Real-Time PCR检测间充质干细胞源性内皮细胞eNOS、Tie-2基因表达

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作者 白俊清 李琪佳 贾鹂 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期67-70,共4页

[目的]检测骨髓间充质干细胞(BMSCs)源性内皮细胞功能基因表达水平,为骨组织工程血管化奠定基础。[方法]采用全骨髓贴壁法对BMSCs进行体外培养、纯化和扩增,用含有VEGF(10 ng.ml-1)和bFGF(2 ng.ml-1)的诱导培养液对其进行体外诱导分化3... [目的]检测骨髓间充质干细胞(BMSCs)源性内皮细胞功能基因表达水平,为骨组织工程血管化奠定基础。[方法]采用全骨髓贴壁法对BMSCs进行体外培养、纯化和扩增,用含有VEGF(10 ng.ml-1)和bFGF(2 ng.ml-1)的诱导培养液对其进行体外诱导分化3周,通过透射电镜观察内皮细胞特异性W-P小体鉴定细胞性质。以主动脉内皮细胞(VECs)为阳性对照,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测BMSCs源性内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)与酪氨酸激酶受体(Tie-2)mRNA的相对表达量。[结果]分化后的细胞在光镜下具有内皮细胞的形态学特征;透射电镜观察显示诱导后的细胞内出现内皮细胞特异性W-P小体。RT-qPCR检测显示:实验组Tie-2mR-NA的相对表达量为0.785,eNOS mRNA的相对表达量为0.747,二者与阳性对照组目的基因的表达量没有明显差异(P>0.05)。[结论]BMSCs能够成功体外分化为内皮细胞,且具有成熟内皮细胞功能基因的表达,是构建血管化组织工程骨的理想种子细胞。 展开更多

关键词 间充质干细胞 内皮细胞 RT—qpcr 基因表达

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间充质干细胞端粒酶催化亚基RT-qPCR方法的建立

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作者 陈晓菲 李慧婷 +10 位作者 董莹莹 曹译丹 付欣悦 刘明月 张瑞瑞 王艳辉 王新乐 崔梦姗 张峒 庞琳 饶春明 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第1期20-29,共10页

目的:建立一种简便、高效的端粒酶活性检测方法,用于评价间充质干细胞产品的成瘤性风险。方法:针对端粒酶催化亚基(TERT)的保守结构域设计特异性引物和探针,并对TERT基因的引物和探针进行优化筛选,同时设置内参基因的引物和探针,在一个... 目的:建立一种简便、高效的端粒酶活性检测方法,用于评价间充质干细胞产品的成瘤性风险。方法:针对端粒酶催化亚基(TERT)的保守结构域设计特异性引物和探针,并对TERT基因的引物和探针进行优化筛选,同时设置内参基因的引物和探针,在一个反应体系内使用双色荧光探针进行多重定量PCR反应,建立RT-qPCR探针法。应用该法对人间充质干细胞中是否表达TERT基因来间接判断细胞中是否存在端粒酶活性。结果:该方法可稳定特异地检测到阳性对照细胞293T/17的TERT基因,Ct平均值为23.96,RSD为1.5%。内参基因GAPDH均可以正常检出,Ct平均值为14.13,RSD为1.3%。阴性对照细胞MRC-5内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为12.81,RSD为0.46%,TERT基因未检出,该细胞端粒酶活性为阴性。人间充质干细胞HMSC内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为13.01,RSD为3.8%,TERT基因未检出,人间充质干细胞HMSC的端粒酶活性为阴性。结论:本研究建立的RT-qPCR探针法重复性好,特异性高,能够准确检测端粒酶阳性细胞催化亚基mRNA的转录。可用于间充质干细胞的端粒酶活性分析,间接评估间充质干细胞成瘤性风险。 展开更多

关键词 荧光定量RT-pcr探针法 端粒酶催化亚基 端粒酶活性 干细胞 成瘤性

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一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立 被引量：39

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作者 包静月 李林 +3 位作者 王志亮 李金明 刘春菊 肖肖 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第8期21-23,共3页

建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反... 建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反刍兽疫病毒RNA样本进行检测,都获得了特异性扩增,但是,不与牛瘟病毒、海豚麻疹病毒等其他种的麻疹病毒属病毒发生交叉反应。本方法具有高度灵敏性,最低可检测到810拷贝的RNA模板。在模板浓度为8.1×102到8.1×108拷贝范围内,都呈现良好的线性关系,而且无论是组内和或组间重复的变异系数都很低。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 一步法实时定量RT—pcr 检测

