使用与Gateway技术兼容的T载体获得入门克隆 被引量：10

1

作者 陈其军 安瑞 +2 位作者 周海梦 陈珈 王学臣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期951-954,共4页

与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与... 与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与Gateway重组克隆技术进行整合 ,构建了与Gateway技术兼容的两种TA克隆载体 ,用于在克隆PCR产物或其他来源的目的DNA片段的同时获得入门克隆 .利用兼容Gateway技术的TA克隆载体有效地解决了上述瓶颈问题 . 展开更多

关键词 Gateway克隆技术 TA克隆技术 入门载体 T载体 入门克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

人PRKAG2全长基因的体外拼接及TA克隆载体的构建 被引量：1

2

作者 张必利 郑兴 +2 位作者 徐荣良 吴弘 秦永文 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第8期1465-1468,共4页

目的:应用体外基因拼接及TA克隆技术构建含PRKAG2基因的载体。方法:通过商业途径购得PRKAG2基因的一个转录变体cDNA质粒(GenBank登记号BC068598),其在N端缺失了44个氨基酸,根据已知的PRKAG2基因序列(GenBank登记号NM_016203),设计搭桥... 目的:应用体外基因拼接及TA克隆技术构建含PRKAG2基因的载体。方法:通过商业途径购得PRKAG2基因的一个转录变体cDNA质粒(GenBank登记号BC068598),其在N端缺失了44个氨基酸,根据已知的PRKAG2基因序列(GenBank登记号NM_016203),设计搭桥引物及序列扩增引物,通过PCR搭桥方法,合成完整全序列的PRKAG2基因,并将其克隆到TA载体,将得到的阳性克隆测序鉴定。结果:拼接出全长1759bp的PRKAG2基因,目的基因连接到载体后测序与设计的PRKAG2基因完全一致。结论:成功的构建了全长人PRKAG2基因的TA克隆,为进一步研究PRKAG2基因的功能提供了模板。 展开更多

关键词 PRKAG2基因 基因拼接 TA克隆载体

原文传递

基于Xcm I酶切的pUC19-T载体的构建 被引量：2

3

作者 孙程龙 李业伟 +2 位作者 王颖 宫婷 扈荣良 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10182-10184,共3页

[目的]构建以pUC19质粒为基础可利用XcmI内切酶制备的T载体。[方法]化学合成2条含有双XcmI酶切位点的互补寡聚核苷酸链,经过变性、复性后克隆入pUC19质粒的HindIII和BamHI位点之间,通过XcmI酶切后得到一个线性化的带有3'末端突出一... [目的]构建以pUC19质粒为基础可利用XcmI内切酶制备的T载体。[方法]化学合成2条含有双XcmI酶切位点的互补寡聚核苷酸链,经过变性、复性后克隆入pUC19质粒的HindIII和BamHI位点之间,通过XcmI酶切后得到一个线性化的带有3'末端突出一个T碱基的T载体。[结果]经TA克隆验证,制备的pUC19-HB-T载体对PCR产物的克隆率达到95%以上。[结论]构建的pUC19-HB-T载体可用于PCR产物的克隆、测序及后续分子生物学操作。 展开更多

关键词 T载体 Xcm I限制性内切酶 TA克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用TA克隆载体构建pET15b-SOD1重组质粒 被引量：27

