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黑腹果蝇抗真菌肽Drosomycin同系物的免疫原性和抗真菌活性 被引量：1
1
作者 杨婉莹 刘文权 +5 位作者 邓小娟 段云 黄亚东 温硕洋 夏庆友 曹阳 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期887-894,共8页
通过黑腹果蝇Drosophila melanogaster抗真菌肽Drosomycin(Drs)及其同系物Drs-lC和Drs-lE的抗体制备及Western blotting结果,分析了Drs同系物的免疫原性与其抗真菌活性的关系。研究采用了2种技术路线,分别将Drs、Drs-lC和Drs-lE基因构... 通过黑腹果蝇Drosophila melanogaster抗真菌肽Drosomycin(Drs)及其同系物Drs-lC和Drs-lE的抗体制备及Western blotting结果,分析了Drs同系物的免疫原性与其抗真菌活性的关系。研究采用了2种技术路线,分别将Drs、Drs-lC和Drs-lE基因构建成与细胞生长因子基因afgf融合的重组表达质粒pET-afgf-Drs、pET-afgf-C和pET-afgf-E,以及通过基因同向串连获得重组表达质粒pRSET-2Drs、-4Drs、-6Drs和pRSET-2E、-4E、-6E,并将这些重组表达质粒转化到BL21(DE3)plysS受体菌进行诱导表达。分离纯化后的融合蛋白afgf-Drs、afgf-C和afgf-E以及串连蛋白4Drs、4Drs-lE分别免疫小白鼠获得相应的抗血清。Western blotting免疫原性检测结果表明,Drs及其同系物与各自的抗血清具有强的免疫反应,同时相互间也有交叉免疫反应,提示它们具有相似的主要抗原决定簇,这些抗原决定簇可能与抗真菌活性无关。同系物之间抗真菌活性的差异可能来源于某些细微结构上的差异。 展开更多
关键词 黑腹果蝇 抗真菌肽 drosomycin 同系物 免疫原性 抗真菌活性
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果蝇Drosomycin基因(drs)的克隆鉴定 被引量：2
2
作者 钟仰进 肖业臣 +6 位作者 魏剑波 温硕洋 黄亚东 邓小娟 桑延霞 段云 曹阳 《蚕业科学》 CAS CSCD 2004年第1期85-89,共5页
为了克隆Drosomycin基因用于今后定点诱变修饰和生物技术开发研究 ,根据果蝇Drosomycin基因 (drs)的cDNA序列 ,分别设计Drosomycin基因含和不含信号肽序列的两对特异引物Drs1/Drs2、Dro3/Dro4 ,由黑腹果蝇(DrosophilamelanogasterMeigen... 为了克隆Drosomycin基因用于今后定点诱变修饰和生物技术开发研究 ,根据果蝇Drosomycin基因 (drs)的cDNA序列 ,分别设计Drosomycin基因含和不含信号肽序列的两对特异引物Drs1/Drs2、Dro3/Dro4 ,由黑腹果蝇(DrosophilamelanogasterMeigen)基因组PCR扩增获得目的片段drs和dro ,克隆到表达载体pET 2 1d(+)和pHIL S1之中。经测序表明 ,克隆的drs与文献报道的drs序列仅在 +116位点有 1个碱基的差异 (A/T) ,而克隆的dro序列则与文献报道的dro序列完全相同。 展开更多
关键词 果蝇 drosomycin基因 昆虫抗真菌肽 信号肽 克隆
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抗真菌肽Drosomycin在原核生物表达系统中的可溶性表达
3
作者 吴文梅 李彩婷 杨婉莹 《广东蚕业》 2016年第3期15-20,共6页
广谱性抗真菌肽Drosomycin的成熟肽由44个氨基酸组成,其中8个半胱氨酸形成4对二硫键,结构复杂。在原核表达该蛋白时容易形成包涵体,不利于实际利用。本研究希望通过与转铁蛋白TF融合表达的方式提高其可溶性表达。首先以果蝇DNA为模板扩... 广谱性抗真菌肽Drosomycin的成熟肽由44个氨基酸组成,其中8个半胱氨酸形成4对二硫键,结构复杂。在原核表达该蛋白时容易形成包涵体,不利于实际利用。本研究希望通过与转铁蛋白TF融合表达的方式提高其可溶性表达。首先以果蝇DNA为模板扩增目的基因Drs,克隆至p Cold TF载体,转化进大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导进行表达,利用SDS-PAGE及Western blot鉴定表达产物。结果表明重组表达质粒p Cold TF-Drs构建成功,转化大肠杆菌后能正常表达,且目的产物为可溶性表达。这一结果为抗真菌肽Drosomycin实现生产上的利用奠定基础。 展开更多