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体外转录法制备新城疫病毒荧光定量RT-PCR标准阳性模板 被引量：4

4

作者 孙军峰 刘华雷 +1 位作者 张维 王志亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期43-46,共4页

本研究针对新城疫病毒M基因设计了1对荧光定量RT-PCR引物和Taqman探针,在上游引物的5′端引入T7启动子,采用RT-PCR方法获得了体外转录模板,并对转录产物RNA的浓度及D值进行了测定。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性... 本研究针对新城疫病毒M基因设计了1对荧光定量RT-PCR引物和Taqman探针,在上游引物的5′端引入T7启动子,采用RT-PCR方法获得了体外转录模板,并对转录产物RNA的浓度及D值进行了测定。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性范围和特异性,模板稀释度为2.95×104～2.95×108拷贝/L时,相关系数为0.998。该模板稳定性好,-80℃保存30 d后无显著变化。浓度为2.95×104～2.95×108拷贝/μL的标准品的变异系数分别为0.20%、0.28%、1.00%、0.54%、0.52%,表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性。 展开更多

关键词 新城疫病毒 体外转录 一步法荧光定量RT-pcr

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多重实时定量PCR检测BCR—ABL mRNA方法的建立 被引量：3

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作者 陈建森 林寿榕 +1 位作者 陈志哲 周文娟 《国际检验医学杂志》 CAS 2007年第10期865-868,共4页

目的建立一种快速、可靠的实时定量PCR（RQ-PCR）检测BCR-ABL mRNA的方法。方法应用LightCycler技术，设计在同一PCR反应管内可扩增b3a2、b2a2、ela2几种常见的BCR-ABL转录本和b3a3、b2a3等少见转录本，并对RQ-PCR主要要素进行优化，评... 目的建立一种快速、可靠的实时定量PCR（RQ-PCR）检测BCR-ABL mRNA的方法。方法应用LightCycler技术，设计在同一PCR反应管内可扩增b3a2、b2a2、ela2几种常见的BCR-ABL转录本和b3a3、b2a3等少见转录本，并对RQ-PCR主要要素进行优化，评价优化后RQ-PCR的敏感性、特异性和可靠性。结果建立的RQ-PCR方法可检出10^3健康人单个核细胞中的1个K562细胞，最低可检出100个拷贝BCR—ABL分子。BCR—ABL和ABL的循环域值（C1）值（拷贝数）批内变异系数分别为0．68％（12．93％）和0．59％（8．60％），批间变异系数分别为1．14％（18．89％）和1．01％（12．72％）。结论RQ-PCR可作为评价慢性粒细胞白血病（CML）疾病进展、预后判断和骨髓移植后微量残留白血病监测的灵敏、可靠的方法。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 BCR—ABL 实时定量pcr

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细胞株逆转录酶活性SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法的建立及验证 被引量：1

6

作者 王晨 李永红 +2 位作者 付志浩 张爱华 饶春明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第8期1061-1065,共5页

目的 建立生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green玉实时定量PCR检测方法,并进行优化及初步验证。方法 以MS2噬菌体RNA模板及相应引物,建立一步检测逆转录酶扩增产物的SYBR Green玉实时荧光定量PCR方法,以梯度稀释的重组莫洛尼鼠... 目的 建立生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green玉实时定量PCR检测方法,并进行优化及初步验证。方法 以MS2噬菌体RNA模板及相应引物,建立一步检测逆转录酶扩增产物的SYBR Green玉实时荧光定量PCR方法,以梯度稀释的重组莫洛尼鼠白血病病毒（Moloney murine leukemia virus,MMLV）逆转录酶活性参考品绘制标准曲线,进行逆转录酶活性的定量。对反应的引物和2×RT-PCR Mix进行优化,并对建立的方法进行线性关系、灵敏度、精密度和准确度验证。结果1组引物（上游：5忆-CATAGGTCAAACCTCGTAGGAATG-3忆,下游：5忆-TCCTGCTC-AACTTCCTGTCGAG-3忆）更适合本方法;Promega公司生产的2×RT-PCR Mix具有更高的反应效率。逆转录酶活性在5.40×108～5.40×104pU/μl范围内定量标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.999 7;该方法判断样品阴阳性的标准cut-off值为1.31×104pU/μl;检测CHO-1细胞株样品逆转录酶活性的试验内变异系数（CV）为0.80%,试验间CV值为16.4%;检测5株细胞样品逆转录酶活性的平均加标回收率为122.8%。结论 建立了生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green玉实时定量PCR检测方法,该方法能够准确地定量检测细胞株的逆转录酶活性。 展开更多

