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桑树主要乳胶蛋白基因MaMLP423启动子的克隆与表达
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作者 杨金宏 陈贵攀 +3 位作者 凌君 楚渠 陈正余 孔卫青 《陕西农业科学》 2025年第10期1-5,34,共6页
主要乳胶蛋白(major latex protein,MLP)是Bet v 1超家族成员,参与植物的各种应激反应。本研究对桑树主要乳胶蛋白基因MaMLP423的启动子pMaMLP423进行了生物信息学分析和克隆表达分析。结果显示pMaMLP423具有启动子必需的TATA-box和CAAT... 主要乳胶蛋白(major latex protein,MLP)是Bet v 1超家族成员,参与植物的各种应激反应。本研究对桑树主要乳胶蛋白基因MaMLP423的启动子pMaMLP423进行了生物信息学分析和克隆表达分析。结果显示pMaMLP423具有启动子必需的TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件,还有参与光响应(Box 4、TCT-motif、GA-motif等)、脱落酸反应(ABRE、AAGAA-motif)、乙烯响应(ERE)、干旱诱导(MYB、MBS等)、创伤响应(WUN-motif)等顺式作用元件。构建植物表达载体pMaMLP423及缺失部分序列的pMaMLP423ΔS1和pMaMLP423ΔS2,转化烟草瞬时表达,qPCR和组织化学染色检测显示,三个启动子均能驱动下游GUS基因的表达,但缺失S1和S2启动子的活性降低。外源激素脱落酸和乙烯利能显著诱导MaMLP4232基因的表达。本研究为深入了解MaMLP423的功能和作用提供了参考。 展开更多
关键词 桑树 主要乳胶蛋白MLP423基因 启动子 载体构建 GUS染色
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拟南芥AtCHiC基因启动子表达载体的构建及鉴定
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作者 于鑫 宋慧 +3 位作者 胡敏 陈逸凡 叶敏 江力 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期241-244,共4页
土壤重金属镉污染造成作物产量和品质的下降,严重威胁人类健康。AtCHiC基因编码拟南芥GH-18家族中的一种几丁质酶是否参与植物镉胁迫响应的调控尚不清楚。文章利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术克隆AtCHiC启动子区... 土壤重金属镉污染造成作物产量和品质的下降,严重威胁人类健康。AtCHiC基因编码拟南芥GH-18家族中的一种几丁质酶是否参与植物镉胁迫响应的调控尚不清楚。文章利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术克隆AtCHiC启动子区域,构建ProAtCHiC-GUS融合表达载体,并通过浸花法将该融合表达载体转化到野生型拟南芥中,鉴定出纯合阳性转基因植株。进一步对转基因植株进行重金属镉胁迫处理,发现其显著诱导植株GUS活性的提高,表明AtCHiC基因可能参与拟南芥镉胁迫响应的调控。该研究为进一步研究非生物胁迫下AtCHiC基因功能提供重要依据。 展开更多
关键词 拟南芥 AtCHiC基因 镉胁迫 载体构建 GUS染色
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拟南芥AtRBOHD基因表达载体构建及鉴定分析
3
作者 叶敏 樊婷婷 +2 位作者 宋慧 张景 陈逸凡 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第9期1218-1221,1242,共5页