关键词 drosomycin pCold TF 基因重组 原核表达
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Sumo分子伴侣与富含二硫键的抗真菌肽Drs基因的融合有助于其可溶性表达 被引量：6
4
作者 肖业臣 秦玉侠 +4 位作者 解佳森 刘孝菊 庞实锋 杨婉莹 李校堃 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期22-25,共4页
利用PCR引物延伸的方法合成了分子伴侣Sumo和抗真菌肽Drosomycin的融合基因,将其插入到表达载体pET-3c中,构建出重组表达质粒pET-3c-SD,并转化至大肠杆茵BL21(DE3)中。筛选重组转化子,进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析。结果... 利用PCR引物延伸的方法合成了分子伴侣Sumo和抗真菌肽Drosomycin的融合基因,将其插入到表达载体pET-3c中,构建出重组表达质粒pET-3c-SD,并转化至大肠杆茵BL21(DE3)中。筛选重组转化子,进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析。结果表明在30℃条件下,用0.5mmol/LIPTG诱导3h后,目的蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白的22%,其中可溶性蛋白超过了目的蛋白的80%。经过Ni-NTA纯化后,融合蛋白的纯度可达95%以上。抑菌实验表明,该融合蛋白对白僵菌(Beauveria bassiana)具有一定的抑真菌活性。证实了使用分子伴侣Sumo融合表达对具有多个二硫键的小分子多肽的表达是非常有效的。 展开更多
关键词 抗真菌肽 drosomycin SUMO 分子伴侣
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樱桃红蟑螂抗菌肽果蝇霉素基因SlDros克隆及体内诱导表达
5
作者 刘露遥 桂航 +5 位作者 任书瑾 伊丽姆努尔·玉山 章冰川 李飞 何树林 周操 《昆虫学报》 北大核心 2025年第7期1023-1030,共8页
【目的】本研究旨在鉴定樱桃红蟑螂Shelfordella lateralis的抗菌肽果蝇霉素基因,并探究其发育和组织表达特性及其在细菌与杀虫剂诱导下的表达情况。【方法】基于樱桃红蟑螂转录组数据对樱桃红蟑螂的果蝇霉素基因进行鉴定,并通过RT-PCR... 【目的】本研究旨在鉴定樱桃红蟑螂Shelfordella lateralis的抗菌肽果蝇霉素基因,并探究其发育和组织表达特性及其在细菌与杀虫剂诱导下的表达情况。【方法】基于樱桃红蟑螂转录组数据对樱桃红蟑螂的果蝇霉素基因进行鉴定,并通过RT-PCR进行验证;利用RT-qPCR测定樱桃红蟑螂不同发育阶段(1龄若虫、4龄若虫及6日龄雌成虫和雄成虫)、4龄若虫不同组织(头、胸、肠道、足、脂肪体、血淋巴和体壁)及注射大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和溴氰菊酯(1×10-5 mg/L)后4龄若虫中果蝇霉素基因的表达量。【结果】克隆得到了樱桃红蟑螂果蝇霉素基因SlDros的cDNA序列(GenBank登录号:PQ464795),其开放阅读框长201 bp,编码66个氨基酸。SlDros在樱桃红蟑螂6日龄雄成虫中大量表达;SlDros在4龄若虫头、体壁、胸和血淋巴中的表达量较高;注射大肠杆菌后12,24和48 h时4龄若虫中SlDros的表达量显著高于对照组(注射蒸馏水);注射金黄色葡萄球菌后6,12,24和72 h时4龄若虫中SlDros的表达量都显著高于对照组(注射蒸馏水);注射溴氰菊酯96 h时4龄若虫中SlDros的表达量显著高于对照组(注射丙酮)。【结论】樱桃红蟑螂中存在抗菌肽果蝇霉素基因,并且细菌和杀虫剂胁迫均能诱导其表达。研究结果可为研究樱桃红蟑螂抗菌肽的功能及其进一步开发新型抗菌药物打下基础。 展开更多
关键词 樱桃红蟑螂 抗菌肽 果蝇霉素 基因表达 溴氰菊酯 细菌
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黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究 被引量：2
6
作者 杨婉莹 温硕洋 +4 位作者 邓小娟 叶明强 夏庆友 曹阳 黄亚东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期391-398,共8页