关键词 细胞株 逆转录酶 活性 实时定量pcr

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基于qRT-PCR检测非小细胞肺癌患者血浆miR-205方法的建立及临床应用 被引量：1

7

作者 李芳琼 王伟 +3 位作者 张捷 孟冠敏 刘琴 赵桂芝 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第6期824-827,831,共5页

目的建立一种定量检测血浆miR-205的qRT-PCR检测方法,并探讨其在NSCLC早期诊断及预后监测中的临床应用价值。方法针对miR-205的序列,构建qRT-PCR扩增体系。收集27例NSCLC患者术前和术后的血浆以及29例健康人血浆进行miR-205测定,并对受... 目的建立一种定量检测血浆miR-205的qRT-PCR检测方法,并探讨其在NSCLC早期诊断及预后监测中的临床应用价值。方法针对miR-205的序列,构建qRT-PCR扩增体系。收集27例NSCLC患者术前和术后的血浆以及29例健康人血浆进行miR-205测定,并对受试者行ROC分析。结果本研究建立的qRT-PCR法检测miR-205的灵敏度为1.53×10^-9μmol/L,精密度实验CV值均〈5%。NSCLC患者手术前血浆中miR-205表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05);与术前相比,术后一周血浆中miR-205的表达明显降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。miR-205所得ROC曲线下面积为0.765(95%CI:0.63-0.899),区别NSCLC患者和健康体检者的敏感度为77.8%,特异度为69.2%。结论NSCLC患者血浆中miR-205的表达情况,可作为NSCLC潜在的生物标志物,本实验建立的血浆miR-205 qRT-PCR检测方法具有良好的精密度和灵敏度,有望成为一种新的有效辅助NSCLC早期诊断及判断预后的方法。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 实时荧光定量逆转录pcr miR-205

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实时定量RT-PCR检测激活淋巴细胞的端粒酶逆转录酶的表达 被引量：1

8

作者 李力人 万德森 +4 位作者 潘志忠 周志伟 陈功 伍小军 卢震海 《结直肠肛门外科》 2007年第1期7-10,共4页

目的:研究激活淋巴细胞和未激活淋巴细胞的端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达情况。方法:运用定量RT-PCR法检测分别代表激活淋巴细胞和未激活淋巴细胞的43枚良性结直肠疾病的炎性系膜淋巴结和31例正... 目的:研究激活淋巴细胞和未激活淋巴细胞的端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达情况。方法:运用定量RT-PCR法检测分别代表激活淋巴细胞和未激活淋巴细胞的43枚良性结直肠疾病的炎性系膜淋巴结和31例正常自愿者的外周血单核细胞hTERT的表达水平。另外,作为阳性和阴性对照,还检测了59对结直肠癌肿瘤组织/正常黏膜组织的hTERT表达水平。结果:炎性系膜淋巴结的hTERT表达水平比正常人外周血单核细胞的高,但没有统计学意义(P=0.07)。肿瘤组织的hTERT表达水平明显比正常组织的高(P=0.001)。结论:淋巴细胞无论激活与否,hTERT表达水平没有显著改变,与正常组织也无明显差异。 展开更多

关键词 端粒酶逆转录酶 激活淋巴细胞 实时定量RT-pcr

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实时荧光定量PCR检测端粒酶逆转录酶mRNA在急性白血病中的表达