AtRBOHD基因作为植物体内重要的NADPH氧化酶基因,可将氧催化生成活性氧以响应逆境胁迫,但其是否参与植物重金属镉胁迫的调控尚不清楚。文章以拟南芥为实验材料,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术克隆出AtRBOHD基... AtRBOHD基因作为植物体内重要的NADPH氧化酶基因,可将氧催化生成活性氧以响应逆境胁迫,但其是否参与植物重金属镉胁迫的调控尚不清楚。文章以拟南芥为实验材料,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术克隆出AtRBOHD基因的启动子区域,成功构建ProAtRBOHD:GUS融合表达载体;并通过浸花法将该融合表达载体转化到野生型拟南芥中,通过抗性筛选、PCR鉴定、抗性分离鉴定筛选出纯合阳性转基因植株。进一步对获得的转基因材料进行镉胁迫处理,发现经处理后的转基因材料GUS活性提高。为初步研究镉胁迫下AtRBOHD基因功能和转录水平变化提供重要依据。 展开更多
关键词 拟南芥 镉胁迫 AtRBOHD基因 载体构建 GUS染色
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压缩矩形坯的应变矢量分析解法 被引量:3
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作者 赵德文 王磊 +1 位作者 刘相华 王国栋 《塑性工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期85-88,共4页
提出了将能量泛函应变张量表示为应变矢量点积,而不采用不等式放大被积函数的直接积分法,进而使被积函数转换为可积的线性组合函数,并得到平面变形锻压矩形坯能量泛函的解析解。该解经实验与能量法、上界法及滑移线法解析结果及实测结... 提出了将能量泛函应变张量表示为应变矢量点积,而不采用不等式放大被积函数的直接积分法,进而使被积函数转换为可积的线性组合函数,并得到平面变形锻压矩形坯能量泛函的解析解。该解经实验与能量法、上界法及滑移线法解析结果及实测结果进行了比较,表明应变矢量分析结果低于数值结果和上界结果,与压力机实测指示的压力值误差为1.6%。 展开更多
关键词 泛函 锻压 应变矢量 点积 解析解
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木材变色真菌种类及其传播媒介 被引量:1
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作者 杨卫君 赵桂华 王有科 《西部林业科学》 CAS 2009年第1期112-115,共4页
从引起木材变色的真菌种类,木材变色真菌的传播媒介,木材变色真菌传媒小蠹虫种类及其携菌部位,以及传媒小蠹虫与木材变色真菌间的交互作用上综述了木材变色真菌种类的鉴定状况及其传播媒介的机理。
关键词 木材变色真菌 传播媒介小蠹虫
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含35S启动子的粟酒裂殖酵母表达载体的构建及功能鉴定 被引量:3
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作者 王贺 王丕武 +1 位作者 洪洋 宋冰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期191-196,共6页
利用PCR技术从植物表达载体pBI121上先后克隆出GUS基因和35S-GUS-NOS基因序列,分别构建粟酒裂殖酵母重组表达载体pESP-2-GUS和pESP-2-35S.GUS.NOS,并将它们转化到粟酒裂殖酵母菌体中。通过对不同液体培养基中两种转化子的不同启动子启动... 利用PCR技术从植物表达载体pBI121上先后克隆出GUS基因和35S-GUS-NOS基因序列,分别构建粟酒裂殖酵母重组表达载体pESP-2-GUS和pESP-2-35S.GUS.NOS,并将它们转化到粟酒裂殖酵母菌体中。通过对不同液体培养基中两种转化子的不同启动子启动GUS基因表达产物的GUS染色分析与比较,证明连入的35S启动子能够替代pESP-2自身受维生素B1浓度调控的启动子,从而降低了培养基的成本,为今后工业上利用粟酒裂殖酵母发酵生产产品,提高经济效益,奠定了基础。 展开更多
关键词 粟酒裂殖酵母 35S启动子 载体改造 GUS染色
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基于色度向量聚类的保险片识别及插接方法 被引量:6
7
作者 尤波 陈国杰 +2 位作者 梁强 陈潇磊 武坤 《仪器仪表学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第7期191-199,共9页
