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HIV-1 vif基因的RNA干扰体外研究 被引量：3
1
作者 江雪艳 卢洪洲 +3 位作者 陈秋丽 潘卫 张云智 沈银忠 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期32-36,共5页
目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,... 目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Real-time PCR和Western blot对HIV-1 vif分别从转录和表达水平进行验证。结果将pEGFP-N1-vif重组载体转染HEK 293T细胞后,结果显示vif蛋白可以在细胞中高水平表达;针对vif设计的3段特异的siRNA可以有效且特异地降低vif蛋白的表达。结论RNAi技术可以下调HIV-1蛋白的表达,此技术可以作为一项新的治疗和预防HIV-1的方法用于进一步的研究。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒(HIV) vif基因 vif蛋白 RNAI siRNA 人胚肾293T细胞 pEGFP—N1质粒
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基于Vif-APOBEC3G相互作用的抗HIV-1药物研究
2
作者 张兴杰 王睿睿 郑永唐 《国际药学研究杂志》 CAS 2010年第4期257-262,268,共7页
载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalyticpolypeptidelike3G,APOBEC3G或A3G)是人体天然抗病毒分子,可以使病毒逆转录形成的cDNA的胞嘧啶(C)脱氨为尿嘧啶(U),产生鸟嘌呤(G)→腺嘌呤(A)超突... 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalyticpolypeptidelike3G,APOBEC3G或A3G)是人体天然抗病毒分子,可以使病毒逆转录形成的cDNA的胞嘧啶(C)脱氨为尿嘧啶(U),产生鸟嘌呤(G)→腺嘌呤(A)超突变,导致病毒转录产物突变,从而达到抑制病毒复制的作用。HIV-1的辅助蛋白Vif,可与APOBEC3G相互作用并导致其被降解,使得这一天然抗病毒机制失效,进而增强了HIV的感染力。Vif与APOBEC3G这种相互作用为抗HIV药物提供了新靶点。针对Vif-APOBEC3G相互作用的抗HIV抑制剂已经成为研究热点。本文综述了Vif和APOBEC3G的结构、二者的相互作用,以及基于这一相互作用的抗HIV-1抑制剂研究进展。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒I型 vif APOBEC3G vif-APOBEC3G相互作用 抑制剂
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靶向HIV-1 vif的高效人工miRNA的构建及慢病毒介导的体外抗病毒研究 被引量：7
3
作者 张涛 程通 +5 位作者 魏丽华 张雅丽 王颖彬 蔡毅君 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期8-15,共8页
RNAi在HIV-1的治疗研究中得到了广泛的应用,构建高效并且安全的RNAi抗病毒元件是开展相关研究的基础。vif37是以前的研究中筛选获得的靶向HIV-1 vif的高抑制效率兼具保守性的RNAi靶点。miRNA在抑制效率和启动子的选择上比常用的shRNA具... RNAi在HIV-1的治疗研究中得到了广泛的应用,构建高效并且安全的RNAi抗病毒元件是开展相关研究的基础。vif37是以前的研究中筛选获得的靶向HIV-1 vif的高抑制效率兼具保守性的RNAi靶点。miRNA在抑制效率和启动子的选择上比常用的shRNA具有优势。本研究探索以人工miRNA结构引发vif37靶点对应的RNAi。本研究以天然的miR-155前体为骨架,采用步移的方式设计了3个靶向vif37的人工miRNA,以RNA聚合酶Ⅱ类启动子指导表达。miRNA表达质粒和HIV-1的感染性克隆pNL4-3共转染的结果显示,3个人工miR-NA中只有miR-vif37H具有抑制效果,效率与shRNA-vif37相当。与携带靶序列的荧光素酶报告质粒共转染实验证明miR-vif37H具有良好的抑制特异性。用表达miR-vif37H的重组慢病毒转导HIV-1的敏感细胞MT-4,克隆化后获得稳定表达miR-vif37H的细胞株MT-4-miR37H,该细胞可以有效抑制HIV-1的体外复制。实时RT-PCR检测结果显示,与shRNA-vif37相比,miR-vif37H的表达水平明显下降,安全性更好。进一步的实时RT-PCR检测结果还显示,miR-vif37H在细胞内的稳定表达不会影响内源代表性miRNA(miR-181和miR-16)的加工以及干扰素应答相关基因Stat1的mRNA水平。miR-vif37H是一个特异的高效RNAi元件,为vif37靶点的进一步应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 HIV-1 vif 人工miRNA
