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四环素耐药基因tetM实时荧光PCR检测方法的建立
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作者 郭建峰 姜展樾 +5 位作者 王成然 马丽侠 易艳 蒋子敬 周李华 唐仁勇 《中国测试》 北大核心 2025年第S1期121-126,136,共7页
为快速准确检测四环素类抗生素耐药基因tetM,以tetM基因的保守序列为靶标序列,建立实时荧光PCR方法。筛选tetM基因特异性靶标序列,设计上下游引物和TaqMan荧光探针,优化20μL反应体系为(上下游引物和探针各终浓度为200 nmol·L^(-1)... 为快速准确检测四环素类抗生素耐药基因tetM,以tetM基因的保守序列为靶标序列,建立实时荧光PCR方法。筛选tetM基因特异性靶标序列,设计上下游引物和TaqMan荧光探针,优化20μL反应体系为(上下游引物和探针各终浓度为200 nmol·L^(-1)、MIX 10μL、ddH_(2)O 6.8μL),建立相关系数为0.9990的标准曲线,确定检出限为10 copies·μL^(-1),验证方法的特异性和重复性。结果表明,本研究所建立方法具有良好的线性关系、灵敏度高、特异性强,方法操作简便,耗时较短,可用于四环素耐药基因tetM的快速检测,也为其他抗生素耐药基因的检测提供方法参考,对耐药细菌污染治理以及保障公共卫生安全具有重要意义。 展开更多
关键词 耐药基因检测 四环素 实时荧光PCR 新污染物治理
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丙烯和1-甲基环丙烯处理对采后柿果实XTH基因表达的影响 被引量:8
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作者 祝庆刚 饶景萍 +1 位作者 田红炎 韩叶 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1278-1284,共7页
为了进一步探索木葡聚糖内糖基转移/水解酶(XTH)在柿(Diospyros kaki L.)采后软化中的分子调控机制,应用实时荧光定量PCR技术检测常温下丙烯和1-甲基环丙烯(1-MCP)处理的‘富平尖柿’果实中XTH基因表达量的变化。结果显示,丙烯处理能够... 为了进一步探索木葡聚糖内糖基转移/水解酶(XTH)在柿(Diospyros kaki L.)采后软化中的分子调控机制,应用实时荧光定量PCR技术检测常温下丙烯和1-甲基环丙烯(1-MCP)处理的‘富平尖柿’果实中XTH基因表达量的变化。结果显示,丙烯处理能够促进柿果实成熟软化,增加乙烯释放并使高峰提前到来,而1-MCP处理能够延缓果实软化,抑制乙烯释放。随着柿果实成熟软化推进,4个XTH基因呈现不同的表达方式,且丙烯处理促进了4个XTH基因的表达,而1-MCP处理则抑制它们的表达。其中,DkXTH1和DkXTH2在柿果实成熟软化过程中表达量较高,且二者表达高峰分别在果实成熟的初期和中期,说明DkXTH1和DkXTH2分别与采后柿果实初期和中后期的软化关系密切。结合乙烯释放量结果分析显示,柿果实XTH基因的表达受乙烯调控,对柿果实的成熟软化中具有一定的促进作用。 展开更多
关键词 丙烯 1-甲基环丙烯 XTH 采后 实时荧光定量PCR
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