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低氧诱导因子1α及2α在人BMSCs成软骨分化中的表达规律 被引量：3
1
作者 龚铭 黄胜 +6 位作者 罗嘉全 黄保丁 周治宇 代学俊 高蔓蔓 李亮平 邹学农 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期857-862,共6页
目的通过诱导人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成软骨分化,观察低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-2α在分化过程中的表达趋势,为阐明HIF参与调控成软骨分化机制提供依据。方法对已消化的悬浮hBMSCs进行离心沉淀... 目的通过诱导人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成软骨分化,观察低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-2α在分化过程中的表达趋势,为阐明HIF参与调控成软骨分化机制提供依据。方法对已消化的悬浮hBMSCs进行离心沉淀,形成细胞微球。将细胞微球分为2组,对照组加入含2%FBS的H-DMEM培养基,成软骨诱导组加入软骨诱导液,于低氧(2%O2)条件下培养。培养3周后行甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,培养1周行Western blot检测HIF-1α、HIF-2α蛋白表达,培养1、2、3周行实时定量PCR检测成软骨分化关键转录因子及相关标志基因表达。结果甲苯胺蓝染色示,对照组染色细胞核整体分布稀疏,而成软骨诱导组分布致密;成软骨诱导组细胞外基质染色明显较对照组深。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示阳性信号主要位于细胞质内;与成软骨诱导组相比,对照组细胞核分布较稀疏且着色浅。Western blot检测示,培养1周成软骨诱导组HIF-1α和HIF-2α蛋白相对表达量均显著低于对照组(t=8.345,P=0.001;t=7.683,P=0.002)。实时定量PCR检测示,与对照组比较,成软骨诱导组HIF-1αmRNA相对表达量在培养1周时降低、2周时显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3周时两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。成软骨诱导组培养各时间点HIF-2αmRNA相对表达量均显著低于对照组,Sox-9 mRNA相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。培养过程中,Ⅱ型胶原及Ⅹ型胶原表达呈逐渐增加趋势,第2、3周时两者的mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。而成软骨诱导组多聚蛋白聚糖mRNA相对表达量在各时间点均高于对照组(P<0.05)。结论 HIF-1α参与诱导hBMSCs成软骨分化过程,但HIF-2α表达在该分化过程中受抑制。 展开更多
关键词 低氧诱导因子 人bmscs 成软骨分化
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腺病毒介导Wnt10b基因调控人BMSCs成骨成脂分化的体外实验研究 被引量：1
2
作者 周勇 邹昌 +7 位作者 闵理 石锐 张闻力 罗翼 彭静 段宏 屠重棋 张晖 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1284-1291,共8页
目的体外实验研究腺病毒介导Wnt10b基因表达与抑制对人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成骨成脂分化的调控。方法取健康成人髂骨骨髓分离培养hBMSCs,取第4代细胞并分为4组:A、B、C组分别加入Wnt10b基因表达腺病毒载体、Wnt10b基因沉默(Wnt10b... 目的体外实验研究腺病毒介导Wnt10b基因表达与抑制对人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成骨成脂分化的调控。方法取健康成人髂骨骨髓分离培养hBMSCs,取第4代细胞并分为4组:A、B、C组分别加入Wnt10b基因表达腺病毒载体、Wnt10b基因沉默(Wnt10b-shRNA)腺病毒载体和空病毒转染细胞,D组细胞不进行转染作为空白对照组。各组进行成骨、成脂和无诱导培养,通过ALP染色、茜素红染色和油红O染色检测Wnt10b对各组成骨成脂分化的影响,通过实时荧光定量PCR检测成骨和成脂相关基因表达,Western blot检测成骨和成脂相关蛋白表达,了解Wnt10b对hBMSCs成骨成脂转录和蛋白水平的影响。结果成骨诱导培养后ALP染色4组均呈阳性,A组呈强阳性,B组染色最弱;茜素红染色A组出现大量片状融合褐色矿化结节,B组见少许点状褐色矿化结节,C、D组出现大量点状褐色矿化结节。成脂诱导培养后油红O染色B、C、D组呈强阳性表现,其中B组最强;A组散在小团状着色区,数量较其他组明显减少。荧光定量PCR和Western blot结果示:A组成骨转录因子和蛋白表达高于B、C、D组,B组低于C、D组;而成脂转录因子和蛋白表达与成骨转录因子及蛋白表达情况相反。结论 Wnt10b基因高表达促进hBMSCs向成骨分化,低表达则促进成脂分化。 展开更多
关键词 Wnt10b基因 人bmscs 成骨分化 成脂分化
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白血病抑制因子联合bFGF对人BMSCs增殖及分化的影响 被引量：2
3
作者 施剑明 曹俊 +5 位作者 殷明 殷嫦嫦 程细高 谢荣辉 林思文 徐浚怀 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1150-1155,共6页
目的研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)联合bFGF对人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)增殖及分化的影响。方法取第4代hBMSCs根据培养条件不同分为4组:A组为对照组,加入完全培养基(含10%FBS的α-MEM)常规培养;B组加入含10 ng... 目的研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)联合bFGF对人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)增殖及分化的影响。方法取第4代hBMSCs根据培养条件不同分为4组:A组为对照组,加入完全培养基(含10%FBS的α-MEM)常规培养;B组加入含10 ng/mL LIF的完全培养基;C组加入含10 ng/mL bFGF的完全培养基;D组加入含10 ng/mL LIF和10 ng/mL bFGF的完全培养基。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)测定各组第4代hBMSCs生长曲线;倒置相差显微镜观察各组hBMSCs形态变化;流式细胞术检测各组第8代hBMSCs表面标志CD44、CD90、CD19、CD34表达情况。结果 4组细胞生长曲线均近似S形,且细胞增殖速率表现为D组>C组>B组>A组。各组细胞形态观察发现A组细胞较早出现衰老和分化现象;B组细胞早期形态维持较好,但增殖相对缓慢,后期出现部分衰老细胞;C组少量细胞呈神经样细胞分化,但增殖较快;D组细胞增殖迅速,且能长期维持hBMSCs形态特征。流式细胞术检测示,A、C组骨髓基质标志CD44、CD90表达较B、D组低;各组造血细胞标志CD19、CD34均呈阴性,组间差异不明显。结论 LIF联合bFGF不仅可以维持hBMSCs的多向分化潜能,而且能够促进其快速增殖。 展开更多