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靶向HIV-1 vif的高效siRNA的筛选及慢病毒介导的体外抗病毒研究 被引量：3
4
作者 张涛 程通 +6 位作者 张雅丽 魏丽华 蔡毅君 张军 朱桦 韩家淮 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期88-95,共8页
RNAi技术在艾滋病治疗研究中已展现出巨大的潜力,兼具高效抑制特性和保守性的siRNA靶位是其获得成功应用的重要基础。本研究选择以HIV-1 vif基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,共选择设计了30个识别不同位点的siRNA序列,以pSUPER为载体... RNAi技术在艾滋病治疗研究中已展现出巨大的潜力,兼具高效抑制特性和保守性的siRNA靶位是其获得成功应用的重要基础。本研究选择以HIV-1 vif基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,共选择设计了30个识别不同位点的siRNA序列,以pSUPER为载体构建了相应的shRNA表达质粒。通过与pNL4-3质粒在293FT细胞中进行共转染抑制实验,以及对初筛获得的高效序列进行保守性分析显示siRNA-vif37序列具有高效抑制效率和较好的保守性特征。通过与pGL3-vif报告质粒的共转染实验证明siRNA-vif37具有vif基因抑制特异性。带有shRNA-vif37表达元件的重组慢病毒转导后的MT-4细胞在HIV-1NL4-3体外攻毒实验中可显示出较有效的抑制病毒复制的能力,本研究进一步对转导后细胞进行克隆化筛选,获得稳定整合shRNA-vif37表达元件的MT-4-vif37细胞克隆,该细胞具有显著的抑制病毒复制的能力,在高攻毒剂量下仍可获得良好的抑制效果。本研究为进一步应用RNAi技术进行新型艾滋病治疗方法研究提供了重要基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 HIV-1 vif 重组慢病毒
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含HIV-1 Vif基因重组慢病毒表达载体的构建及其对KSHV裂解性周期复制影响的初探 被引量：4
5
作者 王平 黄敏 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期286-290,355,共6页
目的:利用慢病毒表达载体将HIV-1Vif基因导入原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞BCBL-1中使之持续表达目的蛋白Vif,并检测Vif对其中潜伏KSHV裂解性周期复制的影响。方法:自表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen... 目的:利用慢病毒表达载体将HIV-1Vif基因导入原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞BCBL-1中使之持续表达目的蛋白Vif,并检测Vif对其中潜伏KSHV裂解性周期复制的影响。方法:自表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病毒载体pHAGE-Vif,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞。荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况;收集培养上清经0.45μm滤器过滤后即获得病毒悬液。梯度稀释法测定病毒滴度,感染293T细胞,48h或72h后进行RT-PCR和Western blot检测Vif基因的转录和表达情况。以MOI为1.0的病毒量感染靶细胞BCBL-1,利用Westernblot技术检测Vif蛋白的表达,同时检测KSHVvIL-6和Rta的蛋白表达水平,初步探讨Vif对KSHV复制的影响。结果:限制性内切酶检测和基因测序证实成功构建了携带Vif基因的慢病毒表达载体,滴度为4×107efu/ml。以MOI为1.0的重组慢病毒感染靶细胞BCBL-172h后,能够检测到外源基因Vif的蛋白表达。Western blot结果初步显示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平。结论:成功构建了含Vif基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染BCBL-1细胞,并在其中大量表达目的蛋白。初步结果提示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平,对KSHV裂解性周期复制可能起到抑制作用。 展开更多
关键词 慢病毒 vif KSHV 病毒复制
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HIV-1病毒感染因子Vif及其相关抑制剂的研究进展 被引量：1
6
作者 李震宇 展鹏 刘新泳 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期684-693,共10页
HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)病毒感染因子Vif(viral infectivity factor)是高度保守的碱性磷酸化蛋白质,是HIV-1的辅助调节蛋白之一。Vif蛋白的主要功能是能够介导宿主细胞体内载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apo... HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)病毒感染因子Vif(viral infectivity factor)是高度保守的碱性磷酸化蛋白质,是HIV-1的辅助调节蛋白之一。Vif蛋白的主要功能是能够介导宿主细胞体内载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide like 3G,APOBEC3G)的降解,从而增强病毒的感染性。此外,它还具有调节病毒的逆转录和复制晚期以及诱导细胞G2期停滞等功能。目前,许多实验室已经针对Vif蛋白进行抑制剂的设计。本文简要叙述了Vif蛋白的结构与功能,并主要对其抑制剂的最新进展进行了综述。 展开更多
关键词 HIV-1 AIDS vif 三维结构 APOBEC3G 抑制剂
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HIV-1辅助蛋白Vif的结构与功能 被引量：2
7
作者 李震宇 刘新泳 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期691-695,共5页
HIV-1Vif(viral infectivity factor)蛋白是由保守的vif基因编码的碱性蛋白质,是HIV-1病毒的辅助调节蛋白之一。研究表明Vif蛋白具有调节病毒侵入、组装、出芽和成熟等功能。此外,Vif蛋白能够特异性地与体内抗病毒因子APOBEC3G相互作用... HIV-1Vif(viral infectivity factor)蛋白是由保守的vif基因编码的碱性蛋白质,是HIV-1病毒的辅助调节蛋白之一。研究表明Vif蛋白具有调节病毒侵入、组装、出芽和成熟等功能。此外,Vif蛋白能够特异性地与体内抗病毒因子APOBEC3G相互作用,增强病毒的感染性。因此,针对HIV-1Vif蛋白进行抑制剂设计已经成为抗HIV药物研究的热点之一。本文对HIV-1Vif蛋白的结构与功能研究的最新进展进行了综述。 展开更多
关键词 HIV-1 vif 三维结构 APOBEC3G
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HIV-1 Vif的克隆、表达与活性检测
8
作者 覃晓琳 刘朝奇 +1 位作者 刘徽婷 汪龚泽 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1141-1144,共4页
目的克隆HIV-1Vif基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达及其生物学活性的检测。方法 PCR扩增Vif基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/Vif,进行双酶切及测序鉴定。获得的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3... 目的克隆HIV-1Vif基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达及其生物学活性的检测。方法 PCR扩增Vif基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/Vif,进行双酶切及测序鉴定。获得的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,利用亲和层析方法纯化Vif蛋白。利用Pull-Down方法检测HIV-1Vif与SH3(HCK)特异性结合活性。结果通过酶切和测序,结果表明重组质粒pET28a(+)/Vif构建正确。SDS-PAGE和Western blot结果鉴定了原核表达的Vif重组蛋白大小正确。纯化了蛋白Vif、SH3和GST。GST pull-down试验说明Vif和SH3蛋白具有体外特异性结合活性。结论成功地克隆、表达和纯化了Vif蛋白,Vif与SH3蛋白具有结合活性,为进一步研究针对Vif与SH3结合的药物筛选提供实验依据。 展开更多
关键词 HIV-1 vif SH3(HCK) 结合
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HIV-1 vif基因人工miRNA的构建和功能分析
9
作者 王芳宇 周云 +3 位作者 何丽芳 滕涛 杨海 陈小卫 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期255-259,共5页
目的构建人工miR-vif,并研究其对HIV-1感染宿主细胞的影响。方法以miR-155为基础骨架,根据HIV-1vif基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,构建4个人工miR-vif。采用qPCR技术检测其对vif基因的沉默效率和对干扰素表达的影响;MTT法测定... 目的构建人工miR-vif,并研究其对HIV-1感染宿主细胞的影响。方法以miR-155为基础骨架,根据HIV-1vif基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,构建4个人工miR-vif。采用qPCR技术检测其对vif基因的沉默效率和对干扰素表达的影响;MTT法测定其对被转染细胞的毒性;HIV-1假病毒实验技术检测其对感染的抑制作用。结果 qPCR结果显示,4个人工miR-vif对vif基因都具有一定的沉默效果,其中miR-vif-1的沉默效率最高,达68%。且不会对细胞干扰素的表达产生影响。MTT实验证实miR-vif-1不会影响被转染细胞的活性,此外,HIV-1假病毒实验显示,miR-vif-1对HIV-1p24的抑制作用达66.5%,效果明显。结论所获得的miR-vif-1对HIV-1的复制具有良好的抑制作用,可为进一步的抗HIV-1感染研究提供基础。 展开更多
