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miR-15b-5p通过USP9X影响PIK3CA/AKT1通路缓解哮喘气道炎症
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作者 周宇洋 王知广 +4 位作者 朴艺花 韩雪 宋艺兰 延光海 朴红梅 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期193-203,共11页
目的 研究miR-15b-5p是否能通过负调控泛素特异性肽酶9X(USP9X)下调磷脂酰肌醇4, 5-二磷酸3-激酶催化亚基α/AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(PIK3CA/AKT1)通路的表达,从而缓解哮喘气道炎症。方法 通过在线数据库(miRWalk)预测USP9X可能是miR-15b... 目的 研究miR-15b-5p是否能通过负调控泛素特异性肽酶9X(USP9X)下调磷脂酰肌醇4, 5-二磷酸3-激酶催化亚基α/AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(PIK3CA/AKT1)通路的表达,从而缓解哮喘气道炎症。方法 通过在线数据库(miRWalk)预测USP9X可能是miR-15b-5p的直接靶点,并进行了荧光素酶报告基因检测验证。通过免疫共沉淀(CO-IP)验证了USP9X与PIK3CA之间能否直接结合以及USP9X和其小分子抑制剂WP1130在PIK3CA的去泛素化中作用。取C57小鼠,随机分为Control组、 OVA组、 OVA联合NC组以及miR-15b-5p agomir治疗组,每组10只。BEAS-2B细胞用白细胞介素13(IL-13)诱导,并用miR-15b-5p mimic治疗。进行了HE、 Masson、 PAS、免疫组织化学、免疫荧光染色及流式细胞术、 Western blot法、实时定量PCR检测。结果 发现给予miR-15b-5p agomir和mimic后能够减少支气管周围炎性细胞,改善气道炎症,并且miR-15b-5p能靶向负调控USP9X。USP9X能够与PIK3CA直接结合,以蛋白酶体依赖性方式调节PIK3CA水平,并且USP9X对K29连接的PIK3CA蛋白起去泛素化作用,下调USP9X会使PIK3CA的泛素化水平增加。USP9X的小分子抑制剂WP1130与敲低USP9X作用一致,均能够增加PIK3CA的泛素化水平,使PIK3CA的蛋白水平降低。结论 miR-15b-5p/USP9X/PIK3CA/AKT1信号通路可能为哮喘提供潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 miR-15b-5p usp9x PIK3CA AKT1 泛素化 哮喘
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肺肉瘤样癌中USP9X和PD-L1表达的临床病理意义
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作者 杨阳 刘倩 +2 位作者 茹怡 张莎莎 刘标 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第6期746-750,共5页
目的探讨肺肉瘤样癌(pulmonary sarcomatoid carcinoma,PSC)中泛素特异性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X,USP9X)和程序性细胞死亡配体-1(programmed death ligand 1,PD-L1)的表达及临床病理学意义。方法采用免疫组化EnVision... 目的探讨肺肉瘤样癌(pulmonary sarcomatoid carcinoma,PSC)中泛素特异性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X,USP9X)和程序性细胞死亡配体-1(programmed death ligand 1,PD-L1)的表达及临床病理学意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测48例PSC中USP9X和PD-L1的表达,并分析两者表达与临床病理特征的关系及相关性。结果48例PSC中USP9X阳性率为81.3%(39/48),淋巴结阴性组中USP9X阳性率显著高于淋巴结阳性组(P<0.05);PD-L1阳性率为70.8%(34/48),男性PSC患者中PD-L1的阳性率显著高于女性患者(P<0.01)。相关性分析显示,PSC中USP9X与PD-L1表达呈显著正相关(P<0.05)。结论PSC中USP9X和PD-L1呈高表达,并且两者表达呈显著正相关,提示联合检测USP9X和PD-L1表达水平有助于判断PSC免疫治疗疗效。 展开更多
关键词 肺肿瘤 肉瘤样癌 usp9x PD-L1 免疫组织化学
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USP9X对Akt磷酸化水平及血小板活化的影响 被引量:1
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作者 贾雪梅 邵树军 +4 位作者 周璐洁 杜丹心 卢煌莹 陈诚 夏荣 《中国输血杂志》 CAS 2024年第4期377-384,共8页
目的 探讨血小板中去泛素化酶USP9X的表达及其对血小板功能的影响。方法 通过聚合酶链式反应和免疫印记方法检测人和小鼠血小板中USP9X的表达情况;分离制备年轻小鼠和老年小鼠的血小板,检测USP9X的表达变化;采用USP9X特异性抑制剂检测US... 目的 探讨血小板中去泛素化酶USP9X的表达及其对血小板功能的影响。方法 通过聚合酶链式反应和免疫印记方法检测人和小鼠血小板中USP9X的表达情况;分离制备年轻小鼠和老年小鼠的血小板,检测USP9X的表达变化;采用USP9X特异性抑制剂检测USP9X对血小板聚集释放及铺展功能的影响;收集激活不同时间点的血小板蛋白裂解液,并进行免疫印记检测磷酸化Akt的变化。结果 人血小板与小鼠血小板在mRNA水平和蛋白水平均表达USP9X。相对于年轻小鼠,老年小鼠血小板中USP9X的表达明显升高(0.87±0.099 vs 1.05±0.980,P<0.05)。使用USP9X的特异性抑制剂提前30 min孵育血小板,之后检测血小板的聚集、释放及铺展功能,结果显示,相比于对照组,USP9X抑制剂处理组的血小板的聚集和释放水平明显下降(P<0.05);相比于对照组,抑制剂处理组45 min的铺展面积显著降低。最后,免疫印记结果显示,USP9X抑制剂处理组的血小板的Akt磷酸化水平明显下降。结论 人和小鼠的血小板表达USP9X,USP9X可促进血小板的聚集释放及铺展,并可影响Akt的磷酸化水平,USP9X的抑制剂或可成为潜在的临床血栓干预靶点。 展开更多