4

作者 丁鹏 王家宁 +1 位作者 黄永章 杨波 《郧阳医学院学报》 2005年第2期65-68,F002,共5页

目的利用pGEM-TEasyvector构建pET15b-SOD1重组质粒。方法以pBluescriptIISK-SOD1质粒为模板,应用pfuDNA聚合酶,聚合酶链反应法(PCR)扩增SOD1cDNA。将扩增的SOD1cDNA与三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,然后通过TaqDNA聚合酶具有的非模板依赖... 目的利用pGEM-TEasyvector构建pET15b-SOD1重组质粒。方法以pBluescriptIISK-SOD1质粒为模板,应用pfuDNA聚合酶,聚合酶链反应法(PCR)扩增SOD1cDNA。将扩增的SOD1cDNA与三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,然后通过TaqDNA聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在SOD1cDNA的3’末端加“A”并纯化,然后将纯化后的SOD1cDNA与pGEM-TEasyvector直接连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,蓝白筛选,挑选白色克隆扩增、鉴定,重组的质粒命名为pGEM-TEasy-SOD1。pGEM-TEasy-SOD1和pET15b分别用XhoⅠ、BamHⅠ双酶切,采用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收所需片断,前者回收470bp的SOD1cDNA片段,后者回收线性化的pET15b片段,将两者连接后转化大肠杆菌DH5α,抽提后的重组体质粒命名为pET15b-SOD1,然后对pET15b-SOD1进行酶切和核苷酸序列测序鉴定。结果重组质粒pET15b-SOD1经测序分析证实克隆入pET15b-SOD1的人SOD1cDNA与GeneBank“AB087266”登录的人SOD1cDNA序列一致,从而成功构建了pET15b-SOD1重组质粒。结论pET15b-SOD1重组质粒的构建为细胞穿透肽介导的SOD1转导提供了一对照载体。 展开更多

关键词 超氧化物歧化酶 TA克隆载体 基因重组 原核表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

pET15b-EGFP原核表达载体的构建及其表达和纯化 被引量：19

5

作者 董晓 王家宁 +1 位作者 黄永章 郭凌郧 《郧阳医学院学报》 2005年第6期321-325,F0003,共6页

目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性... 目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性末端转移酶活性催化PCR扩增的EGFP序列和三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,在EGFP序列两3’端加“A”,将纯化后的EGFP序列与中间载体pGEM-T easy vector连接后转化感受态大肠杆菌DH5α,经蓝白筛选,挑取白色单菌落进行扩增、酶切鉴定,正确重组的质粒命名为pGEM-T-EGFP。用XhoI和BamH I分别双酶切pGEM-T-EGFP和pET15b,低熔点琼脂糖回收EGFP cDNA和线性化的pET15b片段后将两片段相连,转化感受态大肠杆菌DH5α并对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序,获取正确重组的表达型质粒并命名为pET15b-EGFP。将正确重组的质粒pET15b?EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(H is-tag)进行N i2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和W estern b lotting鉴定纯化蛋白质。结果:经测序证实重组质粒pET15b-EGFP中的EGFP cDNA序列与从C lontech公司购买的质粒pLEGFP-C1中的EGFP cDNA序列完全一致,从而成功构建了表达型重组质粒pET15b-EGFP。pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,表达量可达66 mg/100 m l菌液,SDS-PAGE和W estern b lotting显示纯化蛋白为目的蛋白EGFP。结论:表达型重组质粒pET15b-EGFP的成功构建和表达、纯化为细胞穿透肽-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 TA克隆载体 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 重组质粒 蛋白表达 蛋白纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

pEASY-TAZ-5原核表达载体的构建及在大肠杆菌中表达 被引量：1

6

作者 王宁宁 王会岩 +3 位作者 许会静 张茹叶 陈秋池 李光宇 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期259-264,共6页

TAZ基因在心磷脂代谢异常导致线粒体功能障碍中起重要作用。本研究旨在构建人TAZ-5(h TAZ-5,Δ5)的基因工程菌,用乳糖诱导TAZ-5蛋白的表达,为后续h TAZ-5纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定基础。以h TAZ全长为材料,通过PCR方法扩增... TAZ基因在心磷脂代谢异常导致线粒体功能障碍中起重要作用。本研究旨在构建人TAZ-5(h TAZ-5,Δ5)的基因工程菌,用乳糖诱导TAZ-5蛋白的表达,为后续h TAZ-5纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定基础。以h TAZ全长为材料,通过PCR方法扩增人h TAZ-5基因,将其插入到原核表达载体p EASY中。经菌落PCR筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体p EASY-TAZ-5构建成功。将p EASY-TAZ-5转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞Transetta(DE3)中,用乳糖诱导蛋白表达,分别对诱导剂浓度、时间、时机及温度等条件进行优化,确定最优的乳糖诱导条件,并对表达产物进行可溶性分析。结果表明PCR扩增出约786 bp的目的产物,与预期的片段长度一致;h TAZ-5蛋白最优表达条件为终浓度2.0 g/L乳糖、A600=0.8、37℃下诱导4 h,可以达到良好的诱导效果;收集菌体中的上清和沉淀,进行可溶性分析,目的蛋白以包涵体的形式存在。Western Blot分析表明重组蛋白TAZ表达成功。成功构建p EASY-TAZ-5原核表达载体,乳糖可诱导h TAZ-5(Δ5)基因表达,且效果很好。 展开更多