关键词 HIV-1 vif基因 RNA干扰 人工miRNA
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重组腺病毒表达载体介导艾滋病毒Vif蛋白调控KSHV潜伏感染的初探
10
作者 贾雪梅 王平 +1 位作者 秦娣 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期13-20,共8页
目的:利用AdEasy腺病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型(艾滋病毒:HIV-1)病毒体感染性因子(Vif)的重组腺病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤细胞系BCBL-1细胞,并检测Vif蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcomaassociated... 目的:利用AdEasy腺病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型(艾滋病毒:HIV-1)病毒体感染性因子(Vif)的重组腺病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤细胞系BCBL-1细胞,并检测Vif蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcomaassociated herpesvirus,KSHV)潜伏感染与裂解性复制的影响。方法:从实验室先前构建的重组真核表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中构建成pAdTrack-Vif,酶切线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化感受态BJ5183细胞构建成重组腺病毒质粒。重组腺病毒在AD293细胞中得到包装和扩增。用荧光计数法测定腺病毒滴度,以感染复数(MOI)为1的病毒量感染靶细胞BCBL-1,荧光显微镜观察靶细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并利用逆转录PCR(RT-PCR)和免疫印记(Western blot)技术分别检测Vif基因在靶细胞中的转录和表达情况,而且采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot分别检测KSHV裂解期基因ORF26 mRNA转录及裂解期蛋白vIL-6的表达。结果:经酶切鉴定、核酸序列测定、GFP表达和病毒上清液PCR证实成功包装了携带HIV-1 Vif基因的重组腺病毒,滴度为2.5×108 TU/ml。重组腺病毒感染BCBL-1细胞48 h后,80%以上的细胞中表达GFP,RT-PCR和Western blot均能够在相应位置检测到目的基因Vif的条带。Real-time PCR和Western blot结果显示,Vif降低KSHV ORF26 mRNA转录水平及vIL-6蛋白表达。结论:成功包装了含HIV-1 Vif基因的重组腺病毒且在BCBL-1细胞中表达的HIV-1 Vif蛋白能够抑制KSHV裂解性复制、增强病毒的潜伏感染。 展开更多
关键词 腺病毒:HIV-vif KSHV 病毒复制
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以HIV-1 Vif与人APOBEC3G为靶点的抗HIV-1药物的研究方法
11
作者 乔新华 张文俊 +1 位作者 李泽琳 曾毅 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期806-809,共4页
人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide 3protein G,APOBEC3G)是宿主的抗HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)因子,而HIV-1辅助蛋白———病毒感染因子Vif(viral... 人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide 3protein G,APOBEC3G)是宿主的抗HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)因子,而HIV-1辅助蛋白———病毒感染因子Vif(viral infectivity factor)可通过介导蛋白酶体途径降解APOBEC3G,因此针对APOBEC3G及HIV-1Vif进行抑制剂设计已经成为抗HIV-1药物研究新的方向之一,相应用于研究Vif-APOBEC3G相互作用的方法也越来越多,如免疫印迹、免疫杂交、脉冲追踪试验、生物发光共振能量转移检测、BIAcore检测等。作者将目前用于以Vif-APOBEC3G为靶点的药物的筛选及作用机制的研究方法进行了综述,为基于此的研究提供了策略。 展开更多