关键词 usp9x 血小板 血栓 AKT磷酸化
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USP9X、Survivin在胰腺癌组织中的表达及临床意义 被引量:3
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作者 任泽强 张蓬波 +2 位作者 丁伟超 张秀忠 张冲 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第33期5164-5169,共6页
目的:探讨胰腺癌组织与癌旁非肿瘤组织中生存素(Survivin)、泛素特异性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X,USP9X)的表达情况及其与生存期的关系,研究Survivin与USP9X表达之间的关系.方法:应用SP法免疫组织化学染色技术检测55例... 目的:探讨胰腺癌组织与癌旁非肿瘤组织中生存素(Survivin)、泛素特异性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X,USP9X)的表达情况及其与生存期的关系,研究Survivin与USP9X表达之间的关系.方法:应用SP法免疫组织化学染色技术检测55例手术切除的原发性胰腺癌组织与癌旁非肿瘤胰腺组织中Survivin、USP9X的表达情况,结合临床资料进行相关预后分析,并用相关性检验分析Survivin与USP9X表达之间的关系.结果:胰腺癌组织中Survivin、USP9X的高表达阳性率分别为65.5%(36/55)、58.2%(32/55),癌旁非肿瘤组织中均为低表达.Survivin、U S P9X的表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位及肿瘤大小无关(P>0.05),而与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期显著相关(P<0.05).USP9X与Survivin在胰腺癌组织中的表达呈正相关性(r=0.624,P<0.05).生存分析显示,Survivin、USP9X高表达组患者的预后明显差于低表达组(P<0.05).Cox比例风险分析显示,肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、Survivin及USP9X表达均是影响预后的独立危险因素(P<0.05).结论:在胰腺癌的发生、发展中,Survivin与U S P9X可能存在一定的相互协同作用,USP9X可能是抑制Survivin降解的去泛素化酶之一.Survivin、USP9X高表达的胰腺癌组织可能恶性程度更高,预后更差. 展开更多
关键词 胰腺癌 usp9x SURVIVIN 免疫组织化学 预后
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去泛素化酶USP9X在etoposide促结肠癌细胞SW620凋亡中的作用研究 被引量:3
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作者 魏本尊 李捷 +3 位作者 沈超 孙广涛 亓荣华 李增鹏 《中国现代普通外科进展》 CAS 2014年第1期8-11,68,共5页
目的:探讨USP9X在etoposide促结肠癌细胞SW620凋亡中的作用和可能的机制。方法:设计并合成USP9X的shRNA和对照shcontrol,采用半定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率。结肠癌细胞SW620分别转染USP9X-shRNA和shcontrol后用etoposide处理... 目的:探讨USP9X在etoposide促结肠癌细胞SW620凋亡中的作用和可能的机制。方法:设计并合成USP9X的shRNA和对照shcontrol,采用半定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率。结肠癌细胞SW620分别转染USP9X-shRNA和shcontrol后用etoposide处理,检测MCL1的蛋白水平变化并通过c-PARP的水平检测细胞的凋亡水平。结果:半定量RT-PCR和Western blot检测显示在SW620细胞中USP9X-shRNA能够显著降低USP9X的mRNA和蛋白的表达,抑制率达70%,该条shRNA可以作为有效干扰序列进行后续实验。20μg/mL etoposide处理24 h后,经c-PARP的水平检测发现感染USP9X-shRNA的SW620细胞比对照组细胞的凋亡率显著增加。结论:以RNA干扰技术沉默USP9X基因可增加结肠癌细胞SW620对etoposide的敏感性,显著增加etoposide诱导的结肠癌SW620细胞的凋亡,推测USP9X基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 usp9x ETOPOSIDE 凋亡
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USP9X在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理特征的关系 被引量:6
6
作者 彭静 胡倩 +2 位作者 刘卫平 刘珊玲 王和 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期413-416,共4页