关键词 hTAZ-5 TAZ 原核表达载体 重组蛋白表达

原文传递

小麦Ta-SKP2A克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建 被引量：3

7

作者 许媛 李铃仙 +3 位作者 魏春茹 魏新燕 于秀梅 刘大群 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期17-22,共6页

SKP2A是调控细胞周期转录因子降解的F-box蛋白。为研究该蛋白在小麦-叶锈菌互作过程的作用,首先克隆获得中国春小麦Ta-SKP2A全长序列,然后将其与pGBKT7载体连接,转入酵母Y187感受态细胞中,构建酵母诱饵表达载体,并检测其表达产物对酵母... SKP2A是调控细胞周期转录因子降解的F-box蛋白。为研究该蛋白在小麦-叶锈菌互作过程的作用,首先克隆获得中国春小麦Ta-SKP2A全长序列,然后将其与pGBKT7载体连接,转入酵母Y187感受态细胞中,构建酵母诱饵表达载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性和自激活效应。结果表明,Ta-SKP2A编码区序列长度为1 146 bp,其ORF区编码一条由382个氨基酸组成的多肽。在ORF区两侧连接酶切位点(EcoRⅠ和Bam HⅠ),并将其与载体pGBKT7连接,成功构建了包含目的基因的诱饵载体pGBKT7-Ta-SKP2A,且含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,其过夜培养物OD600>0.8,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性。含重组诱饵质粒的酵母菌株在二缺、三缺及四缺营养缺陷平板上不能生长,表明诱饵质粒的表达产物不能自激活报告基因。成功构建了一个包含Ta-SKP2A的重组诱饵质粒,为深入筛选与其互作的靶蛋白,研究其在小麦-叶锈菌互作体系中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 小麦 F-box基因SKP2A 诱饵载体构建 毒性检测 自激活效应

在线阅读 下载PDF 职称材料

T载体的应用及研究进展 被引量：2

8

作者 田生礼 梁秀怡 梁志成 《科学技术与工程》 北大核心 2014年第30期102-108,118,共8页

T载体可直接用于克隆PCR产物,因此应用于大规模的基因克隆中,具有快速、高效、操作简单等优点。对T载体进行了综述,介绍了T载体在生物学众多领域的广泛应用,总结了当今T载体的技术创新和改良,特别介绍了目前最新的新型多功能T载体——... T载体可直接用于克隆PCR产物,因此应用于大规模的基因克隆中,具有快速、高效、操作简单等优点。对T载体进行了综述,介绍了T载体在生物学众多领域的广泛应用,总结了当今T载体的技术创新和改良,特别介绍了目前最新的新型多功能T载体——定向克隆表达型T载体,并且探讨了T载体未来的发展趋势。 展开更多

关键词 T载体 TA克隆 定向克隆 表达型T载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

构建TA载体快速克隆PCR产物

9

作者 刘双信 史伟 +2 位作者 黄锋先 姜傥 吕灿群 《皖南医学院学报》 CAS 2001年第2期88-90,共3页

目的　为了快速克隆ＰＣＲ产物，本实验构建了简单、方便的 ＴＡ载体。方法 ＰＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（－）经 ＥｃｏＲ Ｖ酶切形成平端切口，在ＴａｑＥ的催化下加一个ｄＴＭＰ形成３’端带有Ｔ的粘端载体，在Ｔ４ＤＮＡ连接酶作... 目的　为了快速克隆ＰＣＲ产物，本实验构建了简单、方便的 ＴＡ载体。方法 ＰＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（－）经 ＥｃｏＲ Ｖ酶切形成平端切口，在ＴａｑＥ的催化下加一个ｄＴＭＰ形成３’端带有Ｔ的粘端载体，在Ｔ４ＤＮＡ连接酶作用下，将ＰＣＲ产物互补连接于ＴＡ载体上，重组质粒转化细菌，碱裂解法提取重组质粒ＤＮＡ，酶切及电泳鉴定。结果ＴＡ载体成功地克隆了ＰＣＲ产物。结论构建的ＴＡ载体简单、方便，可以克隆任何ＰＣＲ产物。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 TA载体 克隆 PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种优化的永磁同步电动机直接转矩控制开关表 被引量：7

