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犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
1
作者 龚婷 马辉 郑鸣 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第7期81-84,118,共5页
为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000... 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定
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携带FPV VP2基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗免疫原性研究
2
作者 陈慧敏 王文婕 +7 位作者 韩新雨 贾钰航 余祖华 贾艳艳 廖成水 丁轲 尚珂 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期947-952,共6页
本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2... 本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2特异性Ig G抗体、中和抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化。同时口服免疫8周龄健康田园猫,检测疫苗的攻毒保护效果。结果显示,与对照组相比,重组菌免疫后对小鼠体重无明显影响(P>0.05);重组菌免疫小鼠后能够显著诱导血清中针对VP2特异性抗体和中和抗体水平(P<0.05);IL-4和IFN-γ细胞因子水平显著升高(P<0.05),且在免疫后第28天达到峰值;重组菌免疫猫后对FPV感染具有一定程度的免疫保护效果,可明显降低实验猫致死率并且延缓发病时间和发病程度。以上结果表明,构建的FPV VP2重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗能够有效刺激机体产生免疫应答且具有较好的免疫保护效力,为进一步研发FPV新型疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 泛猫白细胞减少综合症病毒 vp2 SL1344ΔcrpΔasd 口服疫苗 免疫原性
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共表达IBDV VP2蛋白和AIV HA蛋白的重组NDV的构建 被引量：2
3
作者 王晓晓 司凯新 +7 位作者 尚珂 陈松彪 余祖华 丁轲 陈建 李日顺 郁川 何雷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期748-756,共9页
为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯... 为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯救出共表达VP2蛋白和HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2并鉴定。RT-PCR鉴定表明目的基因成功插入至重组NDV的P、M基因之间;IFA检测结果表明,重组病毒r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2感染细胞可稳定表达VP2蛋白和HA蛋白,而重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA感染细胞后仅检测到VP2蛋白表达。生物学特性检测表明2株重组病毒均具有亲本毒株的高增殖效价、低毒力和良好耐热性特点。综上所述,本研究成功地构建了共表达nVarIBDV VP2蛋白和H9N2 AIV HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2,为n VarIBDV、H9N2 AIV及基因Ⅶ型NDV的综合防控提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 vp2蛋白 禽流感病毒 HA蛋白
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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量：1
4
作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页
传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 vp2基因 vp3基因 腺病毒载体
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脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建 被引量：1
5
作者 邵帅 纪晓岚 +1 位作者 刘明启 李琼毅 《中国动物保健》 2025年第1期240-241,共2页
为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至... 为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 vp2基因 2A基因 真核表达载体
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猪细小病毒2型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
6
作者 帅文娜 李佳乐 +8 位作者 郭子强 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第8期78-84,共7页
旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(I... 旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA检测结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA分析表明,其能特异性识别和结合PPV,说明重组VP2蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究为VP2血清学检测方法的建立及其蛋白的功能研究提供了材料。 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2蛋白 多克隆抗体 原核表达
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大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备
7
作者 张秋爽 马宝福 +6 位作者 郑果 林强 梁红茹 牛银杰 罗霞 李宁求 付小哲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期18-25,共8页
【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重... 【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1024000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。 展开更多
关键词 大口黑鲈 大口黑鲈双RNA病毒 vp2蛋白 多克隆抗体
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A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立
8
作者 何启杰 农作荣 +7 位作者 王豪 牛晨霞 莫勇芳 欧阳康 陈樱 黄伟坚 黄稳妃 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期23-29,共7页
依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其... 依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡 vp2蛋白 原核表达 多克隆抗体 竞争ELISA
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辽宁省沈阳市猫泛白细胞减少症病毒VP2、NS1基因的遗传进化分析
9
作者 刘琪 刘正伟 +6 位作者 张利 王超 郝春晖 高锋 姜仁礼 梁琳 田长永 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期81-87,共7页
为了解辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)VP2和NS1基因的遗传变异情况,试验从辽宁省沈阳市3个动物医院和1个猫繁育场收集疑似FPV感染的猫粪便拭子样本13份(编号为FPV-8~FPV-20),利用胶体金试纸条进行FP... 为了解辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)VP2和NS1基因的遗传变异情况,试验从辽宁省沈阳市3个动物医院和1个猫繁育场收集疑似FPV感染的猫粪便拭子样本13份(编号为FPV-8~FPV-20),利用胶体金试纸条进行FPV检测,提取阳性样本中的病毒DNA后进行VP2和NS1基因的PCR扩增、测序、同源性分析、编码蛋白的氨基酸突变位点分析及遗传进化树构建。结果表明:13份样本均呈FPV阳性,经PCR扩增均得到大小为1755 bp的VP2基因和大小为2007 bp的NS1基因。13份样本中的FPV VP2基因之间的核苷酸相似性为98.7%~100%,与GenBank中FPV参考毒株的核苷酸相似性为98.6%~100%,其中FPV-LN15、FPV-LN18、FPV-LN19与BJ540(MT270553.1)、FPV ZJFPV15(MW495840.1)和FPV-SH2003(MW811187.1)的核苷酸相似性为100%;13份样本中的FPV NS1基因之间的核苷酸相似性为99.0~100%,与GenBank中FPV参考毒株的核苷酸相似性为99.1%~99.9%,其中FPV-LN8、FPV-LN10和PPV-LN13的核苷酸相似性为100%,FPV-LN9、FPV-LN18和FPV-LN19的核苷酸相似性为100%,PPV-LN15和FPV-LN17的核苷酸相似性为100%。13份样本中的FPV VP2蛋白共存在5个氨基酸突变位点(第91,301,302,305,307位),FPV NS1蛋白共存在6个氨基酸突变位点(第17,23,60,247,443,596位)。基于VP2基因构建的遗传进化树中共分为2个大分支,FPV和水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)毒株聚为一支,犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)毒株处于一个独立分支。样本FPV-LN11、FPV-LN13、FPV-LN8、FPV-LN16、FPV-LN10、FPV-LN20处于一个较小分支,样本FPV-LN14处于独立小分支,且与FPV HNZZ2株(MZ005633.1,郑州)、FPV Barut株(MZ391096.1,土耳其)、FPV 17D01株(OP153925.1,韩国)、FPV DLC02株(MN418998.1,大连)处于不同小分支;样本FPV-LN9、FPV-LN12、FPV-LN15、FPV-LN18、FPV-LN19与FPV JSNJ-21G5株(OP796709.1,扬州)、FPV BJ540株(MT270553.1,北京)、FPV-SH2003株(MW811187.1,上海)、FPV ZJFPV15株(MW495840.1,扬州)处于一个较小分支,样本FPV-LN17处于独立小分支,且与FPV_ARG08(FJ440714.1)株(阿根廷)处于不同小分支。基于NS1基因构建的遗传进化树共分为两个大分支,FPV毒株和CPV毒株分别为两个独立的分支,FPV-LN9、FPV-LN12、FPV-LN15、FPV-LN17、FPV-LN14、FPV-LN18、FPV-LN19与FPV-SH2003株(MW811187.1,上海)和FPV-SH2001株(MW650831.1,上海)处于一个较小分支,FPV-LN8、FPV-LN11、FPV-LN13、FPV-LN10、FPV-LN16、FPV-LN20株与FPV HNZZ2株(MZ005633.1,郑州)处于一个较小分支,均与FPV_IZSSI_42807_15株(KX434462.1,意大利)、FPV株(X55115.1,澳大利亚)处于不同小分支。说明各样本两种基因的亲缘关系基本一致(除样本FPV-LN14外),FPV毒株在同一地理范围内具有较高的遗传相似性。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 vp2基因 NS1基因 基因突变 遗传进化分析