【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSα... 【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其6个同系物的抗性功能差异,研究其分子结构与功能的关系,需要对这些同系物基因进行克隆表达,获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因,并克隆至pET-3C载体上,转化到宿主菌E.coli Origami(DE3)中进行诱导表达,表达产物经阳离子CM SepharoseTM Fast Flow层析、凝胶过滤Sephacryl S-100 High Resolution层析和包涵体的复性及Sephadex G-25脱盐等纯化处理后,进行抑菌活性检测。【结果】经纯化的7个Drs同系物的短肽样品,除Drs-lI外,其它的Drs同系物样品对供试真菌水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)均有较强的抑制作用。【结论】表明本研究中使用的纯化及复性方法对具有多个二硫键的小分子多肽是比较有效的。 展开更多
关键词 黑腹果蝇 抗真菌肽 drosomycin 同系物 表达 蛋白纯化
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黑腹果蝇吞噬细胞对金黄葡萄球菌与大肠埃希菌的不同吞噬作用
7
作者 王徵 朱斐 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期381-388,共8页
吞噬作用是一种对抗微生物病原体的重要机制,但许多细菌均有抗吞噬作用。利用透射电镜和激光共聚焦显微镜结合细胞生物学技术,对黑腹果蝇Drosophila melanogaster S2细胞吞噬热灭活大肠埃希菌(heat inactivated Escherichia coli,HIEC)... 吞噬作用是一种对抗微生物病原体的重要机制,但许多细菌均有抗吞噬作用。利用透射电镜和激光共聚焦显微镜结合细胞生物学技术,对黑腹果蝇Drosophila melanogaster S2细胞吞噬热灭活大肠埃希菌(heat inactivated Escherichia coli,HIEC)和热灭活金黄葡萄球菌(heat inactivated Staphylococcus aureus,HISA)的作用进行了研究。结果表明:S2细胞能够在接种后1 d内有效清除HIEC,但不能清除HISA;经聚肽糖(PG)或脂多糖(LPS)激活的S2细胞同样不能有效地清除HISA,HISA能够在S2细胞内至少存活4 d。在接种细胞酸性指示剂(p Hrodo)标记的细菌1h后,HIEC处于酸化环境中,而HISA没有;检测S2细胞的吞噬百分率显示S2细胞吞入活细菌与灭活细菌的敏感度没有显著差异。PG处理后的S2细胞防御素(defensin)与抗真菌肽(drosomycin)均显著上调表达,但仍无法消化HISA。结果证实:灭活金黄葡萄球菌表面具有抑制吞噬作用中消化步骤的成分,而灭活大肠埃希菌没有。研究揭示了在S2细胞对抗革兰氏阳性菌时,吞噬作用在清除该类病原体时所起到的重要作用以及金黄葡萄球菌抑制消化过程从而抵御细胞吞噬的策略。 展开更多
关键词 免疫生物学 吞噬作用 黑腹果蝇 金黄葡萄球菌 大肠埃希菌 防御素 抗真菌肽
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饲料中添加益菌肽对羔羊生产性能和生理生化指标的影响 被引量：3
8
作者 李爱军 《中国草食动物科学》 CAS 2016年第5期35-38,共4页
为揭示益菌肽对肉羊生产性能和血液生理生化指标的影响,将40只3月龄杜寒(杜泊羊×小尾寒羊)杂种断奶公羔随机分为4组:Ⅰ组饲喂正大浓缩料+益菌肽;Ⅱ组饲喂自配料+益菌肽;Ⅲ组饲喂正大浓缩料;Ⅳ组饲喂自配料。育肥试验为期60 d,测定... 为揭示益菌肽对肉羊生产性能和血液生理生化指标的影响,将40只3月龄杜寒(杜泊羊×小尾寒羊)杂种断奶公羔随机分为4组:Ⅰ组饲喂正大浓缩料+益菌肽;Ⅱ组饲喂自配料+益菌肽;Ⅲ组饲喂正大浓缩料;Ⅳ组饲喂自配料。育肥试验为期60 d,测定各组采食量和日增重指标变化。结果表明:添加益菌肽组(第Ⅰ组和第Ⅱ组)总增重和日增重均显著高于对照组(第Ⅲ组和第Ⅳ组)(P<0.05),添加益菌肽组试验期总精料和平均日耗精料低于对照组,添加益菌肽组经济效益优于对照组。添加益菌肽组羔羊血清尿素氮(BUN)和甘油三酯(TG)有降低的趋势,葡萄糖(GLU)有升高的趋势。说明添加益菌肽能够显著提高育肥羔羊的饲料转化率和日增重,增加经济效益。 展开更多
关键词 益菌肽 羔羊 生产性能 血液生理生化指标
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