10

作者 李耀华 曲亚飞 +2 位作者 孟祥臻 师浩浩 焦森 《微电机》 2017年第12期57-60,共4页

分析了零电压矢量在永磁同步电机在直接转矩控制系统中的作用,零电压矢量减小定子磁链幅值和转矩。基于开关次数最小提出了一种选择零电压矢量的策略,给出了一种新型含零电压矢量开关表。仿真结果表明,在新型开关表控制下永磁同步电机... 分析了零电压矢量在永磁同步电机在直接转矩控制系统中的作用,零电压矢量减小定子磁链幅值和转矩。基于开关次数最小提出了一种选择零电压矢量的策略,给出了一种新型含零电压矢量开关表。仿真结果表明,在新型开关表控制下永磁同步电机直接转矩控制系统能正常驱动。相比于传统开关表,使用新型开关表永磁同步电机直接转矩控制系统的开关次数降低了近56%,进而显著降低了开关损耗。 展开更多

关键词 永磁同步电机 直接转矩控制 零电压矢量 开关表

在线阅读 下载PDF 职称材料

西瓜食酸菌TA基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测 被引量：1

11

作者 胡金凤 黄成文 刘君 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期289-296,共8页

【目的】构建西瓜食酸菌TA基因的酵母双杂交诱饵载体,为探究TA基因编码产物参与西瓜食酸菌致病的机制奠定基础。【方法】通过PCR扩增TA基因,并定向克隆到载体p GBKT7,获得可用于酵母双杂交的诱饵载体p GBKT7-TA,经酶切鉴定和测序验证为... 【目的】构建西瓜食酸菌TA基因的酵母双杂交诱饵载体,为探究TA基因编码产物参与西瓜食酸菌致病的机制奠定基础。【方法】通过PCR扩增TA基因,并定向克隆到载体p GBKT7,获得可用于酵母双杂交的诱饵载体p GBKT7-TA,经酶切鉴定和测序验证为正确后将p GBKT7-TA转化到酵母菌株AH109中;进一步用ADE2、HIS3、Lac Z报告基因活性检测法检测p GBKT7-TA的自激活作用,用固体及液体营养缺陷型培养基培养法检测p GBKT7-TA的毒性作用。【结果】诱饵载体p GBKT7-TA对酵母菌株AH109没有自激活及毒性作用。【结论】所构建的诱饵载体可用于酵母双杂交系统的后续工作,为进一步从被西瓜食酸菌侵染的黄瓜子叶c DNA文库中筛选与TA互作的蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 西瓜食酸菌 TA基因 酵母双杂交 诱饵载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠金属蛋白酶组织抑制物-1反义基因片段TA克隆载体的构建

12

作者 王沂芹 袁发焕 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第9期824-826,共3页

目的　构建含大鼠金属蛋白酶组织抑制物 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP 1)反义基因片段TA克隆载体 ,为进一步研究TIMP 1在肾组织纤维化中的作用奠定基础。方法　本实验利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,从提取的大鼠... 目的　构建含大鼠金属蛋白酶组织抑制物 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP 1)反义基因片段TA克隆载体 ,为进一步研究TIMP 1在肾组织纤维化中的作用奠定基础。方法　本实验利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,从提取的大鼠肾组织总RNA中特异地扩增含 313bp的TIMP 1cDNA片段 ,并将其克隆到TA载体。结果　用限制性内切酶鉴定 313bp的TIMP 1cDNA片段插入方向 ,测序结果证实扩增片段为目的片段。结论　成功地构建了含大鼠TIMP 展开更多

