弓形虫pcDNA3-ROP1 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察 被引量：6

1

作者 李薇 刘波 丑莉莉 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第3期239-240,共2页

目的观察弓形虫pcDNA3-ROP1DNA疫苗免疫BALB／C小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用．方法重组质粒用生理盐水稀释后，肌注免疫BALB／C小鼠．分别于免疫后5周和10周用ELISA法测定IgG抗体滴度；免疫鼠腹腔注射弓... 目的观察弓形虫pcDNA3-ROP1DNA疫苗免疫BALB／C小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用．方法重组质粒用生理盐水稀释后，肌注免疫BALB／C小鼠．分别于免疫后5周和10周用ELISA法测定IgG抗体滴度；免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染．结果经两次检测，均可测到特异性IgG抗体，且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高；弓形虫速殖子腹腔攻击感染免疫组小鼠的平均存活时间较对照组延长，统计学有显著性差异（P〈0．01）．结论弓形虫pcDNA3-ROP1质粒DNA疫苗能诱导BALB／C小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用． 展开更多

关键词 弓形虫 pcdna3-rop1 dna疫苗 体液免疫

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弓形体重组质粒pcDNA_3-SAG1免疫小鼠诱导的细胞免疫应答研究 被引量：2

2

作者 周永安 陈观今 +1 位作者 郭虹 吕芳丽 《山西临床医药》 2001年第5期335-338,共4页

目的 :用 pc DNA3- SAG1真核表达质粒直接免疫小鼠 ,观察 DNA免疫所诱导的小鼠细胞免疫应答 ,为研制弓形虫疫苗奠定基础。方法 :大量制备重组质粒 pc DAN3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内 ,每隔 2 1d接种一次 ,一共免疫三次。用 ... 目的 :用 pc DNA3- SAG1真核表达质粒直接免疫小鼠 ,观察 DNA免疫所诱导的小鼠细胞免疫应答 ,为研制弓形虫疫苗奠定基础。方法 :大量制备重组质粒 pc DAN3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内 ,每隔 2 1d接种一次 ,一共免疫三次。用 MTT方法对脾脏的 NK细胞和其淋巴细胞的转化率进行测定 ;采用免疫荧光法对 CD4+、CD8+ 细胞进行测定。结果 :实验组 NK细胞杀伤率为 :70 .0± 3.6 4,而 pc DNA3及空白对照分别为 :48.5± 6 .0 8和 47.0± 5 .93。实验组 NK细胞活性比对照组明显增高 (P<0 .0 5 ) ,而 pc DNA3质粒及空白对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;对 T淋巴细胞亚群 CD4+、CD8+进行动态分析 ,可见随着感染时间的延长 ,CD8+的数量逐渐上升 ,CD4+ / CD8+的比率逐渐下降 ,实验组与 pc DNA3质粒及空白对照有明显差异 (P<0 .0 5 ) ;Con A刺激小鼠淋巴细胞转化实验 ,能刺激免疫鼠及对照鼠淋巴细胞增生 ,实验组与 pc DNA3质粒及空白对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :重组质粒pc DNA3- SAG1免疫 BAL B/ c小鼠可诱导一定的细胞免疫。 展开更多

关键词 弓形体 重组质粒 pcdna3-SAG1 dna疫苗 细胞免疫 免疫应答

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核酸疫苗pcDNA3cC1小鼠体内表达的血清学分析

3

作者 章亚南 何晓文 +4 位作者 王芳 姜磊 任丁 李德安 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期957-958,共2页

关键词 疫苗 dna pcdna3 cC1 cC1循环抗原

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IL-2、15、22基因对CVB3 VP1 DNA疫苗免疫效果的影响

4

作者 房文亮 牛庆茂 +2 位作者 金玉怀 揣侠 王永祥 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期222-224,共3页