关键词 APOBEC3G HIV-1vif 抗HIV-1抑制剂
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人免疫缺陷病毒Ⅰ型Vif蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体制备
12
作者 隋洪帅 郭东星 +6 位作者 刘思扬 鲍作义 刘永健 庄道民 李韩平 李敬云 李林 《生物技术通讯》 CAS 2009年第4期475-478,共4页
目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vif蛋白,制备其单克隆抗体。方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Western印迹鉴定目的蛋白,... 目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vif蛋白,制备其单克隆抗体。方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Western印迹鉴定目的蛋白,亲和层析纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体。结果:构建了Vif蛋白的原核表达载体vif-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以包涵体形式存在;纯化获得高纯度的重组Vif蛋白,蛋白浓度可达0.56mg/mL;建立了抗Vif蛋白单克隆抗体细胞株,制备了腹水,滴度可达1∶16×106,抗体纯化后保持了活性和特异性。结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组Vif蛋白,制备了针对Vif蛋白的单克隆抗体,为研究Vif蛋白的功能和抗原性奠定了基础。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒Ⅰ型 vif蛋白 原核表达 单克隆抗体
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HIV-1 Vif与机体内在抗病毒因子APOBEC3G的研究进展 被引量：1
13
作者 李岚 杨怡姝 +1 位作者 李泽琳 曾毅 《国外医学（病毒学分册）》 2005年第5期143-146,共4页
近期研究表明,非允许性细胞中存在的载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)是机体内在的抗病毒因子,它在人免疫缺陷病毒(HIV)反转录过程中,使所形成的负链cDNA中的胞嘧啶脱氨,进而降低病毒的感染力。而Vif蛋白可结合APOBEC3G... 近期研究表明,非允许性细胞中存在的载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)是机体内在的抗病毒因子,它在人免疫缺陷病毒(HIV)反转录过程中,使所形成的负链cDNA中的胞嘧啶脱氨,进而降低病毒的感染力。而Vif蛋白可结合APOBEC3G,并激活泛素-蛋白酶体途径,使之降解,拮抗APOBEC3G的抗病毒活性,且二者之间的相互作用还存在种属特异性。Vif与APOBEC3G间的相互作用,为抗HIV药物的研究提供了新靶点。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 病毒感染性因子 APOBEC3G脱氨酶 泛素-蛋白酶体降解途径 APOBEC3G 抗病毒因子 vif蛋白 机体内 HIV-1 人免疫缺陷病毒(HIV) 泛素-蛋白酶体途径 载脂蛋白B mRNA编辑
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APOBEC3G抗HIV-1的分子机制及Vif基因对其拮抗作用研究进展
14
作者 屠燕捷 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2012年第3期1620-1622,共3页
近30年,艾滋病的高致病率和高死亡率一直被医学界高度关注,期望通过中医药研究在艾滋病防治上寻求突破,从而引发了中医药研究与分子生物学研究交叉与结合。由于近10年HIV的分子生物学研究文献,发现HIV的辅助蛋白vif和APOBEC3G为当前艾... 近30年,艾滋病的高致病率和高死亡率一直被医学界高度关注,期望通过中医药研究在艾滋病防治上寻求突破,从而引发了中医药研究与分子生物学研究交叉与结合。由于近10年HIV的分子生物学研究文献,发现HIV的辅助蛋白vif和APOBEC3G为当前艾滋病致病机制研究的热点。本文对HIV的辅助蛋白vif的生物学特性、APOBEC3G抗HIV-1的分子机制及vif与APOBEC3G相互作用的新近研究成果进行整理分析,探讨基于此进行HIV基因治疗的意义以及中医药治疗HIV可能的研究方向。 展开更多
关键词 HIV APOBEC3G vif
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HIV-1 Vif蛋白的体内表达及其生物学功能 被引量：2
15
作者 张文艳 孔维 于湘晖 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期737-740,共4页