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基于真核表达塞内卡病毒A VP2蛋白的间接ELISA检测方法
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作者 裴宗飞 于凯蓝 +2 位作者 安欣娜 陈俊雯 张永宁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2025年第1期65-74,共10页
为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2... 为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2蛋白。以纯化的VP2蛋白为包被抗原,利用棋盘滴定法确定最优的抗原包被浓度和待检血清稀释度,通过优化反应条件和确定临界值,建立了检测SVA抗体的间接ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及与IFA的检测符合率。结果显示,重组VP2蛋白在杆状病毒感染的Sf9细胞内呈现可溶性表达,能够被SVA VP2特异性单克隆抗体2F5识别;经Ni-NTA纯化后,获得了分子量约31 kDa的重组VP2蛋白;间接ELISA的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.287;与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型抗血清无交叉反应;批内与批间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA检测了实验室保存的52份猪血清样本,与IFA的检测符合率为96.15%(50/52)。综上,本试验间接ELISA的成功建立为SVA抗体检测和流行病学调查提供了有力工具。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A(SVA) vp2蛋白 昆虫杆状病毒表达系统 间接ELISA 抗体
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传染性法氏囊病毒VP2单克隆抗体制备
11
作者 段绪来 刘静宜 +4 位作者 郭伟强 陈金南 王致远 何秀苗 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期184-189,共6页
传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白具有良好的免疫源性。本研究用纯化的IBDV NN1172株与弗氏佐剂混合,经腹腔注射途径免疫5周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,对小鼠进行眼眶采血,用ELISA方法鉴定VP2抗体水平,用抗体水平最高小鼠的脾细胞与SP2/0进... 传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白具有良好的免疫源性。本研究用纯化的IBDV NN1172株与弗氏佐剂混合,经腹腔注射途径免疫5周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,对小鼠进行眼眶采血,用ELISA方法鉴定VP2抗体水平,用抗体水平最高小鼠的脾细胞与SP2/0进行融合后,对融合成功的杂交瘤细胞经亚克隆后获得1株传代稳定的单克隆细胞株-2G5(重链IgG2a型,轻链为κ型),经ELISA、IFA及Western blot验证结果表明,该细胞株产生的IBDV VP2蛋白抗体效价高、特异性强。本研究为IBDV VP2蛋白表达检测提供了生物材料。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 vp2蛋白 单克隆抗体
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2022—2023年锦州市猫瘟病毒流行规律调查及VP2基因的变异分析 被引量：1
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作者 陈宇山 程安琪 +2 位作者 许大伟 朱琪 李冰 《现代畜牧兽医》 2025年第4期69-73,共5页
试验旨在深入探究锦州地区猫瘟病毒(FPV)的生物学特征,掌握其遗传变异情况,并提升FPV疫苗的免疫效果。试验收集了2022—2023年间锦州地区40份疑似感染FPV的家养猫粪便样本,通过PCR检测选取7份FPV阳性样品进行VP2蛋白的全长测序,并将其与... 试验旨在深入探究锦州地区猫瘟病毒(FPV)的生物学特征,掌握其遗传变异情况,并提升FPV疫苗的免疫效果。试验收集了2022—2023年间锦州地区40份疑似感染FPV的家养猫粪便样本,通过PCR检测选取7份FPV阳性样品进行VP2蛋白的全长测序,并将其与GeneBank公布的国内外FPV VP2蛋白序列进行比对分析。结果显示,40份锦州地区样品中FPV的检出率为65.00%(26/40),其中免疫猫的检出率为33.33%(1/3),而未免疫猫的检出率则高达67.57%(25/37)。VP2基因序列的比对结果显示,锦州地区分离的7株FPV均属于G1群,其中第87、91、133位点发生突变,这些差异可能是导致免疫失败的原因。研究表明,目前锦州地区FPV检出率偏高,亟需对目前市场主流的商品化疫苗的保护效果进行评估。 展开更多
关键词 猫瘟病毒 vp2基因 流行病学调查
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保定地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析
13
作者 邹畅 胡月 +1 位作者 李海花 乔家运 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期823-831,共9页