目的观察白细胞介素2(Interleukin2,IL2)、白细胞介素15(Interleukin15,IL15)和白细胞介素22(Interleukin22,IL22)基因对柯萨奇病毒(CoxasckievirusB3,CVB3)VP1DNA疫苗诱导小鼠免疫应答及保护作用的影响。方法取雄性BALBc小鼠,随机分为6... 目的观察白细胞介素2(Interleukin2,IL2)、白细胞介素15(Interleukin15,IL15)和白细胞介素22(Interleukin22,IL22)基因对柯萨奇病毒(CoxasckievirusB3,CVB3)VP1DNA疫苗诱导小鼠免疫应答及保护作用的影响。方法取雄性BALBc小鼠,随机分为6组,每组20只,分别肌内注射盐水、pcDNA3、pcDNA3VP1、pcDNA3IL2+pcDNA3VP1、pcDNA3IL15+pcDNA3VP1和pcDNA3IL22+pcDNA3VP1,每周1次,共3次,每次免疫后6d取血清用微量中和试验检测CVB3中和抗体,3次免疫后用800TCID50CVB3感染小鼠,观察小鼠的生存时间和生存率。结果pcDNA3VP1、pcDNA3IL2+pcDNA3VP1和pcDNA3IL15+pcDNA3VP1组均能诱导小鼠产生中和抗体,抗体滴度随免疫次数增加而提高。病毒攻击后,各组的生存率差异无显著意义,pcDNA3IL2+pcDNA3VP1和pcDNA3IL15+pcDNA3VP1组较其他4组生存时间明显延长。pcDNA3IL22+pcDNA3VP1组虽也能诱导小鼠产生中和抗体,但抗体滴度和生存情况无明显变化。结论IL2、IL15基因对CVB3VP1DNA疫苗诱导小鼠产生免疫应答和免疫保护有一定的增强作用,而IL22基因无明显作用。 展开更多

关键词 dna疫苗 IL-2 VP1 基因 免疫效果 pcdna3 BALB/c小鼠 白细胞介素 中和抗体 免疫应答 生存时间 抗体滴度 保护作用 试验检测 免疫次数 病毒攻击 增强作用 免疫保护 生存率 诱导 注射

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人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期蛋白L1 DNA疫苗的免疫原性及安全性

5

作者 李娟 孟淑芳 +3 位作者 张春涛 王佑春 尹红章 李德富 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期218-221,共4页

目的对HPV18型DNA疫苗的免疫原性和安全性进行初步评价。方法将HPV18L1基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建DNA疫苗质粒pcDNAL1。使用脂质体将重组质粒转染COS7细胞,用Westernblot检测体外瞬时表达的抗原。将重组质粒pcDNAL1肌肉注... 目的对HPV18型DNA疫苗的免疫原性和安全性进行初步评价。方法将HPV18L1基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建DNA疫苗质粒pcDNAL1。使用脂质体将重组质粒转染COS7细胞,用Westernblot检测体外瞬时表达的抗原。将重组质粒pcDNAL1肌肉注射BALBc小鼠(100μg只),加强免疫3次后分别采集血清,用ELISA法和Westernblot法检测抗体,实时荧光定量PCR法检测质粒的组织分布。采用ELISA法检测DNA疫苗免疫后抗核抗体和抗双链DNA抗体的效价。结果重组质粒可在真核细胞中有效地转录和表达HPV18L1蛋白。小鼠免疫后可检出较高滴度的抗HPV18L1抗体和特异条带。免疫后质粒主要分布在注射部位,且随着时间延长被清除;未检测到抗核抗体和抗双链DNA抗体。结论HPV18L1重组质粒可诱导小鼠产生特异的体液免疫反应,且该DNA疫苗是安全的,为进一步研制开发HPVDNA疫苗打下了基础。 展开更多

关键词 dna疫苗 免疫原性 人乳头瘤病毒 安全性 Western BALB/c小鼠 COS-7细胞 双链dna 晚期 pcdna3 真核表达载体 重组质粒 体液免疫反应 blot 抗核抗体 初步评价 L1基因 质粒转染 瞬时表达 肌肉注射 组织分布 PCR法 荧光定量

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弓形体SAG1基因DNA诱导小鼠体液免疫应答及保护性研究

