构建并表达猫杯状病毒(FCV)VP1及其截短体VP1-CDE,并评价其免疫原性。将目标基因克隆至pET28a-SUMO载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导尝试可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,VP1蛋白与VP1-CDE蛋白分子质量分别约为60 k Da与15 k Da,...构建并表达猫杯状病毒(FCV)VP1及其截短体VP1-CDE,并评价其免疫原性。将目标基因克隆至pET28a-SUMO载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导尝试可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,VP1蛋白与VP1-CDE蛋白分子质量分别约为60 k Da与15 k Da,与理论值相符;用6×His标签抗体进行Western-blot试验证实其正确性。重组蛋白经Ni^(2+)亲和层析纯化后,与弗氏佐剂等体积乳化后免疫BALB/c小鼠,采集血清进行间接ELISA,结果显示,VP1与VP1-CDE组均能诱导高滴度针对相应蛋白的特异性Ig G;在前3次免疫时,抗体水平随免疫次数增加而升高,第4次免疫后第14天测得抗体水平和第3次免疫后第14天的水平无显著差异,抗体水平达到平台期。病毒中和试验结果表明,三免后第14天VP1-CDE组中和抗体滴度达1∶223,VP1组为1∶178,二者水平相当。综上所述,VP1-CDE以较小分子质量实现与全长VP1相当的免疫原性,且表达中更易实现正确折叠、不易形成包涵体,可作为FCV亚单位疫苗的优选抗原,为后续疫苗研发提供了试验依据。展开更多
目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原构成及柯萨奇病毒A2型(coxsackievirus A2,CVA2)的VP1基因特征。方法选取2023年云南省手足口病病例标本中经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定为肠道病毒阳性的...目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原构成及柯萨奇病毒A2型(coxsackievirus A2,CVA2)的VP1基因特征。方法选取2023年云南省手足口病病例标本中经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定为肠道病毒阳性的标本进行病毒分离培养。通过RT-PCR对分离株肠道病毒结构蛋白VP4/VP2结合区和VP1区进行扩增并测序,并对其中7株CVA2毒株进行基因序列比较与进化分析。结果1488份粪便样本中共分离获得184株毒株,总分离率为12.71%(184/1448),其中A组肠道病毒占94.02%(173/184),涵盖6个血清型;B组肠道病毒占3.80%(7/184),涉及4个血清型;C组病毒4株占2.17%。基于完整的VP1序列系统进化分析显示:CVA2病毒可分为4个基因型(A~D),本研究分离的7株CVA2均属于基因型D分支2。序列分析显示,本研究7株CVA2分离株间VP1区核苷酸和氨基酸相似性分别为93.23%~99.89%和99.30%~100.00%。结论2023年云南省HFMD病原呈现多样性,以A组肠道病毒为主。2023年云南省HFMD病例分离的CVA2主要是基因型D。未来需进一步加强对肠道病毒的实验室监测及分子流行病学分析,为手足口病防控提供依据。展开更多
文摘构建并表达猫杯状病毒(FCV)VP1及其截短体VP1-CDE,并评价其免疫原性。将目标基因克隆至pET28a-SUMO载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导尝试可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,VP1蛋白与VP1-CDE蛋白分子质量分别约为60 k Da与15 k Da,与理论值相符;用6×His标签抗体进行Western-blot试验证实其正确性。重组蛋白经Ni^(2+)亲和层析纯化后,与弗氏佐剂等体积乳化后免疫BALB/c小鼠,采集血清进行间接ELISA,结果显示,VP1与VP1-CDE组均能诱导高滴度针对相应蛋白的特异性Ig G;在前3次免疫时,抗体水平随免疫次数增加而升高,第4次免疫后第14天测得抗体水平和第3次免疫后第14天的水平无显著差异,抗体水平达到平台期。病毒中和试验结果表明,三免后第14天VP1-CDE组中和抗体滴度达1∶223,VP1组为1∶178,二者水平相当。综上所述,VP1-CDE以较小分子质量实现与全长VP1相当的免疫原性,且表达中更易实现正确折叠、不易形成包涵体,可作为FCV亚单位疫苗的优选抗原,为后续疫苗研发提供了试验依据。
文摘目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原构成及柯萨奇病毒A2型(coxsackievirus A2,CVA2)的VP1基因特征。方法选取2023年云南省手足口病病例标本中经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定为肠道病毒阳性的标本进行病毒分离培养。通过RT-PCR对分离株肠道病毒结构蛋白VP4/VP2结合区和VP1区进行扩增并测序,并对其中7株CVA2毒株进行基因序列比较与进化分析。结果1488份粪便样本中共分离获得184株毒株,总分离率为12.71%(184/1448),其中A组肠道病毒占94.02%(173/184),涵盖6个血清型;B组肠道病毒占3.80%(7/184),涉及4个血清型;C组病毒4株占2.17%。基于完整的VP1序列系统进化分析显示:CVA2病毒可分为4个基因型(A~D),本研究分离的7株CVA2均属于基因型D分支2。序列分析显示,本研究7株CVA2分离株间VP1区核苷酸和氨基酸相似性分别为93.23%~99.89%和99.30%~100.00%。结论2023年云南省HFMD病原呈现多样性,以A组肠道病毒为主。2023年云南省HFMD病例分离的CVA2主要是基因型D。未来需进一步加强对肠道病毒的实验室监测及分子流行病学分析,为手足口病防控提供依据。