关键词 大鼠 金属蛋白酶组织抑制物-1 反义基因片段 TA克隆载体 构建

暂未订购

中国人常见GJB2基因突变片段TA克隆载体构建

13

作者 张元丁 张延平 +6 位作者 李丽娜 马磊 孙玉蕊 张宗霖 刘金伟 邓惠严 祝威 《中国听力语言康复科学杂志》 2009年第1期13-16,共4页

目的应用TA克隆技术构建含中国人常见GJB2基因突变片段的载体，为构建突变绿色荧光蛋白融合载体提供基础。方法首先利用定点诱变法在体外构建235delC．299-300delAT和176del16bp绿色荧光蛋白非融合载体，以此为模板利用PCR扩增突变基因... 目的应用TA克隆技术构建含中国人常见GJB2基因突变片段的载体，为构建突变绿色荧光蛋白融合载体提供基础。方法首先利用定点诱变法在体外构建235delC．299-300delAT和176del16bp绿色荧光蛋白非融合载体，以此为模板利用PCR扩增突变基因片段，然后将PCR扩增产物克隆到TA载体上，用限制性内切酶法和测序法鉴定重组质粒序列正确性。结果用限制性内切酶法和测序方法证实扩增片段为目的片段。结论成功地构建了235delC、299-300delAT和176del16bp突变基因片段TA克隆载体，为构建突变绿色荧光蛋白融合载体、进一步研究突变致聋机制奠定了基础。 展开更多

关键词 缝隙连接蛋白26 突变 TA克隆载体

暂未订购

Pi-ta^+基因和几丁质酶基因双价基因导入水稻的研究

14

作者 张秀 钟巧芳 +2 位作者 付坚 李定琴 程在全 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1953-1957,共5页

为了提高‘云资粳41’和‘云资粳43’的抗稻瘟病能力,利用农杆菌介导法将二价表达载体pCAMBIA1300-Pi-ta+-Bchi转化到水稻愈伤组织中。经组织培养获得再生苗,再通过氯酚红显色法、PCR检测和抗稻瘟病鉴定法获得抗稻瘟病的转基因植株,为... 为了提高‘云资粳41’和‘云资粳43’的抗稻瘟病能力,利用农杆菌介导法将二价表达载体pCAMBIA1300-Pi-ta+-Bchi转化到水稻愈伤组织中。经组织培养获得再生苗,再通过氯酚红显色法、PCR检测和抗稻瘟病鉴定法获得抗稻瘟病的转基因植株,为进一步创建持久、广谱抗稻瘟病水稻新材料奠定基础。结果显示:(1)抗性愈伤组织经分化和生根培养后,共获得T0代水稻再生苗137株,其中‘云资粳41’14株,‘中花11’82株,‘云资粳43’41株。(2)经氯酚红显色法和PCR对再生苗检测,‘中花11’、‘云资粳41’、‘云资粳43’的转化苗阳性率分别为66%、43%和55%。证明2个外源基因已经整合到水稻基因组中。(3)对转化阳性植株温室接种稻瘟病病菌66b鉴定结果显示,转基因植株较非转基因植株对稻瘟病的抗性明显增强,而且转Pi-ta+基因和几丁质酶基因双价的水稻植株比转单价Pi-ta+基因或几丁质酶基因的水稻植株抗稻瘟病能力强。(4)氯酚红检测结果存在一定的假阳性,PCR检测结果更真实可靠,但氯酚红显色法方便、快速,结果观察直观,可对大量的转基因植株进行初步筛选。研究表明,转Pi-ta+基因和几丁质酶基因双价基因的水稻植株具有更高的抗稻瘟病能力。 展开更多