6

作者 周永安 高宝英 +2 位作者 陈观今 郭虹 吕芳丽 《山西临床医药》 2001年第6期413-415,共3页

目的 :用重组真核表达质粒 pc DNA3- SAG1直接免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其 DNA免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法 :大量制备重组质粒 pc DNA3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内。抗体滴度用 EL ISA法进行测定 :采用 PC... 目的 :用重组真核表达质粒 pc DNA3- SAG1直接免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其 DNA免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法 :大量制备重组质粒 pc DNA3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内。抗体滴度用 EL ISA法进行测定 :采用 PCR方法对小鼠的血液组织外源基因进行检测 ;对试验组及对照组进行 RH株攻击感染 ,并对其进行分析。结果 :用 EL ISA法检测的抗体 Ig G滴度为 1∶ 2 5 6 0 ;免疫后三周、六个月从免疫鼠的血液组织中用 PCR仍可检测到特异的SAG1基因的存在 :体外弓形虫攻击感染实验组和对照组 ,可见实验组的存活时间较对照组时间延长 (P<0 .0 5 )。结论 :重组质粒 pc DNA3- SAG1免疫 BAL B/ 展开更多

关键词 弓形体 重组质粒pcdna3-SAG1 dna免疫 抗体 体液 免疫应答 小鼠

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抑癌基因p27^(Kip1)对肝癌细胞增生及DNA合成的影响

7

作者 安家泽 董宏林 窦科峰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第4期548-550,共3页

目的:探讨抑癌基因p27 Kip1对肝癌细胞的抑制作用方法:利用脂质体介导法将真核表达载体pcDNA3.1/Myc—His(+)C—p27Kip1基因导入肝癌细胞株HHCC细胞中,经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,用MTT、3H—TdR 掺入法和克隆形成实验观察抑癌基... 目的:探讨抑癌基因p27 Kip1对肝癌细胞的抑制作用方法:利用脂质体介导法将真核表达载体pcDNA3.1/Myc—His(+)C—p27Kip1基因导入肝癌细胞株HHCC细胞中,经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,用MTT、3H—TdR 掺入法和克隆形成实验观察抑癌基因p27Kip1对肝癌细胞增生及DNA合成的影响,电子显微镜技术探讨过表达的p27Kip1 抑制肝癌细胞生长的可能机制. 结果:抑癌基因p27Kip1对肝癌细胞增生及DNA合成均有明显抑制作用,抑制率达56%(P<0,01 vs转染空载体组),电镜结果显示肝癌细胞发生凋亡. 结论:抑癌基因p27Kip1可能通过诱导肝癌细胞凋亡抑制肝癌细胞生长. 展开更多

关键词 抑癌基因 肝癌细胞生长 P27^KIP1 增生 dna合成 抑制作用 过表达 细胞克隆 pcdna3 脂质体介导法

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人胰岛素样生长因子-1甄核表达质粒的构建及其在成肌细胞中的表达 被引量：4

8

作者 张鹏 陈世益 +1 位作者 陈疾忤 卫宏图 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期9-12,20,共5页

目的 :构建人胰岛素样生长因子 - 1(hIGF - 1)真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性。方法 :应用DNA重组方法将编码hIGF - 1cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(- )中 ,构建pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1真核... 目的 :构建人胰岛素样生长因子 - 1(hIGF - 1)真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性。方法 :应用DNA重组方法将编码hIGF - 1cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(- )中 ,构建pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1真核表达质粒 ;应用阳性脂质体介导的基因转染技术 ,将真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1瞬时转染C2C12成肌细胞中 ;采用RT -PCR及免疫组化染色等方法检测hIGF - 1基因在成肌细胞中的表达情况 ;应用MTT法检测转染后细胞上清液中hIGF - 1的生物活性。结果 :将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1转染成肌细胞后 ,hIGF - 1mRNA及蛋白表达水平明显增高 ;转染后的成肌细胞培养上清液具有促使成纤维细胞增殖的生物活性。结论 :成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1,其转染成肌细胞后可获得较高水平hIGF - 1蛋白的表达 ,所表达出hIGF - 1蛋白具有生物学活性。 展开更多

