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题名黄瓜T-DNA插入突变体库的构建
被引量：3
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作者
李蕾
李季
孟永娇
张璐
娄群峰
钱春桃
陈劲枫
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机构
南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/园艺学院
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出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期40-47,共8页
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基金
国家自然科学基金重点项目(31430075)
国家重点基础研究发展计划项目(2012CB113904)
+2 种基金
国家863计划项目(2012AA100202)
国家公益性行业(农业)科研专项(201403032)
国家自然基金青年基金项目(31301781)
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文摘
[目的]为了进一步研究黄瓜基因的功能,本文构建了黄瓜T-DNA插入突变体库。[方法]以黄瓜栽培品种‘长春密刺’子叶节为转化外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法,将T-DNA插入突变载体pROK2后转化黄瓜;通过筛选压力梯度试验,确定遗传转化体系最适合的卡那霉素(Kan)筛选浓度;使用PCR检测和斑点杂交方法鉴定T0和T1代转化植株;以‘长春密刺’植株为对照,统计T1代植株表型。[结果]确定100 mg·L-1为最适合的Kan抗性芽筛选浓度。T0代植株PCR检测结果初步证明,pROK2成功整合到14S1和14S2两个T0代株系基因组中。14S1自交后获得55个T1代单株,对其进行PCR检测,发现其中12个单株均扩增出了35S和NPT-Ⅱ片段。以Dig标记的35S和NPT-Ⅱ为探针,对这12个单株及随机从剩余T1代中选取的11个单株进行斑点杂交检测,得到了2个含有35S和NPT-Ⅱ杂交信号的单株:14S1-27和14S1-34。性状调查统计显示:T1代植株在生长各阶段相对于野生型无明显突变表型。[结论]pROK2重组质粒成功整合到了14S1株系的基因组中。对14S1自交后代的PCR检测和斑点杂交检测结果进一步证明了14S1为转化植株,确定14S1为插入突变体。结合T-DNA插入位点鉴定技术可进一步开展相关基因分离及功能研究工作。
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关键词
黄瓜
T-DNA
插入突变
转基因
prok2载体
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Keywords
cucumber（Cucumis sativus L.）
T-DNA
insertional mutagenesis
transgenic
prok2 vector
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分类号
S642.2
[农业科学—蔬菜学]
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题名大白菜遗传转化体系的建立
被引量：1
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作者
蔺忠龙
李维薇
白现广
程在全
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机构
云南大学生命科学学院
云南省农科院生物技术与种质资源研究所
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出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2008年第4期449-452,共4页
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基金
云南省重点基金资助项目(2004C0010Z)
云南省面上项目(2005C0063M)
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文摘
系统研究了根癌农杆菌LBA4404介导的大白菜遗传转化的若干因素,成功地建立了大白菜快速有效的遗传转化体系,并获得了大白菜抗性植株。实验结果表明,大白菜的不同基因型、苗龄、外植体类型,菌液浓度、浸染时间,共培养和抗生素浓度对转化频率均有一定影响,其最高转化频率达4.0%。抗性植株经PCR和Southern blot检测表明,目的基因已整合进大白菜基因组中。
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关键词
大白菜
根癌农杆菌
转化体系
prok2植物表达载体
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Keywords
Chinese cabbage
Agrobacterium tumefaciens
transformation system： prok2 expression vector.
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分类号
S634.1
[农业科学—蔬菜学]
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