针对汽车保险盒的生产所面临的汽车保险片准确识别和快速插接的难题,提出一种基于色度向量聚类的汽车保险片识别及插接方法。该方法使用CCD工业摄像机采集汽车保险片图像信息,通过平均背景法对图像中的背景进行消除后采用污点修复技术... 针对汽车保险盒的生产所面临的汽车保险片准确识别和快速插接的难题,提出一种基于色度向量聚类的汽车保险片识别及插接方法。该方法使用CCD工业摄像机采集汽车保险片图像信息,通过平均背景法对图像中的背景进行消除后采用污点修复技术进行图像增强,再以不同类别的汽车保险片的色度中心向量为特征提取依据,完成对颜色信息基于色度向量聚类的特征提取,最后通过将提取的特征矢量输入支持向量机,达到对不同类型保险片的识别分类,最终控制SCARA四轴机器人依据分类信息完成精确插接环节。经过大量实验证明,所设计的汽车保险片识别及插接方法对常用的9类汽车保险片识别正确率达到99.7%,在平均插接周期为1 s时的汽车保险盒插接的正确率达95.6%以上。 展开更多
关键词 平均背景法 污点修复处理 色度向量聚类 支持向量机 SCARA机器人
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2012-2021年新疆生产建设兵团第六师动物鼠疫监测分析 被引量:2
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作者 林超波 《疾病预防控制通报》 2022年第5期25-28,共4页
目的 了解生产建设兵团第六师沿准噶尔盆地荒漠一带动物间鼠疫流行规律,为预测鼠疫疫情提供科学依据,并提出防控措施。方法 收集整理2012-2021年第六师沿准噶尔盆地荒漠一带鼠疫宿主动物、媒介、血清学和病原学监测资料,采用EXCEL 2013... 目的 了解生产建设兵团第六师沿准噶尔盆地荒漠一带动物间鼠疫流行规律,为预测鼠疫疫情提供科学依据,并提出防控措施。方法 收集整理2012-2021年第六师沿准噶尔盆地荒漠一带鼠疫宿主动物、媒介、血清学和病原学监测资料,采用EXCEL 2013整理数据,使用SPSS 24.0软件统计分析数据。结果 2012-2021年第六师沿准噶尔盆地荒漠一带大沙鼠密度在3.71~6.05只/hm^(2),年均鼠密度为4.84只/hm2;夜行鼠年均捕获率为6.21%,不同年度夜行鼠捕获率差异有统计学意义(χ^(2)=283.446,P<0.05);大沙鼠体蚤总蚤指数为6.24,年均染蚤率为60.92%,不同年度鼠染蚤率差异有统计学意义(χ^(2)=370.093,P<0.05);大沙鼠洞干蚤指数2.08,染蚤率63.84%;共检测大沙鼠血清2 149份,鼠疫F1抗体阳性血清54份;共检测大沙鼠脏器1 181份,从活体大沙鼠中分离鼠疫菌1株。结论 第六师沿准噶尔盆地荒漠一带动物间鼠疫疫情仍处于较为活跃的流行状态;应加强联防联控,持续做好鼠疫监测,及时开展风险评估,防止人间鼠疫疫情的发生和流行。 展开更多
关键词 鼠疫 宿主 媒介 染蚤率 鼠疫菌
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ω~3-脂肪酸脱氢酶基因启动子表达载体的构建与转化
9
作者 高兴旺 王贤磊 +1 位作者 韩瑞 李冠 《新疆大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第3期357-362,共6页
为了研究拟南芥ω3-脂肪酸脱氢酶基因启动子的表达特性,利用PCR扩增获得拟南芥ω3-脂肪酸脱氢酶基因的启动子(FAD8P),构建植物表达载体并转化拟南芥.转基因拟南芥种子经Kan筛选获得阳性植株,然后12°低温处理并进行GUS染色.GUS染色... 为了研究拟南芥ω3-脂肪酸脱氢酶基因启动子的表达特性,利用PCR扩增获得拟南芥ω3-脂肪酸脱氢酶基因的启动子(FAD8P),构建植物表达载体并转化拟南芥.转基因拟南芥种子经Kan筛选获得阳性植株,然后12°低温处理并进行GUS染色.GUS染色表明FAD8P于12°处理54h后可表达.本实验结果为ω3-脂肪酸脱氢酶基因功能的进一步研究奠定了基础. 展开更多
关键词 拟南芥 ω3-脂肪酸脱氢酶 启动子 表达载体 GUS染色
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一种根癌农杆菌介导的耐盐椒样薄荷含芽茎段转化系统
10
作者 赵忠娟 魏艳丽 +2 位作者 李纪顺 王贻莲 杨合同 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期126-132,共7页
