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猪捷申病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：13
1
作者 刘杉杉 赵亚荣 +4 位作者 胡峰 吕超超 胡泉博 王贵华 崔尚金 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期704-708,共5页
为建立同时检测猪捷申病毒(PTV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法,本研究以PRRSV ORF6基因、CSFV Erns基因和PTV 5'-UTR基因为对象,建立检测3种病毒的mRT-PCR方法。特异性试验表明,... 为建立同时检测猪捷申病毒(PTV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法,本研究以PRRSV ORF6基因、CSFV Erns基因和PTV 5'-UTR基因为对象,建立检测3种病毒的mRT-PCR方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增3种病毒的基因,对大肠杆菌、猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒和猪流感病毒呈阴性反应;敏感性试验表明,PRRSV、CSFV和PTV的最低核酸检出量分别为7.11×102拷贝、7.81×103拷贝和8.43×102拷贝,略低于单一RT-PCR敏感性;应用该方法对69份送检样品进行检测,其中PRRSV、CSFV和PTV单纯感染检出率分别为28.99%、27.54%和56.52%,PRRSV和CSFV混合感染检出率为4.35%,PRRSV和PTV的混合感染检出率为11.59%,CSFV和PTV的混合感染检出率为13.04%,3种病毒的混合感染检出率为8.70%,与单一RT-PCR检测结果符合率为98.6%。本研究建立的检测方法快速简便,可以用于疾病的初步筛选,对临床早期诊断和流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪捷申病毒 mrt-pcr
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牛呼吸道综合症多重PCR检测方法的建立 被引量：9
2
作者 周玉龙 吴丹丹 +1 位作者 周金玲 朴范泽 《黑龙江八一农垦大学学报》 2016年第6期97-101,107,共6页
为了建立针对BRDC常见的主要病原牛黏膜病病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)的一步法多重RTPCR,引入了新型的具有反转录酶和DNA聚合酶活性的r Tth DNA聚合酶,通过对退火温度和引物浓度的优化,敏感性和特... 为了建立针对BRDC常见的主要病原牛黏膜病病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)的一步法多重RTPCR,引入了新型的具有反转录酶和DNA聚合酶活性的r Tth DNA聚合酶,通过对退火温度和引物浓度的优化,敏感性和特异性的检测,最终确定最佳退火温度为54.5℃,最佳引物浓度为0.6 u M。对BPIV-3、BRSV和BVDV的最小检测量分别为162、16和21个TCID50/0.1 m L。与牛传染性鼻气管炎病毒、冠状病毒、腺病毒,以及多杀性巴氏杆菌、肺炎链球菌、化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌等没有交叉反应。建立起的m RT-PCR检测方法可用于鼻腔分泌物的检测,为进一步m RT-PCR试剂盒的组装奠定了基础。 展开更多
关键词 牛呼吸道综合症 病毒 mrt-pcr
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2017-2019年北京市门头沟区急性呼吸道传染病病原体流行特征 被引量：2
3
作者 张博文 何川 +1 位作者 宋景红 刘海涛 《首都公共卫生》 2021年第3期151-154,共4页