9

作者 汤立旦 黄河 孙洁 《浙江预防医学》 2006年第3期8-10,共3页

目的研究人类端粒酶转录酶（hTERT）在急性白血病的表达和意义。方法应用实时定量PCR（Real-time PCR）技术检测30例急性白血病骨髓单个核细胞及25例正常人骨髓单个核细胞中hTERT mRNA的表达水平，分析其表达水平与急性白血病恶性程度... 目的研究人类端粒酶转录酶（hTERT）在急性白血病的表达和意义。方法应用实时定量PCR（Real-time PCR）技术检测30例急性白血病骨髓单个核细胞及25例正常人骨髓单个核细胞中hTERT mRNA的表达水平，分析其表达水平与急性白血病恶性程度的关系。结果hTERT在急性白血病细胞中的中位表达量为0．00244（0～0．0320），明显高于正常人骨髓单个援细胞中hTERT的中位表达量2．79×10^-4（0～0．0078）（P〈0．001）。但在ANLL和ALL细胞中对比表达无明显差异（P=0．742）。结论在急性白血病中hTERT明显高于正常对照，hTERT是急性白血病诊断的特异性指标之一。 展开更多

关键词 急性白血病 端粒酶逆转录酶 实时荧光定量pcr

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肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1

10

作者 杨英俊 陈辉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第12期1380-1383,共4页

目的建立实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因水平。方法提取人全血基因组DNA,常规PCR扩增hTERT基因,与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α,提取重组质粒pMD18-T-hT... 目的建立实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因水平。方法提取人全血基因组DNA,常规PCR扩增hTERT基因,与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α,提取重组质粒pMD18-T-hTERT作为定量检测的标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行方法的验证。采用建立的实时荧光定量PCR法检测肝癌患者和健康人血浆中hTERT DNA的水平。结果重组质粒pMD18-T-hTERT经PCR及测序鉴定证明构建正确。以该重组质粒为标准品绘制的标准曲线在103～108copies/μl浓度范围内线性关系良好,相关系数R2为0.997;批内及试验间变异系数分别为0.86%和1.44%;特异性良好。肝癌患者血浆hTERT DNA水平显著高于健康人(P<0.05)。结论已成功建立了肝癌患者血浆hTERT DNA的实时荧光定量PCR检测方法,为临床通过检测血浆hTERT DNA辅助诊断肝癌提供了良好的工具。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr 人类端粒酶逆转录酶基因 肝肿瘤

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FQ-PCR和AMPLICOR HCV MONITOR 2.0方法测定HCV病毒载量的比较

11

作者 白旭华 毛玮 +2 位作者 潘品良 于海英 蒋岩 《中国艾滋病性病》 CAS 2008年第6期580-582,共3页

目的探讨荧光定量(FQ-PCR)和AMPLICOR HCV MONITOR 2.0试剂盒检测相同样品中丙型肝炎病毒(HCV)病毒载量值之间的关系。方法收集84份样品,经ELISA检测抗-HCV,再分别使用两种方法测定HCV病毒载量,利用统计分析软件SPSS 15.0对病毒载量Log... 目的探讨荧光定量(FQ-PCR)和AMPLICOR HCV MONITOR 2.0试剂盒检测相同样品中丙型肝炎病毒(HCV)病毒载量值之间的关系。方法收集84份样品,经ELISA检测抗-HCV,再分别使用两种方法测定HCV病毒载量,利用统计分析软件SPSS 15.0对病毒载量Log对数值进行统计分析。结果当HCV病毒载量值大于1000IU/ml时,两种方法检测结果的相关性为0.818(P<0.0001)。结论FQ-PCR和AMPLICOR HCV MONI-TOR 2.0两种方法测定的HCV病毒载量值有较高的相关性。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 病毒载量 逆转录聚合酶链反应 荧光定量聚合酶链反应

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长链非编码RNA MEG3在胃癌中的表达及其与预后的关系 被引量：13

12

作者 孟菲菲 司君利 +3 位作者 刘璐 崔京远 亓玉琴 吕梅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第15期659-662,共4页

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)在胃癌组织中的表达及其与预后的关系,并进一步探讨MEG3与凋亡相关蛋白P53、鼠双微基因2(murine double minute 2,MDM2)的相关性... 目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)在胃癌组织中的表达及其与预后的关系,并进一步探讨MEG3与凋亡相关蛋白P53、鼠双微基因2(murine double minute 2,MDM2)的相关性。方法:收集2012年9月至2013年6月青岛大学附属青岛市市立医院55例行手术治疗的胃癌切除标本(包括癌组织及对应的远端正常组织),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测胃癌组织中MEG3的表达,并分析其与临床病理参数的关系;应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测胃癌中P53、MDM2蛋白的表达水平,并分析其与MEG3的相关性。结果:lnc RNA MEG3在胃癌组织的相对表达水平(7.98±0.19)低于所对应的正常组织(9.47±0.18,P<0.05);在胃癌组织(r=-0.627,P<0.001)及远端正常组织(r=-0.807,P<0.001)中,P53与MDM2的表达呈负相关;P53与MEG3的表达呈正相关(r=0.591,P<0.05),MDM2与MEG3的表达呈负相关(r=-0.346,P<0.05);MEG3高表达者较低表达者中位生存期明显延长。结论:MEG3在胃癌发生发展过程中起抑癌基因的作用;MEG3与P53、MDM2在胃癌发生发展的生物学机制上有重要联系;检测MEG3的表达水平对胃癌预后有潜在价值。 展开更多

