式PCR方法可对同一样品中的4种致病菌模板进行特异性扩增,无交叉反应;多重巢式PCR方法可从标准菌株DNA模板中扩增出待检病原菌DNA片段,而阴性对照组均未能检出;多重巢式PCR方法的检测灵敏度明显高于普通多重PCR方法(≤10-2pg/μL vs≤1 pg/μL);多重巢式PCR方法可从混合感染的样本中特异性地检测出4种致病菌;在实际应用中,多重巢式PCR可检测出病原菌感染的阳性样本,且检出率高于普通多重PCR方法。本试验建立的4种病原菌多重巢式PCR检测方法可同时检测动物咽拭子或肛拭子等临床样本中的多种病原菌,与普通多重PCR方法相比,该方法具有省时省力、灵敏性高、特异性强等优点。 展开更多
关键词 多重巢式PCR 鼠伤寒沙门菌 鼠棒状杆菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
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