目的探讨泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及肺良性病变组织中的表达特点及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色方法检测71例NSCLC及20例肺良性病变组织中USP9X蛋白的表达,并分析其中51例NSCLC患者肺癌组织标本中U... 目的探讨泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及肺良性病变组织中的表达特点及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色方法检测71例NSCLC及20例肺良性病变组织中USP9X蛋白的表达,并分析其中51例NSCLC患者肺癌组织标本中USP9X的表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果NSCLC患者USP9X的阳性表达率为69.0%(49/71),较肺良性病变患者阳性表达率20.0%(4/20)高,差异有统计学意义(P<0.001)。NSCLC组织中USP9X的表达在不同肿瘤分化程度及有无淋巴结转移间的差异有统计学意义(P均<0.05)。生存分析中,USP9X阳性表达组患者的生存率低于阴性表达组(P<0.05)。Cox多因素回归分析显示肿瘤的病理类型、TNM分期及USP9X表达是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论 USP9X的过表达在NSCLC的侵袭转移及发生发展中起重要作用,并对肿瘤患者的预后判断有一定参考价值。 展开更多
关键词 肺肿瘤 usp9x 生存 免疫组化
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USP9X与MCL-1在鼻咽癌中表达及预后分析 被引量:5
7
作者 冯燚源 杨晶 +3 位作者 张雪 李珊珊 李源泉 杨洪斌 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2022年第7期1584-1587,共4页
目的探讨X染色体连锁的泛素特异肽酶9(USP9X)与髓细胞白血病基因(MCL)-1在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌预后的相关性。方法选取鼻咽癌患者100例,提取其癌变组织作为观察组,再提取100份健康体检人群的鼻咽组织作为对照组,采用免疫组化Envi... 目的探讨X染色体连锁的泛素特异肽酶9(USP9X)与髓细胞白血病基因(MCL)-1在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌预后的相关性。方法选取鼻咽癌患者100例,提取其癌变组织作为观察组,再提取100份健康体检人群的鼻咽组织作为对照组,采用免疫组化Envision法检测两组USP9X与MCL-1的表达情况。观察不同的肿瘤分期、蔓延程度及有无淋巴结转移鼻咽癌患者USP9X与MCL-1的表达情况。对USP9X与MCL-1阳性的鼻咽癌患者进行放化疗,并提取其癌细胞进行细胞培养,采用Western印迹进行蛋白定量分析,观察USP9X与MCL-1阳性的鼻咽癌患者放化疗前后USP9X与MCL-1的表达情况。结果观察组USP9X阳性的患者有72例,对照组仅有2例,两组差异有统计学意义(χ^(2)=6.937,P=0.001);观察组MCL-1阳性的患者有75例,对照组仅有1例,两组差异有统计学意义(χ^(2)=7.634,P=0.001);USP9X及MCL-1与肿瘤分期、蔓延程度及淋巴转移有关,且病情越重,USP9X与MCL-1表达越明显(P<0.05);USP9X与MCL-1阳性的鼻咽癌患者放化疗后表达明显下降(P<0.05),放化疗后蛋白表达量也明显下降(P<0.05)。结论USP9X与MCL-1在鼻咽癌中呈高表达,且在放化疗后表达显著降低,可作为临床评价鼻咽癌预后的诊断标准之一。 展开更多
关键词 X染色体连锁的泛素特异肽酶9(usp9x) 髓细胞白血病基因(MCL)-1 鼻咽癌
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去泛素化酶USP9X在宫颈鳞癌中的表达及临床意义 被引量:4
8
作者 程艳 刘钧 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第18期2947-2950,共4页
目的:探讨X染色体连锁的泛素特定蛋白水解酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)在宫颈鳞癌中的表达及临床意义。方法:应用En Vision法免疫组织化学技术对宫颈无上皮内瘤变或其他恶性病变组织(negative for intraepitheli... 目的:探讨X染色体连锁的泛素特定蛋白水解酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)在宫颈鳞癌中的表达及临床意义。方法:应用En Vision法免疫组织化学技术对宫颈无上皮内瘤变或其他恶性病变组织(negative for intraepithelial lesion or malignancy,NILM)、低级别上皮内瘤变(lower grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高级别上皮内瘤变(high grde squmous intrepithelil lesion,HSIL)各40例及宫颈鳞癌(cervical squamous-cell carcinoma,CSCC)标本85例中的USP9X蛋白水平进行检测;蛋白印迹法(Western-Blot)检测宫颈癌细胞Si Ha中USP9X蛋白的水平。结果:USP9X从宫颈正常上皮到宫颈鳞癌的逐级病变中其表达水平逐步升高:NILM(5.0%)、LSIL(12.5%)、HSIL(40.0%)、CSCC(60.0%);Si Ha细胞培养中,顺铂(C-DDP)处理组USP9X蛋白表达水平较对照组明显降低。结论:USP9X表达的上调可能参与了宫颈癌的发生与发展,可作为宫颈癌治疗时重要参考及预后指标,有望成为宫颈癌的一个潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 usp9x 宫颈鳞癌 表达 蛋白印迹法