[目的]了解保定地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行情况以及其VP2基因遗传变异情况。[方法]从保定市多家宠物医院随机采集20例疑似患猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)的猫粪便和鼻腔分泌物样本... [目的]了解保定地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行情况以及其VP2基因遗传变异情况。[方法]从保定市多家宠物医院随机采集20例疑似患猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)的猫粪便和鼻腔分泌物样本,利用PCR扩增、测序获得FPV VP2全基因序列并对其进行分析,利用Mega 7.0软件构建系统进化树,采用MegAlign软件对其核苷酸序列相似性及关键氨基变异位点进行分析。[结果]20例患猫粪便样品中扩增出16条长度为1755 bp的FPV VP2特异性条带,序列分析表明,FPV VP2基因全长为1755 bp,分离获得的FPV均属于G1分型,与日本分离株V211(登录号:AB054227)亲缘关系较近,与FPV标准株CU-4(登录号:M38246)亲缘关系较远,16条FPV VP2基因之间核苷酸序列相似性为99.1%~100%。16条VP2蛋白序列的13个关键氨基酸位点均相同,与FPV标准株CU-4相比,在第101位氨基酸处出现I-T突变;与5个参考毒株CPV VP2的关键氨基酸位点进行比对,仅第101位氨基酸位点相同,其他位点均存在不同程度变异。[结论]保定区主要流行G1型FPV,且其VP2基因遗传稳定性较强。研究结果丰富了FPV的流行病学资料,为保定地区FPV预防提供了理论依据。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒(FPV) vp2基因 遗传进化 氨基酸位点
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转运必需内体分选复合物螺旋纤丝Vps24⁃Vps2的冷冻电镜结构研究
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作者 刘德生 李耀旺 孙珊 《电子显微学报》 北大核心 2025年第1期28-35,共8页
转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在... 转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在本研究中,作者利用冷冻电镜技术解析了由Vps24和Vps2融合蛋白(Vps24-Vps2)形成的双链螺旋纤丝的结构,分辨率为4.07A。在该结构中,呈伸展构象的Vps24-Vps2单体首先形成反向结合的二聚体,二聚体之间再错位结合形成一股螺旋,两股螺旋互相缠绕最终形成纤丝。该结构为理解ESCRT-Ⅲ丝状结构组装以及解聚过程提供了结构基础。 展开更多
关键词 转运必需内体分选复合物 ESCRT vps24 vps2 冷冻电镜结构
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猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白基因重组杆状病毒的构建及应用
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作者 郭伟伟 向银辉 +4 位作者 刘大卫 刘岳 孙鹏 崔晓霞 杜元钊 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期91-96,共6页
本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细... 本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细胞减少症病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中成功表达,并与抗FPV的多克隆抗体发生特异性反应。该蛋白能凝集1%猪红细胞,凝集价达1∶16384。电镜观察可见表达的VP2蛋白能形成病毒样颗粒(VLPs),为20~22 nm。VP2蛋白制备的疫苗能产生较高的抗体滴度。VP2基因的成功表达为FPV疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 vp2基因 重组杆状病毒 鉴定
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犬细小病毒临床病例中VP2基因序列分析
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作者 王艳红 赵勇 +1 位作者 付朋飞 洪军 《特产研究》 2025年第2期84-88,共5页
为了解犬细小病毒临床分离株VP2基因的遗传进化规律。本研究采集1例疑患细小病毒病的犬粪便样品,通过提取样品中的病毒基因组,采用PCR扩增及测序,将序列与不同种的细小病毒VP2基因序列进行核苷酸和氨基酸比对,并进行遗传进化分析。结果... 为了解犬细小病毒临床分离株VP2基因的遗传进化规律。本研究采集1例疑患细小病毒病的犬粪便样品,通过提取样品中的病毒基因组,采用PCR扩增及测序,将序列与不同种的细小病毒VP2基因序列进行核苷酸和氨基酸比对,并进行遗传进化分析。结果显示,该粪便样品CPV/LS-01中扩增出的VP2核苷酸序列为CPV-2c型,与参考毒株MF467242(CPV-2c)的核苷酸同源性最高为99.9%,与M38245(CPV-2)同源性较低(98.8%),与其它参考毒株的同源性为99.0%~99.7%。对VP2蛋白中氨基酸变异情况分析显示,CPV/LS-01样品中的VP2蛋白的I447M位氨基酸位点出现了CPV-2c型细小病毒的独特突变。本研究中所鉴定的犬腹泻粪便中的细小病毒属于CPV-2c型,与目前河南分离毒株(ON322797)VP2中具有相同的突变位点(A5G和I447M),该研究为犬细小病毒流行趋势的研究提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒 鉴定 vp2基因 序列分析
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一例犬细小病毒感染的鉴定与VP2基因遗传进化分析
