目的探究微小RNA-144-5p(microRNA-144-5p,miR-144-5p)靶向细胞自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,Atg5)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制及其与细胞自噬的关系。方法选择雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组、空白转...目的探究微小RNA-144-5p(microRNA-144-5p,miR-144-5p)靶向细胞自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,Atg5)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制及其与细胞自噬的关系。方法选择雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组、空白转染组和低表达组,每组6只。术前14 d,低表达组注射腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)-miR-144-5p拮抗剂(5×1011 vg),空白转染组注射AAV-空白转染对照载体。采用冠状动脉左前降支结扎术建立大鼠缺血再灌注损伤模型。假手术组仅在左前降支下方穿线而不结扎,其余各组进行缺血30 min、再灌注2 h处理。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法检测心脏缺血区域面积;采用苏木精-伊红染色观察心肌组织病理形态变化。Western blot检测心肌细胞中微观相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)-B、Atg5和自噬降解底物P62表达。采用双荧光素酶报告基因试验检测miR-144-5p与Atg5的结合作用。结果与假手术组比较,模型组心肌组织miR-144-5p表达明显升高,差异有统计学意义(2.91±0.12 vs 0.93±0.04,P<0.05)。与假手术组比较,模型组心肌损伤程度、心肌梗死面积、P62表达明显升高,Atg5和LC3-B表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白转染组比较,低表达组心肌损伤程度、心肌梗死面积、P62表达明显降低,Atg5和LC3-B表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光酶素实验显示,Atg5存在与miR-144-5p互补结合的靶位点。结论miR-144-5p可靶向Atg5调控心肌自噬从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。展开更多
研究旨在建立医学研究委员会5号细胞系(medical research council 5,MRC-5)工作细胞库,并对MRC-5工作细胞库应用于狂犬病灭活疫苗的生产进行相关研究。按照《中华人民共和国药典》建立MRC-5工作细胞库,根据药典规定进行检验,并对MRC-5...研究旨在建立医学研究委员会5号细胞系(medical research council 5,MRC-5)工作细胞库,并对MRC-5工作细胞库应用于狂犬病灭活疫苗的生产进行相关研究。按照《中华人民共和国药典》建立MRC-5工作细胞库,根据药典规定进行检验,并对MRC-5细胞生长曲线、传代稳定性及狂犬病病毒适应性进行研究。结果表明,建立的MRC-5细胞工作库细胞呈长梭形,边缘清晰,轮廓清楚,细胞成活率为99.03%,无菌检查、支原体检查及细胞外源因子检查均符合规定。MRC-5细胞生长曲线呈S形,细胞在2~3 d进入对数生长期,细胞倍增时间为21 h,连续传代至66代细胞形态正常。36、38、40和42代的MRC-5细胞接种PM株狂犬病病毒,测得病毒滴度均值分别为6.57±0.21、6.40±0.26、6.23±0.21和6.40±0.17lgCCID_(50)·mL^(-1),变异系数(coefficient of variation,CV)在2.70%~4.13%。综上,研究建立的MRC-5工作细胞库符合《中华人民共和国药典》规定,传代稳定性良好,对狂犬病病毒较为敏感,可以用于狂犬病疫苗的生产。展开更多
文摘目的探究微小RNA-144-5p(microRNA-144-5p,miR-144-5p)靶向细胞自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,Atg5)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制及其与细胞自噬的关系。方法选择雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组、空白转染组和低表达组,每组6只。术前14 d,低表达组注射腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)-miR-144-5p拮抗剂(5×1011 vg),空白转染组注射AAV-空白转染对照载体。采用冠状动脉左前降支结扎术建立大鼠缺血再灌注损伤模型。假手术组仅在左前降支下方穿线而不结扎,其余各组进行缺血30 min、再灌注2 h处理。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法检测心脏缺血区域面积;采用苏木精-伊红染色观察心肌组织病理形态变化。Western blot检测心肌细胞中微观相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)-B、Atg5和自噬降解底物P62表达。采用双荧光素酶报告基因试验检测miR-144-5p与Atg5的结合作用。结果与假手术组比较,模型组心肌组织miR-144-5p表达明显升高,差异有统计学意义(2.91±0.12 vs 0.93±0.04,P<0.05)。与假手术组比较,模型组心肌损伤程度、心肌梗死面积、P62表达明显升高,Atg5和LC3-B表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白转染组比较,低表达组心肌损伤程度、心肌梗死面积、P62表达明显降低,Atg5和LC3-B表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光酶素实验显示,Atg5存在与miR-144-5p互补结合的靶位点。结论miR-144-5p可靶向Atg5调控心肌自噬从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。
文摘研究旨在建立医学研究委员会5号细胞系(medical research council 5,MRC-5)工作细胞库,并对MRC-5工作细胞库应用于狂犬病灭活疫苗的生产进行相关研究。按照《中华人民共和国药典》建立MRC-5工作细胞库,根据药典规定进行检验,并对MRC-5细胞生长曲线、传代稳定性及狂犬病病毒适应性进行研究。结果表明,建立的MRC-5细胞工作库细胞呈长梭形,边缘清晰,轮廓清楚,细胞成活率为99.03%,无菌检查、支原体检查及细胞外源因子检查均符合规定。MRC-5细胞生长曲线呈S形,细胞在2~3 d进入对数生长期,细胞倍增时间为21 h,连续传代至66代细胞形态正常。36、38、40和42代的MRC-5细胞接种PM株狂犬病病毒,测得病毒滴度均值分别为6.57±0.21、6.40±0.26、6.23±0.21和6.40±0.17lgCCID_(50)·mL^(-1),变异系数(coefficient of variation,CV)在2.70%~4.13%。综上,研究建立的MRC-5工作细胞库符合《中华人民共和国药典》规定,传代稳定性良好,对狂犬病病毒较为敏感,可以用于狂犬病疫苗的生产。