椒样薄荷的转基因技术是提高精油产量和品质的重要手段,为解决耐盐椒样薄荷叶片不定芽诱导过程中易褐化,难分化,不适合作为转基因外植体的问题,利用含芽的椒样薄荷茎段作为外植体建立了一种根癌农杆菌介导的外源基因转化体系。利用正交... 椒样薄荷的转基因技术是提高精油产量和品质的重要手段,为解决耐盐椒样薄荷叶片不定芽诱导过程中易褐化,难分化,不适合作为转基因外植体的问题,利用含芽的椒样薄荷茎段作为外植体建立了一种根癌农杆菌介导的外源基因转化体系。利用正交试验对转化所用的根癌农杆菌菌液浓度、转化时间和共培养时间进行优化,结果显示:3个因素对转化效果的影响作用表现为转化时间(B)>菌液浓度(A)>共培养时间(C),筛选出的最优转化条件为菌液浓度为OD_(600)=0.8,转化时间为15 min,共培养时间为3 d。对不同转化液组分进行优化筛选,结果获得最适的转化液组分为:1/5MS+0.5 g/L MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)+1%葡萄糖+2%蔗糖,PH5.4。利用不同植物表达载体进行转化,并通过基因组PCR和GUS染色进行转化植株的阳性检测,结果表明该转化体系适用于多种植物表达载体的转化,容易获得再生植株,为耐盐椒样薄荷的基因转化提供新的方法与体系。 展开更多
关键词 椒样薄荷 茎段 根癌农杆菌 植物表达载体 基因组PCR GUS染色
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甘蓝型油菜BnaFIL基因启动子的克隆与表达分析 被引量:3
11
作者 陈静 胡蓉 +2 位作者 刘勇 秦艺 熊兴华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期53-59,共7页
为了进一步了解启动子在甘蓝型油菜FIL基因(BnaFIL)表达调控中的作用,根据甘蓝型油菜基因组数据,以甘蓝型油菜叶片提取的DNA为模板,对甘蓝型油菜BnaFIL基因的启动子序列pBnaFIL进行克隆,长度为1326 bp。采用PlantCARE在线分析软件对该... 为了进一步了解启动子在甘蓝型油菜FIL基因(BnaFIL)表达调控中的作用,根据甘蓝型油菜基因组数据,以甘蓝型油菜叶片提取的DNA为模板,对甘蓝型油菜BnaFIL基因的启动子序列pBnaFIL进行克隆,长度为1326 bp。采用PlantCARE在线分析软件对该启动子序列进行生物信息学序列分析,结果表明,该序列含有参与光反应的部分保守DNA模块以及CAAT-box和TATA-box等核心启动子必备元件,与分生组织表达有关的顺式作用的调控元件CAT-box以及光敏反应元件。通过该启动子序列替换pBI121植物表达载体上的CaMV35S启动子,使该启动子与GUS基因融合获得pBnaFIL-GUS表达载体,将载体通过农杆菌花序浸染的方法转入拟南芥中,获得了早花启动子重组质粒阳性转基因株系和晚花启动子重组质粒阳性转基因株系。之后对转基因拟南芥植株进行GUS染色分析,对启动子的表达效果进行了检测,最终在不同的转基因拟南芥植株中均发现了GUS基因的表达。结果表明,早花材料与晚花材料中启动子表达强弱存在差异,早花材料启动子的驱动基因表达效果比晚花材料启动子的驱动效果要好,由此推断,启动子的驱动效果对油菜开花早晚进行了调控,导致FIL基因在不同材料中的表达效果不一致。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 BnaFIL基因 启动子 GUS染色 表达载体
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原位染色检测慢病毒载体转录通读方法的建立 被引量:1
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作者 高越 檀硕 +1 位作者 任兆瑞 张敬之 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期55-60,共6页