关键词 IGF-1 成肌细胞 真核表达质粒 转染 pcdna3 人胰岛素样生长因子-1 蛋白 dna重组 cdna克隆 IGF—1

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旋毛虫DNA疫苗在中国仓鼠卵巢细胞中的表达(英文) 被引量：2

9

作者 崔晶 王中全 +3 位作者 韩化敏 卫海燕 张红卫 李雍龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期266-270,F003,共6页

目的　观察编码旋毛虫相对分子质量 (Mr) 3 10 0 0抗原的DNA疫苗 (重组真核表达质粒pcDNA3 TspE1)在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中的体外表达 ,并分析其表达产物的抗原性。　方法　通过用阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0将重组质粒pcDNA... 目的　观察编码旋毛虫相对分子质量 (Mr) 3 10 0 0抗原的DNA疫苗 (重组真核表达质粒pcDNA3 TspE1)在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中的体外表达 ,并分析其表达产物的抗原性。　方法　通过用阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0将重组质粒pcDNA3 TspE1转染CHO细胞 ,G418筛选阳性克隆 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、间接荧光抗体试验 (I FAT)、十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)对表达产物进行鉴定。　结果　RT PCR结果显示 ,pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞在 876bp处有一条带 ,而用空质粒pcDNA3转染的CHO细胞未出现条带 ,表明pcDNA3 TspE1转染细胞中有TspE1基因转录。IFAT结果显示 ,pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞与重组融合蛋白免疫小鼠血清反应呈现亮绿色荧光 ,而pcDNA3转染的CHO细胞及未转染细胞呈现橘黄色。Westernblotting显示在pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞培养液中存在有一Mr约 3 10 0 0的蛋白带 ,且该条带能被重组融合蛋白免疫小鼠血清、旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫兔血清、感染旋毛虫的小鼠及旋毛虫病患者血清识别。　结论　重组质粒pcDNA3 TspE1可转染CHO细胞 ,旋毛虫TspE1基因可在转染的CHO细胞中表达 ,表达蛋白能分泌到细胞培养上清中且具有旋毛虫? 展开更多

关键词 pcdna3 转染 CHO细胞 旋毛虫 表达 血清 dna疫苗 E1基因 中国仓鼠卵巢细胞 重组融合蛋白

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HOGG1基因特异性锤头状核酶表达载体的构建及其在细胞中表达的研究 被引量：6

10

作者 张勤 张遵真 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2005年第3期207-209,共3页

目的 :设计并合成人 8-羟基鸟嘌呤 -DNA糖苷酶 (HOGG1)特异性的锤头状核酶 (hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A5 4 9细胞中的瞬时表达效应。方法 :运用计算机软件人工设计并合成核酶基因 (RZ) ,将核酶基因克... 目的 :设计并合成人 8-羟基鸟嘌呤 -DNA糖苷酶 (HOGG1)特异性的锤头状核酶 (hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A5 4 9细胞中的瞬时表达效应。方法 :运用计算机软件人工设计并合成核酶基因 (RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,阳性重组子由BamHI和EcoRI酶切 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE 6的介导下引入人肺腺癌细胞株A5 4 9,RT -PCR(逆转录多聚酶链反应 )法半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。结果 :经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3 .1(+)的BamHI和EcoRI酶切位点之间 ,命名为pcDNA3 .1(+) -RZ。经RT -PCR法检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降 36 % ,与空白细胞组差异有显著性。结论 :成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在A5 4 9细胞内对靶基因HOGG1具有抑制其表达的作用。 展开更多

关键词 HOGG1 锤头状核酶 真核表达载体 特异性 pcdna3 酶基因 酶表达 重组子 酶切位点 dna测序

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B7-1和新型隐球菌DHA1基因嵌合重组质粒的构建

11

作者 沈纪川 谢奇峰 +2 位作者 翁锦生 顾琳 姚集鲁 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2003年第1期1-5,共5页

