猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方...猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。展开更多
文摘猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。
文摘【目的】早发性肌无力综合征(early onset muscle weakness syndrome,MW)是新近发现的一种荷斯坦牛遗传缺陷,患病犊牛表现为出生后趴卧不起、后肢肌肉萎缩等,其遗传机制与L型钙通道蛋白α1S亚基编码基因CACNA1S的单碱基突变相关。本研究旨在建立该遗传缺陷的分子检测方法,并探究其在国内荷斯坦牛群体中的扩散情况。【方法】基于MW致病位点特异性DNA序列,设计扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(ARMS-PCR)检测引物,对317份荷斯坦牛冻精和毛囊样本进行MW遗传缺陷基因筛查,通过Sanger测序对ARMS-PCR检测结果进行验证,并利用系谱数据追溯MW突变源头。【结果】ARMS-PCR检出MW携带者21头,携带率为6.62%(21/317),未发现缺陷基因纯合子,提示该突变为隐性纯合致死。Sanger测序与ARMS-PCR所得基因型完全一致,证明该技术具有高度准确性。系谱追溯表明,MW携带者的遗传来源可追溯至1984年出生的荷斯坦公牛Southwind Bell of Bar-Lee。【结论】MW遗传缺陷已在中国荷斯坦牛群体中扩散且携带率较高,建议牧场应尽早开展MW遗传缺陷基因检测和风险评估,采取科学的选种选配措施以减少遗传缺陷导致的经济损失。