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作者 贾文亮 杨文迪 +7 位作者 李懿 张馨月 黄文卓 曹晶 朱彦龙 南卫星 李新锋 张晓战 《现代牧业》 2025年第2期6-11,共6页
为了对疑似感染犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的患犬进行确诊并了解感染毒株的遗传变异进化情况,通过临床症状和组织病理变化观察,结合病原核酸检测等方法鉴定病犬的致病原,并对感染CPV毒株的VP2基因进行扩增与测序、Blast比对分... 为了对疑似感染犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的患犬进行确诊并了解感染毒株的遗传变异进化情况,通过临床症状和组织病理变化观察,结合病原核酸检测等方法鉴定病犬的致病原,并对感染CPV毒株的VP2基因进行扩增与测序、Blast比对分析、氨基酸位点分析和遗传演化分析。结果显示,肠内容物样品CPV胶体金试纸检测和CPV特异性PCR均为阳性,确定患犬死于CPV感染,命名该毒株为CPV-HN。随后对该毒株的VP2基因进行扩增,核苷酸序列分析结果显示CPV-HN株与CPV-HN1617株VP2基因相似性达100%,与其他参考毒株的同源性为97.7%到99.9%之间。氨基酸特异性位点分析表明,该毒株的426位点为谷氨酸;遗传演化分析表明,CPV-HN株与CPV-2c基因型毒株属于同一分支,为了解该地区CPV的流行情况提供了参考依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2基因 序列分析 基因型
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辽宁省沈阳市猫细小病毒VP2基因克隆与遗传进化分析
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作者 李晔 《中国动物检疫》 2025年第1期116-120,共5页
为了解沈阳市猫细小病毒(FPV)的遗传进化情况,探究FPV免疫失败的原因,收集2022年该地区FPV感染猫肛拭子,采用PCR扩增FPV VP2基因,对VP2基因测序并进行同源性比对、主要编码氨基酸位点分析与遗传进化树绘制。结果显示;获得了7个FPV VP2... 为了解沈阳市猫细小病毒(FPV)的遗传进化情况,探究FPV免疫失败的原因,收集2022年该地区FPV感染猫肛拭子,采用PCR扩增FPV VP2基因,对VP2基因测序并进行同源性比对、主要编码氨基酸位点分析与遗传进化树绘制。结果显示;获得了7个FPV VP2基因片段,全长均为1755 bp,与50株参考毒株VP2基因同源性为98.8%~99.9%;与标准株和疫苗株相比,6个获得基因编码的VP2蛋白第91位点发生了改变,其中2个获得基因编码的VP2蛋白第295位点发生了改变;遗传进化树显示,FPV VP2基因分为3个基因群,7个获得基因中有6个位于G1群、1个位于G3群,与国内近年来流行毒株亲缘关系近,但与疫苗株和标准株均不在同一个基因群(G2群)。结果说明;沈阳市流行的FPV逐渐进化形成了不同于疫苗株和标准株的基因群,因此有必要加强FPV感染的流行病学监测,研发针对性更强的疫苗。 展开更多
关键词 猫细小病毒(FPV) vp2基因 同源性 氨基酸位点 遗传进化
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汉语方言“N_(1)+请+N_(2)+VP”构式研究
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作者 董绘琳 《今古文创》 2025年第43期110-112,共3页
本文描写了汉语方言中的一种特殊构式“N_(1)+请+N_(2)+VP”。形式上,这类构式在现代汉语普通话中并不少见,常表示恭敬、礼貌义。方言中这类构式的语义表达向相反方向偏移,常常表现话主的不满情绪。本文从分析汉语普通话中“请”字构式... 本文描写了汉语方言中的一种特殊构式“N_(1)+请+N_(2)+VP”。形式上,这类构式在现代汉语普通话中并不少见,常表示恭敬、礼貌义。方言中这类构式的语义表达向相反方向偏移,常常表现话主的不满情绪。本文从分析汉语普通话中“请”字构式入手,接着运用“小三角”理论分析一种方言“请”字构式,进而探究其形成动因。 展开更多
关键词 方言 “N_(1)+请+N_(2)+vp” 构式
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猪细小病毒VP_2蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性 被引量：11
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作者 吕建强 陈焕春 +2 位作者 赵俊龙 肖少波 王革非 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期675-679,共5页
将猪细小病毒 (PorcineParvovirus,PPV)vp2 基因重组到杆状病毒Bac To Bac表达系统的pFastBacⅠ质粒中 ,构建了pFast vp2 质粒。在DH10 Bac大肠杆菌中 ,pFast vp2 与改造过的苜蓿夜蛾核型多角体病毒 (AcNPV)基因组 (Bacmid)发生同源重... 将猪细小病毒 (PorcineParvovirus,PPV)vp2 基因重组到杆状病毒Bac To Bac表达系统的pFastBacⅠ质粒中 ,构建了pFast vp2 质粒。在DH10 Bac大肠杆菌中 ,pFast vp2 与改造过的苜蓿夜蛾核型多角体病毒 (AcNPV)基因组 (Bacmid)发生同源重组 ,从而获得重组穿梭载体Bac mid vp2 ,转染Sf9细胞得到重组病毒AcNPV vp2 。SDS PAGE和Western blotting分析可见大小约为 6 4kD的特异性带 ,表明AcNPV vp2 在Sf9细胞中成功地表达了PPVVP2 蛋白。红细胞凝集试验和间接ELISA进一步证实 ,表达的VP2 蛋白具有与全病毒相同的血凝活性和相似的抗原性。电镜观察VP2 蛋白的粗提物 ,发现VP2 蛋白可自行装配成许多病毒样粒子 (VLPs) 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2蛋白 昆虫细胞 表达 病毒样粒子
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