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去泛素化酶USP9X在结肠癌组织中的表达及意义 被引量:4
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作者 芦文萱 唐伏秋 杨波 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第1期88-91,共4页
目的:探讨去泛素化酶USP9X在结肠癌组织中的表达特点及对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集解放军中部战区总医院病理科存档的结肠癌组织标本和癌旁正常结肠组织标本76例,免疫组化法检测USP9X在不同性别、年龄患者的结肠癌组织、癌旁正... 目的:探讨去泛素化酶USP9X在结肠癌组织中的表达特点及对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集解放军中部战区总医院病理科存档的结肠癌组织标本和癌旁正常结肠组织标本76例,免疫组化法检测USP9X在不同性别、年龄患者的结肠癌组织、癌旁正常结肠组织中的表达情况。siRNA抑制人结肠癌HCT116细胞株USP9X的表达,MTT法检测HCT116细胞增殖能力。结果:76例结肠癌患者中,USP9X阳性表达53例,占69.7%。癌旁正常大肠组织中,USP9X阳性表达率19.7%。USP9X的表达与结肠癌淋巴结转移和浸润深度相关。siRNA抑制结肠癌HCT116细胞USP9X表达后,与空白对照组和阴性对照组比较,干扰组细胞增殖能力显著下降。结论:去泛素化酶USP9X在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常结肠组织,并与肿瘤侵袭转移相关。特异性抑制USP9X基因的表达可抑制结肠癌细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 结肠癌 usp9x 增殖 侵袭
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Computationally predicted pathogenic USP9X mutation identified in infertile men does not affect spermatogenesis in mice 被引量:2
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作者 Wei Liu Yue-Wen Wang +12 位作者 Huan Zhang Xue-Feng Xie Ao Ma Qumar Zaman Abdul Rafay Javed Tanveer Abbas Wasim Shah Riaz Ahmad Da-Ren Zhao Hui Ma Muhammad Zubair Ranjha Khan Qing-Hua Shi 《Zoological Research》 SCIE CAS CSCD 2022年第2期225-228,共4页
Infertility is a major health issue,affecting approximately 15%of couples of child-bearing age.Although nearly half of idiopathic infertility cases are assumed to have a genetic basis,the underlying causes remain larg... Infertility is a major health issue,affecting approximately 15%of couples of child-bearing age.Although nearly half of idiopathic infertility cases are assumed to have a genetic basis,the underlying causes remain largely unknown in most infertile men. 展开更多
关键词 TILE assumed usp9x
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MiR-551b-3p靶向USP9X对人肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响 被引量:4
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作者 蒋可心 何怡江 张旭 《临床与病理杂志》 2021年第1期1-10,共10页
目的:探讨miR-551b-3p对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响及分子机制。方法:将miRNC,miR-551b-3p,anti-miR-NC,anti-miR-551b-3p,si-NC,si-USP9X分别转染至A549中,记为miR-NC组、miR-551b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-551b-3p组、... 目的:探讨miR-551b-3p对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响及分子机制。方法:将miRNC,miR-551b-3p,anti-miR-NC,anti-miR-551b-3p,si-NC,si-USP9X分别转染至A549中,记为miR-NC组、miR-551b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-551b-3p组、si-NC组、si-USP9X组;将miR-551b-3p分别与pc DNA和pc DNA-USP9X共转染至A549中,记为miR-551b-3p+pc DNA组、miR-551b-3p+pc DNA-USP9X组。