关键词 二价表达载体 Pi-ta+基因 菜豆几丁质酶基因 稻瘟病

在线阅读 下载PDF 职称材料

凋亡诱导因子AIF基因真核表达载体的构建及表达

15

作者 邓雯文 刘蜀坤 张遵真 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期170-174,共5页

目的利用TA克隆法构建凋亡诱导因子(AIF)的真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),并研究其在人肺腺癌A549细胞中的表达。方法根据GenBank上AIF的mRNA序列设计特异性引物,以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增AIF基因。并用TA克隆法,将AIF目的基因... 目的利用TA克隆法构建凋亡诱导因子(AIF)的真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),并研究其在人肺腺癌A549细胞中的表达。方法根据GenBank上AIF的mRNA序列设计特异性引物,以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增AIF基因。并用TA克隆法,将AIF目的基因连接到pUC-T载体,行双酶切和DNA测序鉴定;回收目的片段并将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒AIF-pcDNA3.1(+)。最后,将AIF-pcDNA3.1(+)转染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测转染细胞AIF基因的表达。结果成功扩增617bp的AIF目的基因片段并连接pUC-T载体,测序后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,DNA序列分析显示,连接在真核表达载体上的基因片段与GenBank中的AIF序列完全吻合。RT-PCR和Western blot检测结果显示,转染了AIF-pcDNA3.1(+)的A549细胞AIF mRNA和蛋白表达水平均高于未转染细胞(P<0.05)。结论成功构建了真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),转染后能够在A549细胞中表达。 展开更多

关键词 凋亡诱导因子 真核表达载体TA克隆转染

原文传递

基于LS-SVM的草莓固酸比和可滴定酸近红外光谱定量模型 被引量：20

16

作者 牛晓颖 周玉宏 邵利敏 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第A01期270-274,共5页

为提高草莓固酸比和可滴定酸近红外光谱定量模型的性能,该文采用偏最小二乘法提取的潜在变量作为最小二乘-支持向量机模型的输入变量,建立了两指标的近红外定量模型,并与偏最小二乘模型结果进行了比较,建模所使用的光谱范围为6000～1250... 为提高草莓固酸比和可滴定酸近红外光谱定量模型的性能,该文采用偏最小二乘法提取的潜在变量作为最小二乘-支持向量机模型的输入变量,建立了两指标的近红外定量模型,并与偏最小二乘模型结果进行了比较,建模所使用的光谱范围为6000～12500cm-1。结果表明,草莓可滴定酸和固酸比偏最小二乘模型校正相关系数、校正和预测均方根误差分别为0.430、0.096%、0.096%及0.688、0.926和1.190,而两指标的前10个潜在变量得分作为输入变量的最小二乘—支持向量机模型各项性能均远优于偏最小二乘模型,其校正和预测相关系数、校正和预测均方根误差以及剩余预测偏差分别为:可滴定酸0.965、0.967、0.028%、0.027%、3.881;固酸比0.980、0.973、0.258、0.373、3.111。研究表明,潜在变量作为最小二乘支持向量机模型的输入变量可在较大程度上改善草莓可滴定酸和固酸比指标近红外定量模型的预测性能和稳定性。 展开更多

关键词 近红外 模型 支持向量机 最小二乘法 草莓 固酸比 可滴定酸 潜在变量

在线阅读 下载PDF 职称材料

HLA-DR_α基因片段TA克隆载体的构建

17

作者 宁勇 姚彩萍 王宇学 《湖北中医学院学报》 2005年第4期31-32,共2页

目的 应用TA克隆技术构建含HLA-DRα基因的载体,作为实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测 HLA-DRα基因的标准模板。方法 利用RT-FCR法,从提取的外周血单核细胞总RNA中特异地扩增含635bp的HLA- DRαcDNA片段,并将其克隆到TA... 目的 应用TA克隆技术构建含HLA-DRα基因的载体,作为实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测 HLA-DRα基因的标准模板。方法 利用RT-FCR法,从提取的外周血单核细胞总RNA中特异地扩增含635bp的HLA- DRαcDNA片段,并将其克隆到TA载体。结果 用限制性内切酶法和测序方法证实扩增片段为目的片段。结论 成功地构建了 HLA-DRα基因片段TA克隆载体。为实时荧光定量RT-PCR法检测HLA-DRαmRNA表达提供标准模板。 展开更多

关键词 反转录聚合酶链反应 限制性内切酶 HLA-DRα基因 TA克隆载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

具有除草剂抗性的TA克隆植物表达载体的构建 被引量：5

18

作者 李梦婷 谭文雍 +2 位作者 孙铭阳 李永光 李文滨 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2436-2440,共5页

