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外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达 被引量：10
1
作者 刘萍 夏立秋 +4 位作者 胡胜标 严礼 丁学知 张友明 喻子牛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期661-666,共6页
【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt... 【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失。将基因整合入染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法。【方法】本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12。并利用pKTF12质粒将cry1Ac基因定点整合入XBU001染色体上。【结果】利用载体pKTF12将cry1Ac定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响。重组菌株KCTF12中的cry1Ac基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体。与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势。【结论】定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 定点整合 同源重组 pKSV7 triggerfactor基因 CRY1AC基因
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TREM-1基因多态性与重症急性胰腺炎腹腔感染及其预后的关联 被引量：4
2
作者 尧娟 朱俊臣 +2 位作者 彭丽媛 刘怡林 李卉 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期567-572,共6页
目的 探讨重症急性胰腺炎(SAP)患者髓样细胞表达激发受体-1(TREM-1)基因多态性与腹腔感染及预后的关系.方法 选取2016年1月-2020年12月成都大学附属医院收治的130例SAP患者,其中合并腹腔感染者70例纳入感染组,未合并腹腔感染者60例纳入... 目的 探讨重症急性胰腺炎(SAP)患者髓样细胞表达激发受体-1(TREM-1)基因多态性与腹腔感染及预后的关系.方法 选取2016年1月-2020年12月成都大学附属医院收治的130例SAP患者,其中合并腹腔感染者70例纳入感染组,未合并腹腔感染者60例纳入未感染组,并依据患者预后情况将感染组患者分为生存组(n=56)和死亡组(n=14)两个亚组,所有患者均对TREM-1基因位点基因分型进行检测,比较不同组别基因型频率,通过Logistic回归分析SAP患者腹腔感染的危险因素,比较不同基因型患者外周血白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 腹腔感染SAP患者共培养分离病原菌129株,其中革兰阴性菌91株占70.54%,革兰阳性菌34株占26.36%、真菌4株占3.10%;感染组rs2234246基因位点中AA基因型比例高于未感染组(P<0.05);感染组rs2234246基因位点中A基因频率高于未感染组(P<0.05);腹腔积液、多器官功能障碍综合征、TREM-1基因rs2234246位点AA基因型是SAP患者并发腹腔感染的危险因素(P<0.05);感染组不同TREM-1基因型患者外周血IL-6、TNF-α水平均高于未感染组(P<0.05);感染组、未感染组TREM-1基因rs2234246位点AA基因型外周血IL-6、TNF-α水平高于GA基因型,GA基因型高于GG基因型(P<0.05);感染组不同预后状态生存与死亡患者TREM-1基因rs2234246、rs2234237基因型、基因频率差异无统计学意义.结论 TREM-1基因rs2234246位点AA基因型是SAP患者并发腹部感染的危险基因型,感染发生后AA基因型患者IL-6、TNF-α表达水平高于其他基因型,rs2234246、rs2234237位点多态性与SAP并发腹部感染患者预后无关. 展开更多
关键词 重症急性胰腺炎 腹腔感染 危险因素 髓样细胞表达激发受体-1 基因 预后 关联
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人CC趋化因子配体17重组蛋白的原核表达、纯化及趋化活性分析 被引量：1
3
作者 曹拓 魏准 彭湘明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第10期1128-1133,1142,共7页
目的原核表达人CC趋化因子配体17(CC chemokine ligand 17,CCL17)重组蛋白,纯化并分析其趋化活性。方法根据GenBank中登录的人CCL17基因序列(NM002987.2)设计特异性引物,扩增人静脉全血CCL17基因,将其PCR产物与pCold-TFM载体连接构建重... 目的原核表达人CC趋化因子配体17(CC chemokine ligand 17,CCL17)重组蛋白,纯化并分析其趋化活性。方法根据GenBank中登录的人CCL17基因序列(NM002987.2)设计特异性引物,扩增人静脉全血CCL17基因,将其PCR产物与pCold-TFM载体连接构建重组表达质粒pCold-TFM-CCL17,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达;表达产物经镍亲和层析,酶切移除融合蛋白的6×His-TF标签后,进行离子交换亲和层析纯化;凝胶过滤层析分析其聚合特性,分光光度法分析蛋白浓度,应用表达CCL17受体的Hut78细胞进行趋化试验。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组表达质粒pCold-TFM-CCL17构建正确;融合蛋白以可溶性形式表达;纯化的人CCL17重组蛋白相对分子质量约为11000,纯度达95%以上,其蛋白峰呈均匀、对称的单个色谱峰,色谱峰面积占总曲线面积95%以上,蛋白表达量≥6 mg/L,其可趋化Hut78细胞发生迁移。结论成功表达了可溶性、高纯度、高产量、具备一定趋化活性的人CCL17重组蛋白,为其工业化生产及科研应用提供了参考。 展开更多
关键词 人CC趋化因子配体17基因 原核细胞 基因表达 纯化 趋化活性 分子伴侣 触发因子
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