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测miR-551b-3p和USP9X的表达水平;蛋白质印迹法检测X染色体连锁的泛素特定蛋白水解酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 (B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)的表达;荧光素酶报告实验检测miR-551b-3p和USP9X的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆集落形成实验检测放射敏感性。结果:肺癌组织和肺癌细胞A549中miR-551b-3p表达水平显著降低,USP9X mRNA和蛋白质表达水平显著升高(均P<0.001)。miR-551b-3p靶向调控USP9X,过表达miR-551b-3p和抑制USP9X表达,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,Bax表达水平显著升高,细胞的存活曲线明显下移(均P<0.001)。USP9X过表达逆转了miR-551b-3p过表达对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的作用。结论:过表达miR-551b-3p促进肺癌A549细胞凋亡,增强肺癌细胞放射敏感性,其机制可能与USP9X有关。 展开更多
关键词 miR-551b-3p usp9x 肺癌 凋亡 放射敏感性
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USP9X在乳腺癌中的表达与EGFR相关性的研究 被引量:1
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作者 金堃 周昱 张赫男 《黑龙江医药科学》 2021年第4期191-193,196,共4页
目的:通过运用实验组织病理学方法分析乳腺癌组织中蛋白质去泛素化酶USP9X和表皮生长因子受体EGFR在实验组中的阳性情况,以及分析两者之间的相关性,并进一步探讨其临床意义。方法:选取本院2018-12~2019-07经病理学确诊为乳腺浸润性导管... 目的:通过运用实验组织病理学方法分析乳腺癌组织中蛋白质去泛素化酶USP9X和表皮生长因子受体EGFR在实验组中的阳性情况,以及分析两者之间的相关性,并进一步探讨其临床意义。方法:选取本院2018-12~2019-07经病理学确诊为乳腺浸润性导管癌石蜡包块50例,并选取癌旁正常组织50例作为实验对照组,患者临床病例资料完整。从组织及细胞层面检测两者的表达情况,并且分析其表达与乳腺癌临床病理学之间的关系,以及两者表达之间的相关性。结果:USP9X在癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),其表达与乳腺癌的临床分期、组织学分级及淋巴结转移相关(P<0.05);EGFR在癌组织中的表达水平高于癌旁正常乳腺组织(P<0.05),其表达与乳腺癌的临床分期、组织学分级、淋巴结转移及ER、PR、Her-2的阴性表达相关(P<0.05);USP9X和EGFR在乳腺癌组织中的表达呈正相关(P<0.05,r=0.311)。结论:USP9X和EGFR均有可能参与了乳腺癌的发生、发展过程,两者的表达与乳腺癌的预后呈负相关;USP9X可能通过某种途径抑制EGFR的正常降解;两者为乳腺癌的研究提供新的方向。 展开更多
关键词 乳腺癌 usp9x EGFR 免疫组织化学 临床病理学
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去泛素化酶USP9X促进消化系统肿瘤进展的研究现状 被引量:1
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作者 王捷夫 王茜 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第5期542-548,共7页
去泛素化酶9X(USP9X)是去泛素化酶(DUBs)中的一员。USP9X是X染色体连锁的泛素特异性蛋白酶(U SPs),可以通过稳定不同的底物,发挥相应的生物学效应。USP9X在信号通路转导、细胞生长及迁移、免疫应答、干细胞的自我更新及分化、神经系统... 去泛素化酶9X(USP9X)是去泛素化酶(DUBs)中的一员。USP9X是X染色体连锁的泛素特异性蛋白酶(U SPs),可以通过稳定不同的底物,发挥相应的生物学效应。USP9X在信号通路转导、细胞生长及迁移、免疫应答、干细胞的自我更新及分化、神经系统功能以及肿瘤发生发展进程中均起着重要作用。因其在消化道肿瘤发生发展中的重要作用以及作为药物靶点的可行性,本文综述了USP9X在常见的消化系统恶性肿瘤发生发展中作用的研究进展。 展开更多
关键词 去泛素化酶 usp9x 信号通路 消化系统肿瘤 综述
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沉默USP9X对肝癌HepG2细胞周期和自噬的作用机制 被引量:1
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作者 刘晓岗 沈预程 +1 位作者 刘春桂 吉浩明 《肝脏》 2020年第8期888-890,共3页
目的探讨沉默USP9X对肝癌HepG2细胞周期和自噬的作用机制。方法采用siRNA技术沉默USP9X在肝癌HepG2细胞株中的表达,实验分为siRNA组和阴性对照(NC)组;采用MTT法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用western blot检测细胞... 目的探讨沉默USP9X对肝癌HepG2细胞周期和自噬的作用机制。方法采用siRNA技术沉默USP9X在肝癌HepG2细胞株中的表达,实验分为siRNA组和阴性对照(NC)组;采用MTT法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用western blot检测细胞中USP9X、LC3-II以及Beclin-1蛋白的表达。结果转染siRNA后,siRNA组中USP9X蛋白表达明显低于NC组(0.44±0.15 vs.1.00±0.00,P<0.05);MTT结果表明在HepG2细胞株在沉默24 h、48 h和72 h室的细胞增殖率分别为0.0873±0.0131、0.1047±0.0128和0.1203±0.0148,分别明显低于NC组的0.1113±0.0083、0.1333±0.0062和0.1610±0.0080(P<0.05);流式细胞术结果表明在siRNA组中,处于G0-G1期的HepG2细胞数量明显高于NC组(72.32%±1.53%vs.56.30%±3.47%,P<0.05),处于S期的HepG2细胞数量明显低于NC组(20.53%±0.66%vs.37.73%±1.82%,P<0.05);western blot结果表明siRNA组中的Beclin-1和LC3-II蛋白表达明显高于NC组(1.47±0.19 vs.1.00±0.00,1.48±0.11 vs.1.00±0.00,均P<0.05)。结论USP9X基因沉默可通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞自噬进而有效抑制肝癌HepG2细胞的过度增殖。 展开更多