TA克隆载体由于能够用于PCR产物的快速克隆且操作简单,因此被广泛应用。p CXSN是以TA克隆为连接方式的植物表达载体,T-DNA区筛选标记为潮霉素抗性基因。本实验利用抗除草剂基因bar、gdh A替换载体上的潮霉素基因,构建了两种可以直接连接... TA克隆载体由于能够用于PCR产物的快速克隆且操作简单,因此被广泛应用。p CXSN是以TA克隆为连接方式的植物表达载体,T-DNA区筛选标记为潮霉素抗性基因。本实验利用抗除草剂基因bar、gdh A替换载体上的潮霉素基因,构建了两种可以直接连接PCR产物的TA克隆植物表达载体,获得的含有除草剂抗性基因的p CXSN表达载体适合用于基因的正义和反义表达,不需要添加酶切位点,可以直接连接PCR产物,节省载体构建的步骤和时间。 展开更多

关键词 植物表达载体 TA克隆 除草剂

原文传递

改进重叠延伸PCR克隆tau基因6种同工异构体 被引量：3

19

作者 李诺敏 刘可夫 +5 位作者 李灵芸 何放 顾文彬 董一名 邓玉林 庆宏 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期871-875,共5页

采用一种改进的重叠延伸PCR技术,通过2次PCR的方法,对人tau基因进行剪切和拼接,实现了tau基因的6种同工异构体的克隆;然后将6种tau基因克隆到真核载体pcDNA4上,通过western blot在蛋白水平验证了tau蛋白的表达.结果表明,这种改进重叠延... 采用一种改进的重叠延伸PCR技术,通过2次PCR的方法,对人tau基因进行剪切和拼接,实现了tau基因的6种同工异构体的克隆;然后将6种tau基因克隆到真核载体pcDNA4上,通过western blot在蛋白水平验证了tau蛋白的表达.结果表明,这种改进重叠延伸PCR方法能够对基因进行多个位置的剪切和连接,由于该法在基因重组过程中无需利用限制性内切酶,因此具有很大的灵活性和简便性. 展开更多

关键词 TAU蛋白 重叠延伸PCR 真核表达载体 TA克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

以nptⅡ为选择标记基因的TA克隆植物表达载体的构建 被引量：1

20

作者 韩国粉 张志宏 +3 位作者 马跃 李贺 刘月学 代红艳 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期363-372,共10页

TA克隆载体由于能够用于PCR产物的快速克隆,且操作简单,因此被广泛应用。本研究的目的在于构建一种可以直接连接PCR产物的TA克隆植物表达载体,其在植物细胞中表达的筛选基因为nptⅡ。首先我们向植物表达载体pRNAi-BKI1中引入包含2个Xcm... TA克隆载体由于能够用于PCR产物的快速克隆,且操作简单,因此被广泛应用。本研究的目的在于构建一种可以直接连接PCR产物的TA克隆植物表达载体,其在植物细胞中表达的筛选基因为nptⅡ。首先我们向植物表达载体pRNAi-BKI1中引入包含2个XcmⅠ酶切位点的TA克隆位点序列,然后对pRNAi-BKI1载体原有的3个XcmⅠ酶切位点逐一进行定点突变,最终获得了以nptⅡ为筛选基因的TA克隆植物表达载体,命名为pTO。用XcmⅠ酶切pTO载体,得到两端含有T末端的线性载体,该线性载体可以直接与PCR产物连接。为了验证pTO载体的有效性,本研究利用PCR技术从pRI 201-AN-GUS载体上扩增GUS基因全长序列,将GUS基因连接到pTO载体上,构建出GUS基因的过表达载体pTO-GUS。将pTO-GUS导入根癌农杆菌EHA105,并进行烟草叶片转化。利用GUS组织染色法对侵染后的烟草叶片进行GUS瞬时表达分析,结果显示pTO-GUS上的GUS基因在烟草细胞中高效表达。本研究获得的pTO载体适合用于构建目的基因的过表达载体,可以直接连接PCR产物,节省载体构建的步骤和时间。 展开更多

关键词 TA克隆载体 nptⅡ 定点突变 Xem Ⅰ

原文传递