目的分析北京市门头沟区20l7年3月-2019年2月急性呼吸道传染病病原谱构成及流行特征,为呼吸道传染病的预防控制提供病原学依据。方法采集急性呼吸道感染病例、肺炎病例和重症肺炎病例,共609份。利用多重实时荧光定量PCR(multiplex real-... 目的分析北京市门头沟区20l7年3月-2019年2月急性呼吸道传染病病原谱构成及流行特征,为呼吸道传染病的预防控制提供病原学依据。方法采集急性呼吸道感染病例、肺炎病例和重症肺炎病例,共609份。利用多重实时荧光定量PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction,MRT-PCR)方法对16种病毒及肺炎支原体、肺炎衣原体进行检测,并利用SPSS 17.0进行统计分析。结果609份样本中检出111份阳性样本,阳性率为18.23%。病原谱构成前2位病原体分别是流感病毒和肺炎支原体。不同季节检出的优势病原体不同,不同年龄段感染的病原谱也不同。0~4岁年龄组肺炎支原体和呼吸道合胞病毒为主;5~14岁年龄组肺炎支原体为主;15~24岁年龄组肺炎支原体和肠道病毒为主,25岁~年龄组均以流感病毒为主。结论流感病毒和肺炎支原体为门头沟区急性呼吸道感染主要病原体,呼吸道病原体流行季节有一定规律,不同年龄组易感的病原体也不同。 展开更多
关键词 急性呼吸道感染 流行特征 mrt-pcr
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多重逆转录聚合酶链反应检测主要上呼吸道病毒 被引量：8
4
作者 居丽雯 蒋露芳 +3 位作者 甘愉 周联娣 姜庆五 谈兆麟 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期305-307,共3页
目的　建立用多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒以及呼吸道合胞病毒 (RSV)A型、B型等主要上呼吸道病毒的方法 ,以快速检测上呼吸道感染主要病毒及对甲型、甲亚型、乙型流感病毒在上海地区人群感染、... 目的　建立用多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒以及呼吸道合胞病毒 (RSV)A型、B型等主要上呼吸道病毒的方法 ,以快速检测上呼吸道感染主要病毒及对甲型、甲亚型、乙型流感病毒在上海地区人群感染、流行情况调查。方法　采用经MDCK细胞接种培养的甲 3型、乙型流感病毒和Hep - 2细胞接种培养的RSVA型、B型标准毒株病毒液 ,以及甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒和RSVA型、B型混合毒株病毒液 ,使用 5组引物 ,分别为HA1- 5a1和HAl- 3a1(甲 1型流感病毒 )、HA3 - 5a1和HA3 - 3a1(甲 3型流感病毒 )、NP- 5b1和NP - 3b1(乙型流感病毒 )、RSVAF和RSVAR(RSVA型 )、RSVBF和RSVBR(RSVB型 ) ,经mRT -PCR ,琼脂糖凝胶电泳 ,于紫外灯下观察上述病毒特异核苷酸条带。结果　甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒 ,RSVA型、B型分别在 43 1,2 10 ,3 90 ,3 3 4,183bp处出现清晰的 5条DNA条带。 结论　应用 5组引物 ,mRT -PCR可用于快速检测临床上呼吸道感染标本中的流感病毒和RSV ,并可对其进行分型 。 展开更多
关键词 多重逆转录聚合酶链反应 流感病毒 呼吸道合胞病毒
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多重RT-PCR同步快速检测A型和B型流感病毒 被引量：4
5
作者 程小雯 房师松 +2 位作者 庾蕾 张再清 吕星 《中国热带医学》 CAS 2004年第5期692-694,共3页