慢病毒载体作为基因导入系统已被多次应用于基因治疗试验当中,近年来受到了广泛关注。转录通读是慢病毒载体应用过程中存在的潜在不安全因素之一。为了进一步完善慢病毒载体转录通读的检测方法,使检测结果更加直观准确,在已建立的在转... 慢病毒载体作为基因导入系统已被多次应用于基因治疗试验当中,近年来受到了广泛关注。转录通读是慢病毒载体应用过程中存在的潜在不安全因素之一。为了进一步完善慢病毒载体转录通读的检测方法,使检测结果更加直观准确,在已建立的在转录水平检测其转录通读的基础上,进一步模拟病毒载体整合入基因组的状态,于原病毒载体3'-LTR后插入经密码子优化的Lac Z报告基因。经转染细胞后进行原位染色,发生通读现象的细胞会被染成蓝色,从而在蛋白质水平直观地体现慢病毒载体的通读情况,说明所建立的方法是准确可行的。所得结论与q RTPCR方法在转录水平检测的结果是平行相一致。原位染色检测法的建立为慢病毒载体转录通读的检测、提高慢病毒载体生物安全性的研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 慢病毒载体 转录通读 原位染色 原病毒载体
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陆地棉GhSDP1及其启动子的克隆与表达分析 被引量:3
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作者 刘萌萌 韩立军 +2 位作者 刘宝玲 薛金爱 李润植 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期34-43,共10页
三酰基甘油脂肪酶(SDP1)是催化三酰甘油降解的关键酶,在植物油脂代谢调控中起着重要作用。克隆棉花SDP1并研究其在3种胁迫下的表达分析,为解析棉花SDP1的生物学功能提供依据。以陆地棉品种冀丰1271为试材,克隆GhSDP1编码序列和上游启动... 三酰基甘油脂肪酶(SDP1)是催化三酰甘油降解的关键酶,在植物油脂代谢调控中起着重要作用。克隆棉花SDP1并研究其在3种胁迫下的表达分析,为解析棉花SDP1的生物学功能提供依据。以陆地棉品种冀丰1271为试材,克隆GhSDP1编码序列和上游启动子序列;利用PlantCARE分析GhSDP1启动子区顺式作用元件;qRT-PCR检测逆境胁迫下GhSDP1的表达谱;通过烟草瞬时表达pGhSDP1启动子+GUS载体检测启动子活性。结果表明,GhSDP1的编码序列为2 541 bp,其在盐、低温和干旱胁迫下呈差异表达模式。pGhSDP1除具有启动子所必需的TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有多个与光响应、激素响应及逆境应答等相关的顺式作用元件。棉花pGhSDP1启动子能驱动GUS蛋白高效表达,具有较强的启动子活性。研究揭示了棉花GhSDP1参与胁迫应答的新功能。 展开更多
关键词 陆地棉 SDP1 启动子 载体构建 GUS染色
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拟南芥CWINV1启动子GUS表达载体构建及转基因植株的鉴定 被引量:1
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作者 程姣 黄弈 任春梅 《作物研究》 2016年第3期237-240,共4页
CWINV是编码细胞壁蔗糖转化酶的基因。为深入探讨CWINV基因的表达调控机理,构建了拟南芥CWINV1基因启动子的GUS融合表达载体并转入拟南芥,获得了转基因植株。GUS染色的结果进一步验证了重组表达载体的正确性和实用性。
关键词 拟南芥 CWINV1 载体构建 GUS染色
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烟草根特异NtR19基因终止子的克隆及功能分析 被引量:1
15
作者 蔡翠雅 庄宇慧 +3 位作者 张冲 曾缘欢 陈顺辉 庄伟建 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期466-471,共6页
为了开发具有自主知识产权的且来源于烟草的终止子,本研究根据烟草根特异NtR19基因的3'UTR序列设计引物,从烟草基因组中克隆并获得了该基因的终止子(T19),并构建植物表达载体转化翠碧一号烟草,通过分子检测和GUS染色验证了NtR19基... 为了开发具有自主知识产权的且来源于烟草的终止子,本研究根据烟草根特异NtR19基因的3'UTR序列设计引物,从烟草基因组中克隆并获得了该基因的终止子(T19),并构建植物表达载体转化翠碧一号烟草,通过分子检测和GUS染色验证了NtR19基因终止子具有转录终止的功能,同时也说明NtR19基因全长mRNA的3'UTR可以作为终止子加以利用,使用来自烟草的终止子能在一定程度上解决外源基因安全性的研究,这对转基因的安全性提供了资源基础。 展开更多