关键词 usp9x 肝癌细胞 增殖 自噬
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脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系 被引量:1
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作者 杜蓓 张民 +1 位作者 张建飞 刘英彦 《中国临床神经外科杂志》 2023年第12期712-715,共4页
目的探讨脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系。方法选取2016年6月至2018年6月手术切除的108例脑胶质瘤组织标本和25例颅内减压术中切除的正常脑组织为对照,免疫组织化学染色法检测组织USP9X蛋白表达水平,根据染... 目的探讨脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系。方法选取2016年6月至2018年6月手术切除的108例脑胶质瘤组织标本和25例颅内减压术中切除的正常脑组织为对照,免疫组织化学染色法检测组织USP9X蛋白表达水平,根据染色强度评分和阳性细胞比例评分≥4分定为高表达。随访截止2023年5月,计算总体生存时间。结果108例胶质瘤中,WHO分级Ⅱ级38例,Ⅲ级46例,Ⅳ级24例。WHO分级Ⅳ级(79.17%)、Ⅲ级(58.69%)、Ⅱ级(39.47%)脑胶质瘤组织USP9X高表达率均明显高于正常脑组织(24.00%,P<0.05),并且WHO分级越高,USP9X高表达率越高(P<0.05)。随访期间,失访8例,死亡68例(高表达组51例,低表达组17例)。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示USP9X高表达是脑胶质瘤不良生存预后的独立危险因素(OR=2.173;95%CI 1.412~5.572;P<0.001),生存曲线分析显示USP9X高表达病人的中位总体生存期较低表达病人明显缩短(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织USP9X呈高表达,与病人不良生存预后有关。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 去泛素化酶usp9x 预后 基因表达
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去泛素连接酶USP9X通过调控FOXM1介导糖酵解影响鼻咽癌细胞增殖的机制研究
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作者 万俊 谢丹 杜云艳 《肿瘤》 CAS 北大核心 2023年第12期935-946,共12页
目的:探讨去泛素连接酶USP9X(deubiquitin ligase 9X)是否通过调控叉头框蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)介导糖酵解从而影响鼻咽癌细胞的增殖能力。方法:采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测鼻咽癌组织和正常鼻黏膜组织以及鼻咽癌... 目的:探讨去泛素连接酶USP9X(deubiquitin ligase 9X)是否通过调控叉头框蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)介导糖酵解从而影响鼻咽癌细胞的增殖能力。方法:采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测鼻咽癌组织和正常鼻黏膜组织以及鼻咽癌细胞中USP9X mRNA和蛋白的表达情况。通过病毒感染的方法将携带有特异性针对USP 9X基因的shRNA(shUSP9X)和携带有USP9X全基因的重组质粒Flag-USP9X(过表达USP9X)分别转入鼻咽癌CNE2和HNE2细胞,采用CCK-8法检测沉默或过表达USP 9X基因对鼻咽癌细胞增殖的影响,通过对细胞能量代谢和细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)的检测分析对鼻咽癌细胞糖酵解能力的影响。通过ubibrowser_v3/数据库、免疫共沉淀和ZDOCK软件分析USP9X与FOXM1蛋白的结合情况,并通过泛素化实验观察沉默USP9X对FOXM1蛋白泛素化水平的影响;随后进一步通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测对FOXM1 mRNA和蛋白表达的影响。最后,采用慢病毒感染的方法在沉默USP9X表达的CNE2细胞中同时转入重组载体Flag-FOXM1恢复FOXM1的表达,再通过CCK-8法、细胞能量代谢和ECAR检测分析上调FOXM1对CNE2细胞增殖和糖酵解能力的影响。结果:与正常鼻黏膜组织相比,鼻咽癌组织中USP9X mRNA和蛋白的表达水平均显著提高(P均<0.05)。下调鼻咽癌CNE2细胞中USP9X的表达水平后,CCK-8法、细胞能量代谢检测和ECAR实验检测发现,CNE2细胞的增殖和糖酵解能力均被明显抑制(P均<0.05)。相反,上调HNE2细胞中USP9X的表达水平后,HNE2细胞的增殖和糖酵解能力均被明显提高(P均<0.05)。通过ubibrowser_v3/数据库、免疫共沉淀和ZDOCK软件证实,USP9X与FOXM1蛋白存在相互结合的关系,CNE2细胞中沉默USP9X表达水平可显著增加FOXM1的泛素化水平。在低表达USP9X的CNE2细胞中过表达FOXM1可恢复鼻咽癌细胞的增殖和糖酵解能力(P均<0.05)。结论:去泛素连接酶USP9X通过抑制FOXM1泛素化降解进而提高鼻咽癌细胞的糖酵解能力,最终促进鼻咽癌细胞的增殖。USP9X可能是鼻咽癌治疗上一个潜在的新靶点。 展开更多