关键词 胃癌 长链非编码RNA 母系表达基因3 实时荧光定量pcr

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纳米羟磷灰石/聚酰胺66对成骨细胞生物学作用的实验研究 被引量：6

13

作者 叶玲 苏勤 周学东 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期142-144,共3页

目的研究新型纳米根管充填材料纳米羟磷灰石/聚酰胺66(nHA_PA66)对成骨细胞的生物学作用。方法以含nHA_PA66的细胞培养基(DMEM)浸提液作用于实验组细胞,DMEM培养基作用于对照组细胞,采用MTT比色法检测nHA_PA66对成骨细胞生长的影响;酶... 目的研究新型纳米根管充填材料纳米羟磷灰石/聚酰胺66(nHA_PA66)对成骨细胞的生物学作用。方法以含nHA_PA66的细胞培养基(DMEM)浸提液作用于实验组细胞,DMEM培养基作用于对照组细胞,采用MTT比色法检测nHA_PA66对成骨细胞生长的影响;酶联法检测细胞ALP活性的变化;QRT_PCR测量细胞骨钙素基因表达的变化。结果实验组细胞的相对增殖率在98%～106%之间,且无量效关系,实验组与对照组间无显著性差异(P>0.05);实验组和对照组细胞的ALP活性及骨钙素基因表达相似,皆无显著性差异(P>0.05)。结论nHA_PA66对成骨细胞的生长和功能无不良影响,具有骨细胞相容性。 展开更多

关键词 纳米羟磷灰石/聚酰胺66 实时定量pcr 成骨细胞

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博尔纳病毒在宁夏的人和动物感染的检测 被引量：3

14

作者 刘建 马彦 +2 位作者 张颖 王振海 谢鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期389-393,共5页

目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单... 目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单核细胞的p24和p40基因片段。对检测阳性标本进行连接测序,应用MEGA和DnaSP4.0软件对测序结果同国外的标准株HE80、H1766、strainV等进行核酸和氨基酸序列对比分析,并构建病毒基因的系统发生树。结果在60例VE患者及其接触的710绵羊中,PCR检测发现有3例阳性,阳性检出率5%;9头绵羊阳性,阳性检出率为1.27%。基因聚合分析显示人和动物BDV的核酸序列和编码氨基酸序列与德国马源性的HE80株同源性高达100%,重构基因系统发生树可见宁夏VE患者和牛羊BDV核苷酸序列与国外的标准株形成宁夏-德国-日本的混合支系,同时宁夏绵羊BDV序列也形成了一个独立的支系。结论宁夏地区人和牛羊存在BDV的自然感染,并且人的感染存在动物源性,其传染途径很可能是呼吸道的传播可能引起脑炎的非特异性的临床症状,病毒在种系发生中与德国马源性HE80株有极高的同源性,病毒可能由国外引入本土,不排除病毒株变异的可能,人和绵羊之间存在相互传染的可能。 展开更多

关键词 博尔纳病毒 感染 巢式逆转录实时荧光定量pcr

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可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)与不明原因复发性流产的相关性研究 被引量：14

15

作者 庞丽红 李敏清 +3 位作者 杨冬梅 石凌 臧宁 林伟雄 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期58-61,共4页