关键词 烟草 NtR19 终止子 载体构建 GUS染色
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拟轮枝镰孢菌染色方法与荧光菌株构建
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作者 孔铭 朱金洁 +2 位作者 祁显涛 谢传晓 刘昌林 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第S1期252-258,共7页
拟轮枝镰孢菌显色方法的建立可以明确其在玉米植株中的侵染途径,进一步确定其致病作用机制。以拟轮枝镰孢菌为研究对象,探讨FDA、台盼蓝、甲苯胺蓝、酸性品红、碱性品红、FM4-64、转红色荧光载体等显色方法对拟轮枝镰孢菌真菌孢子和接... 拟轮枝镰孢菌显色方法的建立可以明确其在玉米植株中的侵染途径,进一步确定其致病作用机制。以拟轮枝镰孢菌为研究对象,探讨FDA、台盼蓝、甲苯胺蓝、酸性品红、碱性品红、FM4-64、转红色荧光载体等显色方法对拟轮枝镰孢菌真菌孢子和接种拟轮枝镰孢菌的玉米幼苗根系的染色效果,建立一种拟轮枝镰孢菌显色示踪法。结果发现,5%碱性品红和1%甲苯胺蓝对拟轮枝镰孢菌孢子染色效果较好,颜色明显、结构清晰,5.00 g/L FDA、0.4%台盼蓝、0.50 g/L酸性品红染色剂进行染色后,拟轮枝镰孢菌孢子能染上极浅的颜色,很难观察到孢子形态;对玉米幼苗根系染色剂染色对于根腐的观察,发现0.4%台盼蓝、1%甲苯胺蓝染色后玉米的根系会产生蓝色和棕色,可以明显看出棕色为玉米被拟轮枝镰孢菌侵染后发生根腐的部位,而0.50 g/L酸性品红和5%碱性品红染色过的则不能明显看出发生根腐的部位;对拟轮枝镰孢菌孢子的红色荧光显色观察发现,FM4-64颜色较深、结构不清晰、对观察时间有限制,而转红色荧光载体后荧光颜色明显、结构清晰、对观察时间无要求,后期可用于拟轮枝镰孢菌引起玉米、小麦等穗(粒)腐病的致病机理研究。综合比较之后,转红色荧光载体的拟轮枝镰孢菌比其他染色方法在致病机理研究等方面更具优势。 展开更多
关键词 玉米穗腐病 拟轮枝镰孢菌 荧光载体 接种 染色
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改进的多叉决策树在大学专业选择系统的应用
17
作者 郑陶 柴瑞敏 《计算机系统应用》 2010年第3期150-153,共4页
考生在高考后对大学专业的选择是其职业生涯的起点。大学专业选择系统可以测定考生的人格特性,根据以往大量数据中提取的模型帮助他们选择适合自身的专业。借助平面向量参考系改进的决策树算法,可以挖掘出训练集中隐含的规则,构建高精... 考生在高考后对大学专业的选择是其职业生涯的起点。大学专业选择系统可以测定考生的人格特性,根据以往大量数据中提取的模型帮助他们选择适合自身的专业。借助平面向量参考系改进的决策树算法,可以挖掘出训练集中隐含的规则,构建高精度的评判模型,从而避免了以往利用专家系统的方法构建时过分依赖先验知识所产生的误差,更客观的为考生匹配适合的专业。实验证明,算法的挖掘精度和效率都达到了令人满意的效果。 展开更多
关键词 多叉决策树 着色叶子节点 平面向量参考系 高考专业选择
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慢病毒载体介导稳定表达pAPN的Vero细胞系的构建及应用 被引量:2
18
作者 陆倩倩 王广操 +2 位作者 许长萌 王志建 王先炜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期419-426,共8页
