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血管内皮生长因子基因表达定量分析方法的建立及其应用
1
作者 白霞 傅建新 +3 位作者 丁凯阳 岑建农 王玮 阮长耿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期548-552,共5页
血管内皮生长因子(VEGF)是血管新生的中枢介质,在白血病的病理机制中具有重要作用,也是血液肿瘤患者一种独立的预后因素,但VEGF在白血病细胞分化或凋亡中的重要性尚待阐明。为了查明VEGF在白血病细胞分化或凋亡中的作用,构建了VEGF基因... 血管内皮生长因子(VEGF)是血管新生的中枢介质,在白血病的病理机制中具有重要作用,也是血液肿瘤患者一种独立的预后因素,但VEGF在白血病细胞分化或凋亡中的重要性尚待阐明。为了查明VEGF在白血病细胞分化或凋亡中的作用,构建了VEGF基因竞争模板(T-VEGFΔ)并建立竞争性定量逆转录聚合酶链反应(cQRT-PCR),以监测全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中VEGF基因表达的改变;通过将系列稀释的靶分子与恒量的竞争模板共扩增,获得标准曲线,用于计算待测样本中靶基因的分子数;在不同时间点分别检测NB4细胞的CD11b抗原表达和NBT还原率。结果显示:cQRT-PCR可作为定量分析VEGF基因表达的有效工具,其测定范围约为1×104-2×105分子。NB4细胞经ATRA处理0、12、24和48小时后,其VEGF基因转录本的数量分别为42.3×105、12.6×105、3.6×105,低于1.0×105/μg总RNA,并伴有CD11b表达上调和NBT还原率增加。结论:成功地建立了cQRT-PCR方法,证明ATRA显著抑制VEGF表达并可能通过抑制血管新生发挥抗白血病的功效。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 cQRT—PCR 基因表达 细胞分化 全反式维甲酸 NB4细胞
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竞争性定量RT-PCR检测妊高征患者血清对脐静脉内皮细胞TR基因表达的影响
2
作者 丁洁 庞爱明 +1 位作者 何杨 杨伟文 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 2004年第1期54-57,共4页
目的　建立一种能有效检测培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)中硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因表达的方法。探讨硫氧还系统与妊高征 (PIH)发病之间的关系。方法　以RT PCR方法克隆TR基因 ,用内部缺失法构建其竞争模板 ,将竞争模板加入目的基... 目的　建立一种能有效检测培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)中硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因表达的方法。探讨硫氧还系统与妊高征 (PIH)发病之间的关系。方法　以RT PCR方法克隆TR基因 ,用内部缺失法构建其竞争模板 ,将竞争模板加入目的基因的逆转录扩增体系中 ,根据标准曲线得出模板中目的基因的含量。用该方法分别检测 2 2例PIH患者及 15名正常孕妇血清对体外培养的HUVEC中TR基因表达水平的影响。结果　建立了竞争性定量逆转录 聚合酶链反应 (cQRT PCR)半定量分析TR基因表达水平的方法 ;用该方法测得PIH患者及正常孕妇血清均能使HUVEC中TR基因表达显著上调 ,且两者上调幅度无明显差异。结论　PIH患者内在TR基因调节缺陷是导致患者体内抗氧化能力不足的主要因素 。 展开更多
关键词 脐静脉内皮细胞 逆转录PCR 硫氧还蛋白系统 妊高征
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