目的构建包含新型隐球菌细胞免疫主要相关基因—迟发超敏反应抗原基因(delayed-type hypersentivity antigen 1,DHA1)与小鼠共刺激分子B7-1的嵌合重组质粒。方法设计合成两对寡核苷酸引物,用PCR法分别从pUCmB7-1TM和新型隐球菌重组质粒p... 目的构建包含新型隐球菌细胞免疫主要相关基因—迟发超敏反应抗原基因(delayed-type hypersentivity antigen 1,DHA1)与小鼠共刺激分子B7-1的嵌合重组质粒。方法设计合成两对寡核苷酸引物,用PCR法分别从pUCmB7-1TM和新型隐球菌重组质粒pcDNA3-DHA1中特异扩增出编码B7-1和DHA1的基因片段(921和984bp),分别用HindⅢ、EcoRⅠ、XbaⅠ酶切后,逐个定向连接到质粒pcDNA3中,转化宿主菌DH-5α,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致,证实符合表达框架。结论本实验成功构建了新型隐球菌嵌合重组质粒pcDNA3-B7-1-DHA1,为进一步研究新型隐球菌DNA免疫奠定了基础。 展开更多

关键词 新型隐球菌 B7-1 重组质粒 pcdna3 嵌合 基因 DHA 酶切 方法设计 dna测序

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pcDNA3-HBV瞬时转染对巨噬细胞活性的影响

12

作者 高立芬 孙汶生 +5 位作者 马春红 张利宁 曹英林 刘素侠 梁晓红 刘华 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期95-98,共4页

目的利用HBV全基因真核细胞表达载体pcDNA3-HBV研究HBV感染后对巨噬细胞活性的影响,探讨慢性乙型肝炎患者免疫耐受发生的机制。方法常规制备小鼠腹腔巨噬细胞,分别将pcDNA3-HBV、pcDNA3质粒DNA与绿色荧光蛋白(GFP)的质粒DNApEGFPN1以9∶... 目的利用HBV全基因真核细胞表达载体pcDNA3-HBV研究HBV感染后对巨噬细胞活性的影响,探讨慢性乙型肝炎患者免疫耐受发生的机制。方法常规制备小鼠腹腔巨噬细胞,分别将pcDNA3-HBV、pcDNA3质粒DNA与绿色荧光蛋白(GFP)的质粒DNApEGFPN1以9∶1混合,利用脂质体转染试剂盒,共转染小鼠腹腔巨噬细胞。转染后72h,半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测HBV前S1、TNFα、白介素(IL)-1βmRNA的表达,流式细胞术测GFP的表达强度、检测核因子κB(NF-κB)蛋白的表达,利用Griess反应检测转染前后培养上清液中NO的水平。结果流式细胞术结果表明,pcDNA3-HBV与pcDNA3转染的巨噬细胞中GFP的表达率无明显差异,pcDNA3-HBV转染的巨噬细胞中检测到前S1mRNA的表达。通过与βactin相比,pcDNA3-HBV转染的巨噬细胞中TNF-α、IL-1βmRNA的表达量显著低于空载体对照组(P<0.01);pcDNA3HBV转染的巨噬细胞表达NFκ-BRelA蛋白的百分数与空载体对照组相当,但平均荧光强度显著低于空载体对照组(pcDNA3HBV转染组为125.05;pcDNA3转染组为203.88);pcDNA3-HBV转染组巨噬细胞产生NO的水平显著低于pcDNA3转染组(分别为15.0±0.6,45.0±1.3,P<0.01)。结论pcDNA3HBV转染后使巨噬细胞NFκB活性显著降低,TNF-α、IL-1βmRNA的表达及NO的产生水平明显下降。 展开更多

关键词 巨噬细胞活性 瞬时转染 半定量逆转录聚合酶链反应 慢性乙型肝炎患者 小鼠腹腔巨噬细胞 pcdna3 HBV转染 真核细胞表达载体 β-actin 流式细胞术 IL-1β mRNA HBV全基因 绿色荧光蛋白 平均荧光强度 免疫耐受 质粒dna 脂质体转染

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乙肝病毒前S/S抗原的重组表达质粒对HBV转基因小鼠的免疫治疗效应 被引量：2

