[目的]利用shRNA慢病毒载体构建敲低CTNNB1的A549细胞系,检测其对细胞增殖迁移及对趋化因子CCL4表达的影响。[方法]设计靶向CTNNB1基因的shRNA序列,克隆至pLKO.1慢病毒载体中得到重组干扰质粒。运用三质粒系统包装慢病毒;转导A549细胞...[目的]利用shRNA慢病毒载体构建敲低CTNNB1的A549细胞系,检测其对细胞增殖迁移及对趋化因子CCL4表达的影响。[方法]设计靶向CTNNB1基因的shRNA序列,克隆至pLKO.1慢病毒载体中得到重组干扰质粒。运用三质粒系统包装慢病毒;转导A549细胞后用梯度稀释法得到阳性单克隆细胞;采用Western blotting和qRT-PCR检测CTNNB1及其下游基因的mRNA和蛋白质表达水平;采用实时无标记细胞分析实验检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验评估细胞迁移能力。[结果]成功构建稳定敲低CTNNB1的A549细胞系,与A549-shNC相比,A549-shCTNNB1细胞中CTNNB1的mRNA表达降低(1.01±0.05 vs 0.40±0.004,P<0.0001),β-catenin的蛋白表达降低(0.95±0.10 vs 0.47±0.16,P<0.05);细胞增殖有减缓的趋势,增殖相关基因COX2、CCND1、c-MYC的mRNA表达降低(0.978±0.02 vs 0.66±0.09,P<0.01);MMP2/9的mRNA表达降低(0.98±0.001 vs 0.20±0.08,P<0.0001),MMP2/9蛋白表达降低(0.96±0.05 vs 0.70±0.05,P<0.05),细胞迁移能力减弱(0.91±0.02 vs 0.69±0.05,P<0.01);CCL4的mRNA表达上调(1.87±0.39 vs 6.27±0.60,P<0.001)。[结论]敲低CTNNB1的A549细胞增殖速度减缓,迁移能力减弱,且趋化因子CCL4的mRNA表达上调。展开更多
文摘[目的]利用shRNA慢病毒载体构建敲低CTNNB1的A549细胞系,检测其对细胞增殖迁移及对趋化因子CCL4表达的影响。[方法]设计靶向CTNNB1基因的shRNA序列,克隆至pLKO.1慢病毒载体中得到重组干扰质粒。运用三质粒系统包装慢病毒;转导A549细胞后用梯度稀释法得到阳性单克隆细胞;采用Western blotting和qRT-PCR检测CTNNB1及其下游基因的mRNA和蛋白质表达水平;采用实时无标记细胞分析实验检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验评估细胞迁移能力。[结果]成功构建稳定敲低CTNNB1的A549细胞系,与A549-shNC相比,A549-shCTNNB1细胞中CTNNB1的mRNA表达降低(1.01±0.05 vs 0.40±0.004,P<0.0001),β-catenin的蛋白表达降低(0.95±0.10 vs 0.47±0.16,P<0.05);细胞增殖有减缓的趋势,增殖相关基因COX2、CCND1、c-MYC的mRNA表达降低(0.978±0.02 vs 0.66±0.09,P<0.01);MMP2/9的mRNA表达降低(0.98±0.001 vs 0.20±0.08,P<0.0001),MMP2/9蛋白表达降低(0.96±0.05 vs 0.70±0.05,P<0.05),细胞迁移能力减弱(0.91±0.02 vs 0.69±0.05,P<0.01);CCL4的mRNA表达上调(1.87±0.39 vs 6.27±0.60,P<0.001)。[结论]敲低CTNNB1的A549细胞增殖速度减缓,迁移能力减弱,且趋化因子CCL4的mRNA表达上调。
