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汉坦病毒SEO型S基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达 被引量：2
1
作者 袁子国 张秀香 +5 位作者 李修明 张守峰 徐慧娟 高胜岩 王晓虎 扈荣良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期111-114,共4页
目的构建汉坦病毒SEO型S基因原核表达载体。方法应用RT-PCR方法扩增汉坦病毒SEO型的YZG-Changchun株S基因,克隆至pMD18-T载体中,经酶切鉴定及PCR分析后,定向克隆入原核表达载体pET-28a中,转化E.coliRosetta,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和We... 目的构建汉坦病毒SEO型S基因原核表达载体。方法应用RT-PCR方法扩增汉坦病毒SEO型的YZG-Changchun株S基因,克隆至pMD18-T载体中,经酶切鉴定及PCR分析后,定向克隆入原核表达载体pET-28a中,转化E.coliRosetta,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析外源蛋白的表达情况。结果表达载体经双酶切和测序证明构建正确。IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导4.5 h时,S基因在原核细胞中得到了高效表达,表达的蛋白占菌体蛋白总量的37%,纯化后的蛋白具有良好的抗原活性。结论已成功构建了汉坦病毒SEO型S基因原核表达载体,并得到高效表达。 展开更多
关键词 汉坦病毒 seo型 S基因 原核表达
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SEO型汉坦病毒全NP蛋白及NP蛋白型特异区编码基因的克隆、表达 被引量：2
2
作者 耿志洲 张莉 +3 位作者 刘翠英 王华 孟祥芝 杭长寿 《现代预防医学》 CAS 2002年第4期500-503,共4页
目的 :开发简单、可靠的 HTN、SEO型汉坦病毒血清学分型检测方法。方法 :应用 RT- PCR法对全 NP蛋白基因及其型特异区基因进行扩增 ,经 TA克隆及 Cui- SS、Cui- 15 5杆状病毒载体的构件、转获重组杆状病毒 ,再感染 Sf9细胞进行表达。结... 目的 :开发简单、可靠的 HTN、SEO型汉坦病毒血清学分型检测方法。方法 :应用 RT- PCR法对全 NP蛋白基因及其型特异区基因进行扩增 ,经 TA克隆及 Cui- SS、Cui- 15 5杆状病毒载体的构件、转获重组杆状病毒 ,再感染 Sf9细胞进行表达。结果 :克隆与表达了 SEO病毒 NP蛋白的全蛋白编码区及型特异编码区 (15 5到 4 2 9氨基酸处的编码基因 ) ,全 NP蛋白表达产物与病毒株感染 Vero E6细胞的反应谱完全一致 ,型特异区表达产物与相应的型特异 Mc Ab结合。结论 :建立了 SEO型病毒全 NP蛋白及 NP蛋白型特异区编码基因的克隆和表达方法 ,为开发简便、可靠的 展开更多
关键词 全NP蛋白 逆转录-聚合酶链反应 血清学分型 基因克隆 基因表达 seo型汉坦病毒 编码区基因
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青岛地区肾综合征出血热病毒基因分型 被引量：2
3
作者 程茂玲 乔刚 《检验医学》 CAS 北大核心 2011年第8期523-526,共4页
目的调查青岛地区肾综合征出血热病毒的流行情况,研究病毒在该地区的分子流行病学特征及基因分型。方法采集64例肾综合征出血热(HFRS)急性期患者血清标本,提取血清中病毒RNA作为模板。根据GenBank中汉坦病毒基因序列,设计HTN型和SEO型... 目的调查青岛地区肾综合征出血热病毒的流行情况,研究病毒在该地区的分子流行病学特征及基因分型。方法采集64例肾综合征出血热(HFRS)急性期患者血清标本,提取血清中病毒RNA作为模板。根据GenBank中汉坦病毒基因序列,设计HTN型和SEO型的通用外套引物,同时分别设计HTN型特异性引物和SEO型的特异性引物作为内套引物。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增汉坦病毒基因组M片段G1区基因序列并测序。测序结果利用DNA Star软件进行核苷酸序列分析。结果在64例标本中用HTN型特异性引物扩增阳性6例,占9%;用SEO型特异性引物扩增阳性25例,占39%;总阳性率为48%。总体来看,青岛地区流行的汉坦病毒以SEO型为主。SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小,在核苷酸序列水平其基因的离散度为0.3%～8.9%。HTN型汉坦病毒的变异率较高,其基因的离散度为2.6%～11.2%。结论青岛地区汉坦病毒的流行以SEO型为主,HTN型并存,其中HTN型主要发生在胶南市。 展开更多