13

作者 周陶友 陈敏 +5 位作者 赵连三 王松 陈守春 何芳 刘丽 唐红 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第7期844-847,共4页

目的:观察重组表达质粒pcDNA3.1-S2S和pcDNA3.1-S1S2S对HBVDNA复制和抗原表达的抑制效果.方法:以能表达乙肝表面抗原主蛋白S(HBsAg)的重组真核表达质粒为骨架,构建了分别含有HBV前S1抗原和/或前S2抗原编码基因的pcDNA3.1-S1S2S,pcDNA3.1... 目的:观察重组表达质粒pcDNA3.1-S2S和pcDNA3.1-S1S2S对HBVDNA复制和抗原表达的抑制效果.方法:以能表达乙肝表面抗原主蛋白S(HBsAg)的重组真核表达质粒为骨架,构建了分别含有HBV前S1抗原和/或前S2抗原编码基因的pcDNA3.1-S1S2S,pcDNA3.1-S2S,并各以100μg肌肉接种C57BL/6HBVDNA转基因小鼠,2,4wk后各加强免疫1次.然后动态检测小鼠血清HBVDNA水平的变化、抗-HBs和前S2抗体的诱生,以及肝组织内HBsAg、前S2抗原的消长情况.结果:小鼠肝组织内HBsAg,前S2抗原呈逐渐减弱的趋势,8wk后各有1/3的小鼠已不能检出.pcDNA3.1-S1S2S组接种后4,8,12wk抗-HBs阳转率分别为50%、67%、100%,明显高于pcDNA3.1-S2S组(17%、33%、50%)(P<0.05);而前S2抗体阳转率均低于17%.接种后8wk,12wk,pcDNA3.1-S1S2S组和pcDNA3.1-S2S组小鼠血清HBVDNA水平明显下降,均低于自身接种前、接种后4wk以及同期对照组(P<0.05).结论:重组表达质粒pcDNA3.1-S2S和pcDNA3.1-S1S2S接种,能够抑制转基因小鼠体内的HBV复制,而重组质粒中S1基因的共表达使抑制作用得到增强. 展开更多

关键词 重组表达质粒 HBV转基因小鼠 治疗效应 乙肝病毒 pcdna3 S抗原 HBV前S1抗原 抗-HBS阳转率 前S2抗原 表面抗原主蛋白 C57BL/6 dna水平 血清HBV HBsAg 真核表达质粒 dna复制 前S2抗体 抗体阳转率 HBV复制 接种后 抑制效果

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人间质胶原酶基因高效表达对体外肝纤维化的影响

14

作者 汪谦 彭慧 +1 位作者 梁力建 黄洁夫 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期747-748,T002,共3页

目的 观察人间质胶原酶(MMP1)基因高效表达对体外肝纤维化的影响。方法 利用DNA重组技术构建了pcDNA3-MMP1真核表达重组质粒。经脂质体包裹后,转染张氏传代人肝细胞,Western blot检测 MMP1蛋白表达量。在体外乙醇诱导纤维化培养条件下,... 目的 观察人间质胶原酶(MMP1)基因高效表达对体外肝纤维化的影响。方法 利用DNA重组技术构建了pcDNA3-MMP1真核表达重组质粒。经脂质体包裹后,转染张氏传代人肝细胞,Western blot检测 MMP1蛋白表达量。在体外乙醇诱导纤维化培养条件下,抗生蛋白链菌素-生物素复合物标志(LSAB)免疫组织化学法检测肝细胞周围Ⅰ、Ⅲ型胶原生成状况,图象分析仪半定量分析胶原纤维的相对含量(RCC)。结果 成功构建真核表达质粒pcDNA3-MMP1,检测RCC 显示未转染组为132.6±5.7,转染组为118.8±4.8;统计学分析表明未转染组明显高于转染组(P<0.01)。结论 本研究证明重组质粒pcDNA3-MMP1能在体外致纤维化培养条件下拮抗肝细胞间质过多胶原产生。 展开更多

关键词 人间质胶原酶 肝纤维化 基因治疗 dna重组技术 pcdna3-MMP1 真核表达 重组质粒

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