目的分别构建带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因真核表达载体,在体内表达融合蛋白,并检测其生物学功能。方法PCR扩增带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因,克隆至真核表达载体VR1012上。将抗病毒因子APOBEC3G(A3G)分别与空载体VR1012、HIV-1野... 目的分别构建带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因真核表达载体,在体内表达融合蛋白,并检测其生物学功能。方法PCR扩增带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因,克隆至真核表达载体VR1012上。将抗病毒因子APOBEC3G(A3G)分别与空载体VR1012、HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,检测Vif-mbp和Vif-6His的表达,并进行A3G体内降解试验。将A3G和/或可产生病毒的质粒HXB2Neo△Vif分别与HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,通过A3G包装进病毒和Magi细胞感染试验,进一步检测HIV-1Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白的生物学功能。结果重组表达质粒Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012经双酶切鉴定证明构建正确。转染293T细胞48h后,Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白均有表达,但表达的Vif-mbp有不同程度的降解。Vif-6His可降解A3G,使其表达量下降至10%左右,而Vif-mbp几乎不能降解A3G。Vif-6His可阻止A3G包装进病毒颗粒中,而Vif-mbp无此功能。Vif-mbp可使HXB2Neo△Vif病毒感染能力恢复至15%,而Vif-6His可使其恢复至86%。结论已成功构建了带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因真核表达载体,表达的Vif-mbp融合蛋白影响了Vif的生物学功能,但Vif-6His融合蛋白不影响Vif的生物学功能。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒1型 vif蛋白 体内表达 生物学功能
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HIV-1 Vif与ElonginC蛋白在大肠杆菌中的共表达 被引量：1
16
作者 朱可彤 王小丹 +3 位作者 杜娟 郭博 孔维 于湘晖 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第7期579-580,583,共3页
目的在大肠杆菌中共表达HIV-1Vif与ElonginC蛋白。方法PCR扩增ElonginC基因全长DNA片段,克隆入pMDT-easy载体,经NdeⅠ/BamHⅠ双酶切后,与质粒pRSETB连接,构建质粒pRSETB-ElonginC。将质粒pMRI-Vif转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株,... 目的在大肠杆菌中共表达HIV-1Vif与ElonginC蛋白。方法PCR扩增ElonginC基因全长DNA片段,克隆入pMDT-easy载体,经NdeⅠ/BamHⅠ双酶切后,与质粒pRSETB连接,构建质粒pRSETB-ElonginC。将质粒pMRI-Vif转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株,再将此菌株制备成感受态细胞,用pRSETB-ElonginC质粒转化该细胞,经1mmol/L IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果质粒pRSETB-ElonginC经NdeⅠ/BamHⅠ双酶切,可切出约3000和400bp的2条片段,测序证明质粒构建正确。在大肠杆菌中共表达了Vif与ElonginC蛋白,该蛋白具有良好的抗原特异性。结论在大肠杆菌中共表达了Vif与ElonginC蛋白。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒-1 vif蛋白 ElonginC蛋白 原核共表达
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我国科技创新与金融发展的耦合协同测度——基于VIF-变异系数的筛选 被引量：7
17
作者 朱佳慧 于丽英 《上海大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期785-794,共10页