关键词 汉坦病毒 HTN型 seo型 M区基因 基因分型
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汉坦病毒全NP蛋白及其型特异区编码基因的克隆及表达 被引量：1
4
作者 马士恒 陈宇萍 +4 位作者 安洪明 王华 孟祥芝 刘翠英 杭长寿 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1436-1437,共2页
目的　开发简单、可靠的HTN、SEO型血清学分型检测方法。方法　应用RT -PCR法对全NP蛋白基因及其型特异区基因进行扩增 ,经TA克隆及Cui-SS、Cui- 15 5杆状病毒载体的构件、转座、获重组杆状病毒 ,再感染Sf9细胞进行表达。结果　克隆与... 目的　开发简单、可靠的HTN、SEO型血清学分型检测方法。方法　应用RT -PCR法对全NP蛋白基因及其型特异区基因进行扩增 ,经TA克隆及Cui-SS、Cui- 15 5杆状病毒载体的构件、转座、获重组杆状病毒 ,再感染Sf9细胞进行表达。结果　克隆与表达了SEO病毒NP蛋白的全蛋白编码区及型特异编码区 (15 5到 4 2 9氨基酸处的编码基因 ) ,全NP蛋白表达产物与病毒株感染VeroE6细胞的反应谱完全一致 ,型特异区表达产物与相应的型特异McAb结合。结论　建立了SEO型病毒全NP蛋白及NP蛋白型特异区编码基因的克隆和表达方法 ,为开发简便、可靠的SEO型血清学分型检验方法奠定了基础。 展开更多
关键词 seo型汉坦病毒 编码区基因 TA克隆 杆状病毒 血清学分型 RT-PCR
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青岛地区2000～2003年肾综合征出血热的病毒基因分型 被引量：1
5
作者 乔刚 张洪乐 +5 位作者 逄叔申 龚艳 程茂玲 李震海 钱东萌 王斌 《齐鲁医学杂志》 2004年第2期127-129,共3页
①目的　调查山东省青岛地区 2 0 0 0～ 2 0 0 3年汉坦病毒的流行情况 ,研究病毒在该地区的分子流行病学特征。②方法　采集肾综合征出血热 (HFRS)急性期病人血清标本 6 4份 ,提取血清中病毒RNA作为模板 ,根据GenBank中汉坦病毒基因序... ①目的　调查山东省青岛地区 2 0 0 0～ 2 0 0 3年汉坦病毒的流行情况 ,研究病毒在该地区的分子流行病学特征。②方法　采集肾综合征出血热 (HFRS)急性期病人血清标本 6 4份 ,提取血清中病毒RNA作为模板 ,根据GenBank中汉坦病毒基因序列 ,设计HTN型和SEO型的通用外套引物 ,同时分别设计HTN型特异性引物和SEO型的特异性引物作为内套引物 ,RT nest PCR扩增汉坦病毒基因组M片段G1区基因序列并测序。测序结果利用DNAStar软件进行核苷酸序列分析。③结果　在 6 4例标本中用HTN型特异性引物扩增阳性 6例 ,占 9% ;用SEO型特异性引物扩增阳性 2 5例 ,占 39% ;总阳性率为 4 8%。总体来看青岛地区流行的汉坦毒株以SEO型为主。SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小 ,在核苷酸序列水平其基因的离散度为 0 .3%～ 8.9%。HTN型汉坦病毒的变异率较高 ,其基因的离散度为 2 .6 %～ 11.2 %。④结论　青岛地区汉坦病毒的流行以SEO型为主 ,HTN型并存 。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 病毒基因分型 汉坦病毒 流行病学
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营销型企业网站的建设与优化技巧
6
作者 尹明 《软件工程师》 2014年第10期62-63,共2页
营销型企业网站是指以网络营销理念为导向,以用户体验为中心,具有良好的搜索引擎表现,能够有效利用多种手段获得商业机会,提高产品销售业绩和品牌知名度的企业网站。本文论述了营销型企业网站的规划方法、特征并提出了网页优化的具体技巧。
关键词 营销型网站 网络营销 seo优化 动态网页静态化
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