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题名合浦珠母贝Pf-Cnot2基因的克隆与表达分布
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作者
王雨亭
徐广锐
梁健
谢军
谢莉萍
张荣庆
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机构
清华大学生命科学学院海洋生物技术研究所
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出处
《上海海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期649-655,共7页
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基金
教育部自主科研计划(20111080964)
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文摘
采用RACE技术从合浦珠母贝外套膜组织中克隆得到了CCR4-NOT复合体第二亚基(Cnot2)基因,命名为PfCnot2。该基因全长2 616 bp,开放阅读框为1 725 bp,编码574个氨基酸,理论分子量为61 ku,理论等电点为6.25。蛋白序列分析表明它富含丝氨酸、甘氨酸和苏氨酸,具有保守的NOT2_3_5结构域。系统进化分析显示Pf-Cnot2蛋白与脊椎动物的Cnot2蛋白进化关系较远。Pf-Cnot2在合浦珠母贝的外套膜边缘、外套膜缘膜、足、生殖腺、内脏团、闭壳肌和鳃等组织中均有表达,在生殖腺中表达量最高。该基因从担轮幼虫期至幼贝期均有表达,担轮幼虫期表达量最少,D型期比担轮幼虫期有显著增高。上述研究结果为进一步了解Pf-Cnot2在合浦珠母贝中发挥的作用提供了基础数据。
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关键词
合浦珠母贝
cnot2
基因克隆
表达
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Keywords
Pinctada fucata
cnot2
gene cloning
expression
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分类号
S917
[农业科学—水产科学]
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题名cnot2基因是生物钟信号通路中的一个负向因子
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作者
张云峰
秦海棠
张双艳
胡孟娜
冯永杰
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机构
苏州大学医学部基础医学与生物科学学院
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出处
《中国血液流变学杂志》
CAS
2015年第3期263-266,共4页
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文摘
目的：克隆表达并研究cnot2（CCR4-NOT转录复合体亚基2）基因在哺乳动物生物钟信号通路中的作用，为进一步研究生物钟信号通路提供理论依据。方法提取B6小鼠的总RNA进行体外反转得到cDNA。依据小鼠的基因序列设计合成一对特异性引物，以反转录的小鼠cDNA为模板，扩增得到cnot2的基因片段。将基因克隆到表达载体，转染HEK293T细胞系，获得总蛋白后通过Western blot检测该基因在体外是否成功表达。然后设计实验体系，收集细胞利用报告基因检测试剂盒检测per1-luc的活性，最后通过免疫共沉淀技术证明cnot2与主要生物钟基因之间的相互作用。结果 cnot2基因能够抑制哺乳动物生物钟基因bmal1和clock的转录活性，其可能的机制是cnot2能够竞争性地结合bmal1和clock，使bmal1-clock复合体的转录活性降低。结论 cnot2基因是生物钟信号通路中的一个负向因子。
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关键词
小鼠
cnot2
特异性
RT-PCR
WESTERN
BLOT
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Keywords
mouse
cnot2
specificity
RT-PCR
Western blot
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分类号
Q811.213
[生物学—生物工程]
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