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用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体ββ基因整合在集胞藻6803中表达
被引量:
12
1
作者
宋凌云
施定基
+4 位作者
宁叶
罗娜
邵宁
俞梅敏
茹炳根
《Acta Botanica Sinica》
CSCD
2001年第4期399-404,共6页
将集胞藻 (Synechocystissp .)PCC 6 80 3上psbB的一段序列 (从 # 6 93bp到 # 2 5 6 3bp)插入pBluescriptKS的多克隆位点 ,构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的 ββ基因插入中间载体pRL_439上启动子PpsbA的下游 ,并将pRL_ββ...
将集胞藻 (Synechocystissp .)PCC 6 80 3上psbB的一段序列 (从 # 6 93bp到 # 2 5 6 3bp)插入pBluescriptKS的多克隆位点 ,构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的 ββ基因插入中间载体pRL_439上启动子PpsbA的下游 ,并将pRL_ββ上PpsbA和 ββ基因插入pKSB构建成整合表达载体pKSB_ββ。利用自然转化将整合表达载体导入集胞藻 6 80 3,并通过单交换同源重组使 ββ基因整合到集胞藻 6 80 3基因组DNA上。逐步提高氨苄青霉素浓度 ,筛选得到遗传性状稳定的转基因集胞藻 6 80 3。PCR检测转基因集胞藻 6 80 3,结果证实 ββ基因已整合到集胞藻 6 80 3的染色体上 ;Westernblotting结果表明 ,ββ基因在转基因集胞藻 6 80 3细胞中得到表达 ,ELISA测定表明在 5 0 μmol/L的Zn2 +诱导下 ββ在新鲜集胞藻 6 80 3中的蛋白表达量为 0 .739mg/g ;重金属耐受性实验表明 ,得到能耐受Cu2 +的转基因集胞藻 6 80 3。经原子吸收光谱法测定 ,转基因集胞藻 6 80 3在含低浓度Cu2 +(10 μmol/L)的培养液中对Cu2 +的去除率可达到 82 %
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关键词
人肝金属硫蛋白ββ突变体
集胞藻6803
单交换
同源重组
蓝藻基因工程
铜去除
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职称材料
题名
用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体ββ基因整合在集胞藻6803中表达
被引量:
12
1
作者
宋凌云
施定基
宁叶
罗娜
邵宁
俞梅敏
茹炳根
机构
北京大学生命科学学院
中国科学院植物研究所
出处
《Acta Botanica Sinica》
CSCD
2001年第4期399-404,共6页
基金
国家"九五"攻关项目 !(96_C0 2_0 4_0 5)&&
文摘
将集胞藻 (Synechocystissp .)PCC 6 80 3上psbB的一段序列 (从 # 6 93bp到 # 2 5 6 3bp)插入pBluescriptKS的多克隆位点 ,构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的 ββ基因插入中间载体pRL_439上启动子PpsbA的下游 ,并将pRL_ββ上PpsbA和 ββ基因插入pKSB构建成整合表达载体pKSB_ββ。利用自然转化将整合表达载体导入集胞藻 6 80 3,并通过单交换同源重组使 ββ基因整合到集胞藻 6 80 3基因组DNA上。逐步提高氨苄青霉素浓度 ,筛选得到遗传性状稳定的转基因集胞藻 6 80 3。PCR检测转基因集胞藻 6 80 3,结果证实 ββ基因已整合到集胞藻 6 80 3的染色体上 ;Westernblotting结果表明 ,ββ基因在转基因集胞藻 6 80 3细胞中得到表达 ,ELISA测定表明在 5 0 μmol/L的Zn2 +诱导下 ββ在新鲜集胞藻 6 80 3中的蛋白表达量为 0 .739mg/g ;重金属耐受性实验表明 ,得到能耐受Cu2 +的转基因集胞藻 6 80 3。经原子吸收光谱法测定 ,转基因集胞藻 6 80 3在含低浓度Cu2 +(10 μmol/L)的培养液中对Cu2 +的去除率可达到 82 %
关键词
人肝金属硫蛋白ββ突变体
集胞藻6803
单交换
同源重组
蓝藻基因工程
铜去除
Keywords
ββmutant gene of human liver metallothionein
Synechocystis sp. PCC 6803
single_crossover
homology recombination
genetic engineering of cyanobacteria
Cu 2+ _removal
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体ββ基因整合在集胞藻6803中表达
宋凌云
施定基
宁叶
罗娜
邵宁
俞梅敏
茹炳根
《Acta Botanica Sinica》
CSCD
2001
12
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参考文献
引证文献
统计分析
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