将完整的pAPN序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-mCherry,并将该重组质粒pLVX-mCherry-pAPN与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP-VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染Vero细胞,经... 将完整的pAPN序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-mCherry,并将该重组质粒pLVX-mCherry-pAPN与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP-VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染Vero细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达pAPN的细胞。通过RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)证明了所获细胞株能够稳定表达pAPN蛋白,命名为Vero-APN-B6。IFA试验和TCID50试验结果表明:与Vero细胞相比,Vero-APN-B6更能促进猪流行性腹泻病毒(PEDV)的增殖。利用该细胞株成功地从猪小肠组织中分离到了PEDV SC-MS株;经过鉴定该毒株为变异毒株。 展开更多
关键词 pAPN 细胞系 慢病毒载体 PEDV SC-MS株
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拟南芥ProWRKY12-GUS转基因植株的构建及其染色分析 被引量:1
19
作者 陶曼芝 吴席 +3 位作者 朱香豫 王婷婷 贾亚峰 曹树青 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第9期1248-1251,共4页
为了解析植物缺铁的分子机制,文章对拟南芥突变体库缺铁胁迫进行筛选,并获得了缺铁胁迫响应突变体wrky12。为了进一步探究WRKY12基因的表达模式及其对缺铁胁迫的响应模式,构建WRKY12-GUS重组质粒,再以野生型拟南芥为模板构建重组植株。... 为了解析植物缺铁的分子机制,文章对拟南芥突变体库缺铁胁迫进行筛选,并获得了缺铁胁迫响应突变体wrky12。为了进一步探究WRKY12基因的表达模式及其对缺铁胁迫的响应模式,构建WRKY12-GUS重组质粒,再以野生型拟南芥为模板构建重组植株。从野生型拟南芥植株中克隆WRKY12启动子片段,将双酶切过后的WRKY12启动子片段连接到同样双酶切后的pART27-GUS质粒上,再将连接好的重组质粒转化到大肠杆菌中,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定出阳性单克隆,测序确定后即得到ProWRKY12-GUS重组质粒,再将重组质粒转入农杆菌中,同样通过菌落PCR得到阳性单克隆。最后采用浸花法侵染野生型拟南芥植株,通过抗性筛选和PCR鉴定的方法得到纯合的ProWRKY12-GUS转基因植株。为进一步研究WRKY12基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 拟南芥 WRKY12 载体 转基因植株 GUS染色分析
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拟南芥WRKY13基因表达载体构建及鉴定分析
20
作者 胡敏 宋慧 +3 位作者 叶敏 陈逸凡 于鑫 樊婷婷 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第10期1368-1371,共4页
铁是植物生长所必需的微量元素,目前植物受到缺铁胁迫的现象广泛存在,严重影响了植物的生长,减少了作物的产量。因此筛选和克隆植物缺铁胁迫耐受基因对解决农业生产问题具有极大的科学价值和现实意义。文章以拟南芥为实验材料,通过聚合... 铁是植物生长所必需的微量元素,目前植物受到缺铁胁迫的现象广泛存在,严重影响了植物的生长,减少了作物的产量。因此筛选和克隆植物缺铁胁迫耐受基因对解决农业生产问题具有极大的科学价值和现实意义。文章以拟南芥为实验材料,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术克隆WRKY13基因的启动子区域,成功构建了ProWRKY13∶GUS融合表达载体;利用浸花法将ProWRKY13∶GUS载体转化拟南芥,经鉴定分析后可知,获得了阳性转基因植株。对转基因植株进行缺铁诱导的GUS组织染色,实验结果为研究缺铁胁迫下WRKY13基因的功能及转录水平变化提供了重要依据。 展开更多
关键词 拟南芥 逆境胁迫 WRKY13基因 载体构建 GUS染色
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