目的　建立特异、敏感、快速、同步检测含漱液中A、B型流感病毒的分子生物学检测方法。　方法　以流感病毒A型保守的M基因和流感病毒B型的NS基因为模板分别设计的两对引物 ,用MRT -PCR同时扩增A型M基因和B型NS基因的片断 ,得到相对应的... 目的　建立特异、敏感、快速、同步检测含漱液中A、B型流感病毒的分子生物学检测方法。　方法　以流感病毒A型保守的M基因和流感病毒B型的NS基因为模板分别设计的两对引物 ,用MRT -PCR同时扩增A型M基因和B型NS基因的片断 ,得到相对应的病毒片段 ,根据扩增出的片段的位置和大小来判断含漱液中A、B型流感病毒分型。　结果　用MRT -PCR从 19株A型流感病毒毒株和 11株B型流感病毒毒株分别特异地扩增出M基因 5 0 1bp的片段和NS基因 13 6bp的片段 ,灵敏度可达 1 6× 10 -5TCID5 0 ;对 2份黑天鹅的咽拭子和肺组织标本均检出A型流感病毒M基因 5 0 1bp的片段。　结论　多重逆转录聚合酶链反应能特异、敏感快速的检测A、B型流感病毒。 展开更多
关键词 B型流感 M基因 扩增 A型流感病毒 含漱液 RT—PCR 快速检测 NS基因 黑天鹅 毒株
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改良多重实时荧光定量PCR检测流感A型和B型病毒 被引量：6
6
作者 邸红芹 杨永辉 +5 位作者 朱桂云 王晓玲 杨庆志 范海霞 王亮 张辉 《河北医药》 CAS 2016年第23期3529-3532,共4页
目的：建立改良多重实时荧光定量PCR体系快速检测流感A型和B型病毒。方法根据生物信息学分析结果选定流感A型和B型病毒的靶序列，建立MRT－PCR检测体系。构建质粒标准品，评估所建立体系的灵敏度、特异性和重复性。结果成功建立了基于... 目的：建立改良多重实时荧光定量PCR体系快速检测流感A型和B型病毒。方法根据生物信息学分析结果选定流感A型和B型病毒的靶序列，建立MRT－PCR检测体系。构建质粒标准品，评估所建立体系的灵敏度、特异性和重复性。结果成功建立了基于同源加尾系统和Taqman－分子灯标探针的改良多重实时荧光定量PCR检测体系；该方法最低检测限为102 copies／μl，特异性良好，重复性良好，变异系数（CV）为0．99％～2．50％。结论建立了快速、敏感、特异、稳定地改良多重实时荧光定量PCR（ MRT－PCR）检测体系，具有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 多重实时荧光定量PCR 同源加尾系统 Taqman-分子灯标 流感病毒
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多重RT-PCR方法在凡纳滨对虾病毒检测中的应用
7
作者 黎铭 李咏梅 +7 位作者 熊建华 陈秀荔 蒋伟明 曾地刚 彭敏 杨春玲 马宁 陈晓汉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期1780-1784,共5页
病毒检测在预防和控制对虾病毒性疫病实践中具有重要的作用和意义。为了提高对虾病毒检测的快速性和简便性,建立了一种可同时检测6种对虾病毒的RT-PCR方法,并利用该方法对来自广西沿海地区的130份病虾样品中的黄头病毒(YHV)、白斑综合... 病毒检测在预防和控制对虾病毒性疫病实践中具有重要的作用和意义。为了提高对虾病毒检测的快速性和简便性,建立了一种可同时检测6种对虾病毒的RT-PCR方法,并利用该方法对来自广西沿海地区的130份病虾样品中的黄头病毒(YHV)、白斑综合征病毒(W SSV)、桃拉病毒(TSV)、肝胰腺坏死病毒(HPV)、传染性皮下组织坏死病毒(IHHNV)以及杆状病毒(MBV)进行了检测。检测结果:白斑综合征病毒发病率最高,检出率高达73.8%;传染性皮下组织坏死病毒发病率为18.5%;桃拉病毒检出率为3.1%;未检出黄头病毒、肝胰腺坏死病毒和杆状病毒。该RT-PCR方法扩增得到的片段经测序,结果与标准毒株的核酸数据高度吻合。实践证明,该实验建立的RT-PCR方法具有高度的准确性,与其他检测方法相比具有快速、简便的特点,在对虾病毒检疫、流行病学调查等方面具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 对虾 病毒检测 多重RT-PCR
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猪病毒病PCV2、PEDV、TGEV、GAR的复合PCR方法建立及应用 被引量：4
8
作者 赵津 禹泽忠 +5 位作者 冯刚 王萍 杨锁住 赵国洪 高俊男 韩建强 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期982-987,共6页