目的:探讨可溶性血管内皮生长因子受体(sFlt-1)与原因不明复发性流产(URSA)的相关性。方法:①采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定30例原因不明复发性流产胚胎停育患者(URSA组)和30例正常早孕孕妇(对照组)血清sFlt-1水平;②采用逆转录聚... 目的:探讨可溶性血管内皮生长因子受体(sFlt-1)与原因不明复发性流产(URSA)的相关性。方法:①采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定30例原因不明复发性流产胚胎停育患者(URSA组)和30例正常早孕孕妇(对照组)血清sFlt-1水平;②采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组孕妇绒毛组织sFlt-1mRNA表达水平。结果:复发性流产胚胎停育组与正常早孕对照组血清sFlt-1水平分别为13796.67±11917.08ng/L和3540.67±2989.80ng/L;复发性流产胚胎停育组与正常早孕对照组绒毛组织sFlt-1mRNA表达水平两组计量资料不符合正态分布,用Mann-Whitney秩和检验比较,RSA组sFlt-1mRNA均秩为41.37,正常组sFlt-1mRNA均秩为19.63,P<0.01,组间差异非常显著性意义(P<0.01)。结论:sFlt-1表达异常与复发性流产具有相关性,其表达水平升高可能参与RSA发生的病理生理过程。 展开更多

关键词 可溶性血管内皮生长因子受体(sFlt-1) 原因不明复发性流产(uRSA) ELISA RT-pcr

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荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应检测大鼠死后肾mRNA 被引量：4

16

作者 朱方成 蔡成忠 +3 位作者 王树法 刘良 任亮 朱少华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1628-1630,共3页

目的探讨荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应(fluorescencesemi-quantitativereversetranscrip-tase-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测大鼠死后不同时间肾3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA含量变化对死亡时间(postmorteminterval,P... 目的探讨荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应(fluorescencesemi-quantitativereversetranscrip-tase-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测大鼠死后不同时间肾3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA含量变化对死亡时间(postmorteminterval,PMI)推断的应用价值。方法28只大鼠断颈处死后置于20℃温控系统内,利用荧光标记半定量RT-PCR技术检测大鼠肾GAPDHmRNA在死后48h内相对表达量的变化情况。结果在死后即刻至40h内大鼠肾均可检测出GAPDHmRNA,且其扩增产物呈规律性下降。结论荧光半定量RT-PCR技术检测大鼠死后肾GAPDHmRNA含量变化对PMI推断具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 死亡时间(PMI) 荧光半定量技术 逆转录-聚合酶链式反应(RT-pcr) 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)

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共轭亚油酸对脂肪代谢相关基因表达的影响 被引量：3

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作者 李杰梅 徐娟娟 +1 位作者 杨得坡 陈家树 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2011年第4期704-708,共5页

本文利用实时定量PCR的测定方法,分析了两种共轭亚油酸(CLA)异构体对3T3-L1小鼠前脂肪细胞脂肪代谢相关基因表达的影响。本研究CLA异构体的处理浓度和时间为75.4μmol/L,8 d,测定了与能量代谢、细胞凋亡、脂肪酸氧化作用和脂解作用相关... 本文利用实时定量PCR的测定方法,分析了两种共轭亚油酸(CLA)异构体对3T3-L1小鼠前脂肪细胞脂肪代谢相关基因表达的影响。本研究CLA异构体的处理浓度和时间为75.4μmol/L,8 d,测定了与能量代谢、细胞凋亡、脂肪酸氧化作用和脂解作用相关的多种基因的mRNA水平。结果显示:两种异构体均能够显著提高UCP1、UCP3、Perilipin和PPARα的mRNA水平,而抑制UCP2的表达水平(P<0.01)。与cis-9t,rans-11CLA相比t,rans-10c,is-12 CLA显著提高PKA(P<0.05)、CPT-1和TNF-α(P<0.01)的mRNA水平。与对照组相比,两种CLA异构体处理组均对HSL、ATGL、ACO和Leptin的基因表达无显著影响。 展开更多

关键词 共轭亚油酸 异构体 荧光定量pcr 3T3-L1

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结直肠癌及癌前病变hTERT mRNA定量检测及其临床意义 被引量：3

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作者 刘少平 方春华 +2 位作者 胡亚华 胡晓岚 张险峰 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2015年第1期32-36,共5页