关键词 白血病抑制因子 BFGF 人bmscs 细胞增殖 细胞分化
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微小RNA-335-5p调控BMP-2对人BMSCs成骨分化的影响 被引量：6
4
作者 黄振明 蔡卓 +2 位作者 钱静 汪建雄 胡宁 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期781-786,共6页
目的探讨微小RNA(micro RNA,miR)-335-5p调控BMP-2对人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成骨分化的影响。方法体外培养hBMSCs,随机分为对照组(A组)、miR-335-5p mimics(模拟物)组(B组)、miR-335-5p mimics阴性对照组(C组)、miR-335-5p inhibit... 目的探讨微小RNA(micro RNA,miR)-335-5p调控BMP-2对人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成骨分化的影响。方法体外培养hBMSCs,随机分为对照组(A组)、miR-335-5p mimics(模拟物)组(B组)、miR-335-5p mimics阴性对照组(C组)、miR-335-5p inhibitor(抑制剂)组(D组)、miR-335-5p inhibitor阴性对照组(E组),分组处理后并诱导其成骨分化,行ALP及茜素红染色检测各组细胞成骨分化情况;采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-335-5p、BMP-2及成骨相关基因Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达;采用Western blot检测各组细胞Runx2、OPN、OCN、BMP-2蛋白表达情况。结果与A组比较,B组ALP阳性细胞相对比例,矿化结节相对比例,BMP-2、miR-335-5p、OCN、OPN、Runx2 mRNA相对表达量,Runx2、OPN、OCN、BMP-2蛋白相对表达量均明显升高,D组各指标均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);C、E组各指标与A组比较无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-335-5p可上调BMP-2表达,进而促进hBMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 微小RNA-335-5p BMP-2 人bmscs 成骨分化
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人BMSCs成神经分化过程中Wnt/β-catenin信号通路调控作用研究 被引量：1
5
作者 施剑明 殷明 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1276-1283,共8页
目的 探讨bFGF及EGF单独或联合诱导人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)向神经细胞分化的差异以及Wnt/β-catenin信号通路在分化过程中的调控作用。方法 取鉴定后的第4代hBMSCs,根据不同诱导条件分为对照组(A组)、EGF诱导组(B组)、bFGF诱导组(C... 目的 探讨bFGF及EGF单独或联合诱导人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)向神经细胞分化的差异以及Wnt/β-catenin信号通路在分化过程中的调控作用。方法 取鉴定后的第4代hBMSCs,根据不同诱导条件分为对照组(A组)、EGF诱导组(B组)、bFGF诱导组(C组)、EGF+bFGF诱导组(D组)以及EGF+bFGF+Dickkopf相关蛋白1(Dickkopf-related protein 1,DKK-1)诱导组(E组)。诱导培养7 d后,采用倒置荧光相差显微镜观察细胞形态,RT-PCR检测神经细胞[巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)]以及Wnt/β-catenin信号通路关键组件(β-catenin和Cyclin D1)基因水平表达变化,细胞免疫荧光染色以及Western blot检查检测神经细胞(Nestin、GFAP)以及Wnt/β-catenin信号通路关键组件[β-catenin、磷酸化β-catenin(phosphorylation β-catenin,P-β-catenin)、细胞胞质β-catenin(Cytoplasmic β-catenin)及细胞核内β-catenin(Nuclear β-catenin)]蛋白水平表达变化。结果 诱导培养后,与A、B组比较,C~E组细胞出现典型的神经样细胞变化,其中D组最明显。RT-PCR检测示与A组比较,C~E组Nestin、NSE、MAP-2,D、E组GFAP及B组NSE基因相对表达量升高;C、D组β-catenin以及B~D组Cyclin D1基因相对表达量升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。D组与E组比较,Nestin、NSE、MAP-2、GFAP、β-catenin、CyclinD1基因相对表达量均升高;与C组比较Nestin基因相对表达量下降,NSE、MAP-2、GFAP基因相对表达量均升高;组间差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光染色观察示C~E组NSE、GFAP阳性率与A组比较均升高,D组高于C、E组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测示,C、D组NSE蛋白相对表达量较A组升高,D组高于C、E组;C~E组GFAP蛋白相对表达量较A组升高、D组高于E组;差异均有统计学意义(P<0.05)。C、D组与A组比较以及D组与E组比较,β-catenin、Cytoplasmic β-catenin、Nuclear β-catenin蛋白相对表达量以及β-catenin核质比均升高,P-β-catenin蛋白相对表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 bFGF可诱导hBMSCs向神经细胞分化,而EGF无此作用,但能增强b FGF诱导作用;Wnt/β-catenin信号通路在这一过程中发挥正向调控效应。 展开更多
关键词 人bmscs bFGF EGF 成神经分化 Wnt/β-catenin信号通路
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