本试验根据John Ellis和Dae S.Song等报道的4对引物建立同时检测猪圆环病毒(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(GAR)4种仔猪腹泻相关病毒的复合PCR方法,并对云南省玉溪市部分县(区)2014-2015年收集... 本试验根据John Ellis和Dae S.Song等报道的4对引物建立同时检测猪圆环病毒(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(GAR)4种仔猪腹泻相关病毒的复合PCR方法,并对云南省玉溪市部分县(区)2014-2015年收集的47份腹泻粪便(肠内容物)进行检测,结果显示PCV2、PEDV、TGEV、GAR总阳性率分别为27.66%、55.32%、6.38%、14.89%。与单项PCR检测的符合率达到了100%,试验表明PEDV是导致该地群仔猪腹泻的主要致病因子;该复合PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,省时省力,完全可以应用于临床疾病的快速诊断。 展开更多
关键词 PCV2 PEDV TGEV GRV 复合PCR
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多重逆转录-聚合酶链反应检测麻疹风疹流行性腮腺炎病毒基因的研究
9
作者 李敏红 严菊英 +4 位作者 卢亦愚 冯燕 史雯 龚黎明 葛琼 《中国计划免疫》 2005年第1期9-11,共3页
目的　探索麻疹、风疹、流行性腮腺炎 (腮腺炎 )病毒感染的快速诊断方法。方法　利用多重逆转录 聚合酶链反应 (MRT PCR)方法对麻疹、风疹、腮腺炎病毒的相关基因检测进行研究。结果　直接从麻疹疫苗沪1 91 株 ,风疹疫苗BRDⅡ株 ,腮腺... 目的　探索麻疹、风疹、流行性腮腺炎 (腮腺炎 )病毒感染的快速诊断方法。方法　利用多重逆转录 聚合酶链反应 (MRT PCR)方法对麻疹、风疹、腮腺炎病毒的相关基因检测进行研究。结果　直接从麻疹疫苗沪1 91 株 ,风疹疫苗BRDⅡ株 ,腮腺炎疫苗S79株 ,冻干麻疹、腮腺炎、风疹联合减毒活疫苗及临床麻疹、风疹、腮腺炎患者的标本中 ,同时检测出麻疹、风疹、腮腺炎病毒 6 3 5bp、4 1 1bp、5 1 9bp的特异性核酸片段 ,MRT PCR 1次扩增灵敏度均可分别达到 1TCID50 。结论　该方法能特异、敏感地检测临床标本中麻疹、风疹、腮腺炎病毒 ,是快速诊断麻疹、风疹。 展开更多
关键词 多重逆转录-聚合酶链反应(mrt-pcr) 麻疹病毒 风疹病毒 流行性腮腺炎病毒 基因检测
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多重逆转录-聚合酶链反应对甲_1与甲_3型流行性感冒病毒神经氨酸酶亚型的快速鉴定 被引量：2
10
作者 卢亦愚 严菊英 +3 位作者 茅海燕 李敏红 冯燕 史雯 《中国计划免疫》 2004年第5期299-301,共3页
为建立流行性感冒 (流感 )病毒甲1、甲3 型神经氨酸酶 (NA)N1与N2 亚型的快速鉴别方法 ,通过对大量NA基因序列的比较 ,分别在N1与N2 亚型的保守区域设计特异性引物 ,采用多重逆转录 聚合酶链反应 (MRT PCR)进行NA基因扩增 ,并评价了其... 为建立流行性感冒 (流感 )病毒甲1、甲3 型神经氨酸酶 (NA)N1与N2 亚型的快速鉴别方法 ,通过对大量NA基因序列的比较 ,分别在N1与N2 亚型的保守区域设计特异性引物 ,采用多重逆转录 聚合酶链反应 (MRT PCR)进行NA基因扩增 ,并评价了其灵敏度和特异性。结果表明 :MRT PCR能特异性扩增甲1、甲3 型流感病毒NAN1与N2 亚型基因 ,灵敏度为 0 1TCID50 ,可从临床患者含漱液中直接检测到N1、N2 基因。MRT PCR方法不仅可作为甲型流感病毒NA亚型的快速鉴定方法 ,而且可以作为人类甲型流感病毒基因快速诊断方法的补充 ,应用于流感爆发疫情的应急诊断。 展开更多
关键词 多重逆转录-聚合酶链反应 甲1和甲3型流行性感冒病毒 神经氨酸酶亚型 快速鉴定
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