目的探讨结直肠癌及癌前病变组织中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)mRNA的表达量及其临床意义。方法以实时荧光定量RT-PCR检测95例结直肠癌、50例结直肠腺瘤息肉、25例结直肠增生性息肉、21例溃疡性... 目的探讨结直肠癌及癌前病变组织中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)mRNA的表达量及其临床意义。方法以实时荧光定量RT-PCR检测95例结直肠癌、50例结直肠腺瘤息肉、25例结直肠增生性息肉、21例溃疡性结肠炎及20例正常结直肠黏膜组织中h TERT mRNA的表达量;分析结直肠癌组织中h TERT mRNA表达量与肿瘤病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组h TERT mRNA表达量显著高于结直肠腺瘤息肉组、溃疡性结肠炎组、结直肠增生性息肉组和正常对照组(P<0.01);腺瘤息肉中伴高级别上皮内瘤变者h TERT mRNA表达量明显高于伴低级别上皮内瘤变者(P<0.01),且两者均明显高于不伴上皮内瘤变者(P<0.05);溃疡性结肠炎组h TERT mRNA表达量明显高于正常对照组(P<0.05)。结直肠癌组h TERT mRNA表达量与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、术后复发及TNM分期呈正相关(P<0.05),与术后生存期呈负相关(P<0.05)。Cox多因素回归分析显示结直肠癌组织中h TERT mRNA表达量是影响术后预后的危险因素。结论结直肠癌组织中h TERT mRNA表达量与肿瘤重要病理特征相关,可成为评价结直肠癌术后预后的指标;结直肠腺瘤息肉和溃疡性结肠炎组织中h TERT mRNA高表达可能成为结直肠癌发生的预测指标。 展开更多

关键词 结直肠癌 癌前病变 HTERT MRNA 实时荧光定量RT-pcr 预后

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外周血AFPmRNA、h-TERTmRNA检测对肝细胞肝癌患者预后的意义 被引量：3

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作者 张利国 周杰 林建华 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第16期5-7,共3页

目的检测肝细胞肝癌(HCC)患者外周血甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达,探索其在HCC预后中的应用价值。方法FQ-PCR检测60例HCC患者外周血中AFPmR-NA、hTERTmRNA的表达量,并与对照组进行比较。结果HCC患... 目的检测肝细胞肝癌(HCC)患者外周血甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达,探索其在HCC预后中的应用价值。方法FQ-PCR检测60例HCC患者外周血中AFPmR-NA、hTERTmRNA的表达量,并与对照组进行比较。结果HCC患者AFPmRNA、hTERTmRNA的表达量及阳性率均高于对照组(P<0.01)。术后随着时间的推移,其表达数量相应减少,阳性率也明显降低,以1周后下降最为显著(P<0.05)。在肿瘤标志物持续表达阳性的患者中,其术后复发率也明显高于阴性者(P<0.01)。结论外周血中定量检测AFPmRNA、hTERTmRNA的表达可以及时发现患者术后HCC的微转移,预测肿瘤的复发倾向,为术后的合理治疗提供依据。 展开更多

关键词 肝细胞肝癌 微转移 荧光定量 甲胎蛋白信使核糖核酸 人端粒酶逆转录酶

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端粒酶逆转录酶在胃癌组织中的表达及临床意义 被引量：4

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作者 刘丽 覃宇周 葛莲英 《中国癌症防治杂志》 CAS 2015年第6期398-402,共5页

目的探讨端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在胃癌组织中的表达并分析其临床意义。方法以实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测胃癌组织中hTERT mRNA的表达,同... 目的探讨端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在胃癌组织中的表达并分析其临床意义。方法以实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测胃癌组织中hTERT mRNA的表达,同时用MaxVision^(TM)即用型快速免疫组化一步法检测胃癌组织中hTERT蛋白的表达,分析hTERT mRNA及其蛋白表达与胃癌临床病理参数之间的关系,并结合随访资料分析其与胃癌患者预后的关系。结果 hTERT mRNA在胃癌组织中的表达升高(P<0.05);hTERT蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(83.3%)明显高于正常胃组织(40.0%)(P<0.05)。hTERT mRNA和蛋白表达水平呈正相关(r=0.733,P<0.05);hTERTmRNA的表达与淋巴结转移、远处转移及临床分期相关(P<0.05)。胃癌患者hTERT mRNA高表达组与低表达组的生存曲线存在明显差异(P=0.015)。结论 hTERT在胃癌组织中的表达升高,且和胃癌进展相关,可作为反映胃癌进展及预后的生物学指标。 展开更多

关键词 胃肿瘤 端粒酶逆转录酶 实时荧光定量pcr 免疫组织化学 表达 预后

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