基于科技创新和金融发展的内涵,建立了包含89个指标的初步评价体系,并以我国28个省市的数据为基础,运用VIF-变异系数法,确定了耦合协同测度指标体系.构建了科技创新与金融发展耦合协同测度模型,对我国总体及15个试点地区近10年的科技创... 基于科技创新和金融发展的内涵,建立了包含89个指标的初步评价体系,并以我国28个省市的数据为基础,运用VIF-变异系数法,确定了耦合协同测度指标体系.构建了科技创新与金融发展耦合协同测度模型,对我国总体及15个试点地区近10年的科技创新和金融发展进行耦合协同测度及评价.研究结果表明:从总体上看,我国科技创新和金融发展综合发展指数呈上升趋势,科技创新与金融发展两系统耦合度较低,耦合协同度由高度不协同发展逐渐转变为低度协同发展;从区域上看,试点地区的耦合协同度稳步提高且高于总体水平,东部地区的耦合协同度高于中西部地区.这说明试点地区的科技金融发展态势较好,但东部和中西部地区的科技金融发展存在不同步、不均衡现象. 展开更多
关键词 科技创新 金融发展 vif-变异系数法 指标筛选 耦合协同
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Vif基因体外表达载体构建及其在无细胞系统中的表达 被引量：1
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作者 汪诚 陈海琴 +2 位作者 徐志南 殷秀飞 岑沛霖 《科技通报》 2007年第3期356-359,367,共5页
随着-omics(组学)时代的到来,无细胞蛋白质合成系统以具有快速、方便、易于高通量等优点,正在被广泛地研究和应用。本文选取HIV病毒感染因子Vif作为目标蛋白,构建了适宜体外表达的Vif表达载体pIVEX2.4c-Vif,并将其在大肠杆菌无细胞蛋白... 随着-omics(组学)时代的到来,无细胞蛋白质合成系统以具有快速、方便、易于高通量等优点,正在被广泛地研究和应用。本文选取HIV病毒感染因子Vif作为目标蛋白,构建了适宜体外表达的Vif表达载体pIVEX2.4c-Vif,并将其在大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中进行表达,为下一步进行高通量药物筛选奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 HIV 生物合成 无细胞合成系统 vif(virion infectivity factor)
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HIV的细胞耐受性：Vif-APOBEC的相互作用（第12届逆转录病毒和机会性感染的国际会议报告之一，英国伦敦）
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作者 Mark．Wainberg 鲁俊锋 杨月 《传染病网络动态》 2005年第4期29-30,共2页
英国伦敦国王大学博士Michael Malim发表了一篇关于HIV编码的Vif蛋白和细胞酶(APOBEC)资料的综述，概括了两者之间独特的相互作用。根据目前的了解，APOBEC能够引起HIv突变，Vif能够降解APOBEC。这篇讲演同时也为了纪念一位重要的病毒... 英国伦敦国王大学博士Michael Malim发表了一篇关于HIV编码的Vif蛋白和细胞酶(APOBEC)资料的综述，概括了两者之间独特的相互作用。根据目前的了解，APOBEC能够引起HIv突变，Vif能够降解APOBEC。这篇讲演同时也为了纪念一位重要的病毒学家——Bernard Fields博士，他在病毒学及抗病毒药物开发中开创了许多关键性的概念。 展开更多
关键词 HIV 爱滋病病毒 病毒感染 细胞耐受性 vif-APOBEC 细胞酶 vif蛋白
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CBF-β辅助SIVagm Vif蛋白诱导限制因子APOBEC3G的降解
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作者 朱丹彤 艾有为 +4 位作者 林跃智 马建章 王晓钧 侯志军 张明海 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期738-741,共4页
APOBEC3蛋白家族是一类重要的慢病毒复制的免疫限制因子。慢病毒编码的附属蛋白Vif可以与Cullin5-Elongin B/Elongin C形成E3泛素化连接酶复合物使APOBEC3G(A3G)聚泛素化和降解,从而抑制A3G对病毒的限制。CBF-β为RUNX家族转录辅助因子... APOBEC3蛋白家族是一类重要的慢病毒复制的免疫限制因子。慢病毒编码的附属蛋白Vif可以与Cullin5-Elongin B/Elongin C形成E3泛素化连接酶复合物使APOBEC3G(A3G)聚泛素化和降解,从而抑制A3G对病毒的限制。CBF-β为RUNX家族转录辅助因子,可以调节Vif介导的A3G降解作用。为探索CBF-β对非洲绿猴免疫缺陷病毒Vif蛋白(SIVagm Vif)的调节机制以及对A3G降解的影响,本研究通过生化及病毒学方法对SIVagm和HIV-1编码的Vif蛋白与CBF-β作用进行了对比性研究。结果显示,SIVagm编码的Vif对A3G的降解同样需要CBF-β的辅助。当Vif(HIV-1/SIVagm)编码的第38位色氨酸突变成丝氨酸后,CBF-β辅助Vif调节A3G降解的功能显著降低。由此表明,第38位色氨酸对于不同慢病毒编码的Vif与CBF-β的相互作用具有重要作用。由此推测,CBF-β辅助Vif介导的降解A3G的作用在灵长类慢病毒中具有保守性。 展开更多
关键词 慢病毒 vif APOBEC3G CBF-β
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