关键词 鼻咽癌 去泛素化酶usp9x 细胞增殖 糖酵解 FOXM1
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慢病毒介导的USP9X基因RNA干扰对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤生长的影响
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作者 周晓华 刘志毅 +6 位作者 张蓬波 张秀忠 任泽强 孙文白 徐盼 吴耐 钱旭 《癌症进展》 2019年第8期905-909,共5页
目的研究慢病毒介导的连锁的泛素特异肽酶9(USP9X)基因RNA干扰对人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的影响。方法将靶向USP9X基因的干扰小RNA(siRNA)慢病毒(LV-siRNA-USP9X)和阴性对照慢病毒(LV-siRNA-NC)转染至SW1990细胞,并分别作为siUSP9... 目的研究慢病毒介导的连锁的泛素特异肽酶9(USP9X)基因RNA干扰对人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的影响。方法将靶向USP9X基因的干扰小RNA(siRNA)慢病毒(LV-siRNA-USP9X)和阴性对照慢病毒(LV-siRNA-NC)转染至SW1990细胞,并分别作为siUSP9X组和siNC组,未转染细胞作为对照组,分别将3组细胞系接种至裸鼠皮下,比较3组裸鼠接种第30天的移植瘤生长情况和瘤体重量。蛋白质印记(Western blot)法和免疫组织化染色检测3组裸鼠皮下移植瘤中survivin蛋白的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI)。结果siUSP9X组USP9X蛋白的相对表达量均明显低于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),干扰效率约为90%。siUSP9X组裸鼠的肿瘤体积明显小于siNC组和对照组裸鼠,且随着接种时间的延长,差异越来越明显。在接种第30天时,siUSP9X组裸鼠瘤体重量均小于siNC组和对照组裸鼠,抑瘤率为52%。siUSP9X组survivin蛋白的相对表达量和阳性表达率均低于siNC组和对照组,AI均高于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的USP9X基因沉默可明显抑制人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的生长,该现象可能与其下调survivin蛋白的表达并促进细胞凋亡有关,USP9X有可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 RNA干扰 usp9x SW1990 慢病毒 survivin
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小续命汤通过下调USP9X调控NLRP3泛素化水平干预急性肺损伤的机制研究 被引量:7
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作者 项忆瑾 蔡定芳 +3 位作者 王平 於佳伟 蔡敏 李祥婷 《上海中医药杂志》 2022年第3期48-55,共8页
目的探究小续命汤通过下调泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)干预脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)炎症反应机制。方法制备含药血清,使用10%小续命汤含药血清预处理Ⅱ型肺泡上皮细胞。(1)小续命汤对LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症及功能的影响... 目的探究小续命汤通过下调泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)干预脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)炎症反应机制。方法制备含药血清,使用10%小续命汤含药血清预处理Ⅱ型肺泡上皮细胞。(1)小续命汤对LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症及功能的影响:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组。ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)水平。qRT-PCR和Western blot检测紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin的表达。(2)小续命汤通过USP9X发挥改善ALI细胞模型的炎症及功能:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组。PCR和Westernblot检测USP9X的表达。(3)USP9X与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白相互作用:人肺泡上皮细胞内USP9X过表达后,Co-IP联合质谱检测USP9X与NLRP家族互作,通过Western blot验证确定NLRP3与USP9X的关系。(4)小续命汤缓解LPS导致的人肺泡上皮细胞焦亡:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组。Western blot检测NLRP3、IL-1β、Pro-IL-1β、Caspase-1、Pro-Caspase-1,PCR检测NLRP3、IL-1β、Caspase-1,CCK-8检测细胞焦亡。结果(1)与模型组比较,小续命汤预处理显著减少LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的蛋白表达水平(P<0.05),显著增加紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin的蛋白和mRNA表达水平。(2)与模型组比较,小续命汤含药血清预处理显著降低USP9X的转录及蛋白水平的表达(P<0.05)。(3)Co-IP联合质谱检测USP9X与NLRP家族互作,通过Western blot验证确定NLRP3与USP9X存在互作。(4)与模型组比较,小续命汤预处理显著减少LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞NLRP3、IL-1β、Pro-IL-1β、Caspase-1、Pro-Caspase-1的蛋白和转录水平,缓解细胞焦亡的发生(P<0.05)。结论小续命汤能有效改善急性肺损伤,该作用可能与下调USP9X调控NLRP3泛素化水平的表达相关。 展开更多
关键词 小续命汤 急性肺损伤 脂多糖 泛素特异性蛋白酶 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 中药研究
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七氟醚可逆性下调糖尿病模型大鼠心肌生物钟蛋白BMAL1的表达
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作者 刘慧 韩冲芳 +3 位作者 秦小英 于菁 贺建东 杨文曲 《基础医学与临床》 CAS 2025年第1期70-75,共6页
目的观察七氟醚(SEV)对糖尿病大鼠心肌生物钟基因芳香烃受体核转运样蛋白1(BMALl1)表达的影响,并探讨其变化规律。方法雄性SD大鼠60只,体质量200~250 g,将正常大鼠分为吸氧组(NC)、吸七氟醚组(SEV);常规建立糖尿病模型,建立成功后分为... 目的观察七氟醚(SEV)对糖尿病大鼠心肌生物钟基因芳香烃受体核转运样蛋白1(BMALl1)表达的影响,并探讨其变化规律。方法雄性SD大鼠60只,体质量200~250 g,将正常大鼠分为吸氧组(NC)、吸七氟醚组(SEV);常规建立糖尿病模型,建立成功后分为吸氧组(DM)、吸七氟醚组(DM+SEV),吸入时间5 h(n=15)。4组试验动物分别在停止麻醉后0、12和24 h处死,分离心肌组织。用Western blot测定生物钟基因BMAL1与其活化酶泛素特异性肽酶9X(USP9X)的表达;HE染色观察心肌组织病理特征以及免疫荧光共定位观察USP9X与BMAL1之间的相互关系。结果停止麻醉后0、12 h,与DM组比较,DM+SEV组BMAL1、USP9X表达均明显下调(P<0.05);停止麻醉后24 h,与DM组比较,DM+SEV组BMAL1、USP9X表达水平的变化差异无统计学意义。HE染色光镜下显示:DM+SEV组在停止麻醉后0、12 h时心肌组织纤维结构排列发生改变,且在停止麻醉后0 h时这种改变最为显著,但在24 h时心肌组织结构排列整齐。免疫荧光共定位结果显示:USP9X与BMAL1蛋白主要分布于心肌细胞质中,两者存在重叠部分。且受七氟醚影响,在停止麻醉后0、12 h两者重叠部分较少,而在24 h时两者重叠部分较多,接近于DM组。结论七氟醚可逆性改变糖尿病大鼠心肌生物钟基因BMAL1表达,该作用在停止麻醉后12 h仍然存在,而在停止麻醉后24 h该作用明显减弱。 展开更多
关键词 七氟醚 糖尿病 心肌 芳香烃受体核转运样蛋白1(BMAL1) 泛素特异性肽酶9X(usp9x)
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USP9X shRNA对非小细胞肺癌A549细胞侵袭和凋亡影响 被引量:1
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作者 李志杰 韦海涛 +1 位作者 张伟华 李丽 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2019年第4期460-465,共6页
目的探讨泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)shRNA对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞侵袭和凋亡影响.方法USP9X shRNA慢病毒感染A549细胞,Realtime PCR和Western blot检测下调效果,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验测定克隆能力,流式细胞术测定凋亡,Tr... 目的探讨泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)shRNA对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞侵袭和凋亡影响.方法USP9X shRNA慢病毒感染A549细胞,Realtime PCR和Western blot检测下调效果,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验测定克隆能力,流式细胞术测定凋亡,Transwell小室测定侵袭和迁移,免疫印迹检测KI-67、PCNA、C-Caspase-3、C-Caspase-9、MMP-2、MMP-9、E-Cadherin、Vimentin蛋白表达.结果USP9X shRNA慢病毒感染后的A549细胞中USP9X表达水平下降,细胞增殖能力、克隆形成能力降低,细胞凋亡水平增加,细胞侵袭和迁移能力下降,细胞中KI-67、PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白水平下降,C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白水平升高,E-Cadherin蛋白水平升高,Vimentin蛋白水平降低.结论USP9X shRNA抑制NSCLC A549细胞侵袭并诱导凋亡. 展开更多
关键词 usp9x 非小细胞肺癌 细胞凋亡 侵袭
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