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体内嵌合抗原受体T细胞疗法发展及临床转化现状
1
作者 梅恒 苏莉曼 《中华医学杂志》 北大核心 2025年第41期3728-3733,共6页
嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗效显著,但复杂的流程和高昂的成本严重限制了传统CAR-T的临床应用。随着生物技术不断发展,体内CAR-T疗法逐渐从实验室走向临床。本文重点阐述体内CAR-T疗法相关递送载体系统,包括病毒载体系统[慢病毒载体、... 嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗效显著,但复杂的流程和高昂的成本严重限制了传统CAR-T的临床应用。随着生物技术不断发展,体内CAR-T疗法逐渐从实验室走向临床。本文重点阐述体内CAR-T疗法相关递送载体系统,包括病毒载体系统[慢病毒载体、腺相关病毒(AAV)载体]和非病毒载体系统[聚合物纳米颗粒、脂质纳米颗粒(LNP)和其他递送载体],同时围绕开发策略及临床试验,汇总了国、内外关于体内CAR-T疗法的临床实践,并结合最新数据探讨存在的挑战与前景,以期推动该疗法在我国的发展和临床转化。 展开更多
关键词 血液肿瘤 体内嵌合抗原受体T细胞 慢病毒载体 脂质纳米颗粒
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降低T细胞DAPK1表达以促进BCG疫苗诱导的抗结核菌感染反应的机制
2
作者 刘子炫 刘敏 潘勤 《解剖学研究》 2025年第2期105-114,共10页
目的探讨死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)促进CD4^(+)T细胞死亡的机制;并在小鼠结核病疫苗BCG免疫过程中下调CD4^(+)T细胞DAPK1水平,评估以上干预提升疫苗效能以对抗结核菌(M.tb)感染的效果。方法体外实验:利用慢病毒载体系统对CD4^(+)T细胞系... 目的探讨死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)促进CD4^(+)T细胞死亡的机制;并在小鼠结核病疫苗BCG免疫过程中下调CD4^(+)T细胞DAPK1水平,评估以上干预提升疫苗效能以对抗结核菌(M.tb)感染的效果。方法体外实验:利用慢病毒载体系统对CD4^(+)T细胞系MOLT‑4进行DAPK1过表达、敲低或敲低后回补,同时使用CD3、CD28抗体活化细胞后行流式细胞术检测细胞死亡,免疫印迹验证凋亡蛋白Caspase‑3的表达水平;利用腺相关病毒载体(AAV)‑shDapk1系统敲低小鼠脾脏CD4^(+)T细胞DAPK1,RT‑qPCR以及WB检测敲低效果。动物实验:利用AAV‑shDapk1敲低小鼠脾脏CD4^(+)T细胞DAPK1,BCG免疫小鼠后,FCM检测小鼠体内记忆性CD4^(+)T细胞水平和细胞因子水平;进行M.tb H37Ra感染实验,通过病理切片和肺组织菌落计数,验证下调DAPK1对BCG疫苗效能的提升作用。结果DAPK1敲低后MOLT‑4细胞死亡率由(2.36±0.38)%降至(0.94±0.11)%(P<0.01),并且Caspase‑3蛋白水平也因DAPK1的敲低而减少;同样地,过表达DAPK1后细胞死亡率由(2.00±0.10)%增加至(5.54±0.23)%(P<0.01);在敲低DAPK1细胞中回补DAPK1后死亡率由(0.90±0.35)%增加至(3.04±0.14)%(P<0.01)。AAV‑shDapk1体外转染小鼠脾淋巴细胞后WB以及RT‑qPCR结果显示DAPK1表达水平降低。动物实验,AAV‑shDapk1处理组小鼠体内CD4^(+)中央记忆性T细胞(T_(CM))死亡率由(23.74±2.22)%降至(18.46±2.89)%(P<0.01),AAV‑shDapk1处理小鼠相比空载对照组CD4^(+)T细胞中T_(CM)百分率由(8.93±0.52)%升至(10.94±0.71)%(P<0.01);AAV‑shDapk1处理小鼠TNF‑α、IFN‑α、IL‑2的上升水平较为明显,相比于AAV空载对照组,shDapk1处理组CD4^(+)T细胞中TNF‑α百分率由(0.21±0.04)%升至(1.99±0.20)%(P<0.01);IFN‑α百分率由(0.33±0.06)%升至(0.77±0.15)%(P<0.01);IL‑2百分率由(0.71±0.10)%升至(2.48±0.08)%(P<0.01);M.tb H37Ra攻毒后,菌落计数显示AAV‑shDapk1处理小鼠体内感染细菌数量显著减少,病理组织切片显示该组肺脏坏死程度较轻,脾脏中淋巴样白髓和红髓更加明显,AAV‑shDapk1处理小鼠的肺脏和肝脏病理组织评分相比空载对照组也有所改善。结论DAPK1可在T细胞中提高凋亡蛋白Caspase‑3表达水平并抑制T细胞存活,将小鼠体内CD4^(+)T细胞的DAPK1敲低有利于CD4^(+)T细胞存活以及CD4^(+)T_(CM)的增多,这有助于提升BCG疫苗效能以帮助宿主对抗M.tb感染。 展开更多
关键词 死亡相关蛋白激酶1 CD4^(+)T细胞 腺相关病毒载体 中央记忆性T细胞
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基于RCMFFDE和SSA-RVM的旋转机械损伤检测模型 被引量：2
3
作者 王显彬 孙阳 《机电工程》 北大核心 2025年第3期510-519,共10页
针对旋转机械系统的振动信号具有明显的非线性,严重影响故障特征提取从而导致其识别精度不佳的问题,建立了一种基于精细复合多尺度分数波动散布熵(RCMFFDE)、t-分布随机邻域嵌入(t-SNE)和麻雀搜索算法优化相关向量机(SSA-RVM)的旋转机... 针对旋转机械系统的振动信号具有明显的非线性,严重影响故障特征提取从而导致其识别精度不佳的问题,建立了一种基于精细复合多尺度分数波动散布熵(RCMFFDE)、t-分布随机邻域嵌入(t-SNE)和麻雀搜索算法优化相关向量机(SSA-RVM)的旋转机械损伤检测模型。首先,进行了基于RCMFFDE方法的特征提取,生成了特征样本,以定量反映旋转机械的不同损伤情况;然后,采用t-SNE方法,将原始高维故障特征映射至低维空间,获得了对故障更敏感的低维特征;最后,将敏感的低维故障特征向量输入至SSA-RVM多分类器中,进行了训练和测试,实现了旋转机械样本的故障识别目的;采用两种旋转机械数据集进行了实验,并从准确率、效率和抗噪性方面,将RCMFFDE-SSA-SVM方法与多种特征提取方法进行了对比。研究结果表明:RCMFFDE能用于有效提取旋转机械的故障特征,分别取得99.2%和100%的识别精度;而对敏感特征进行分类所获得的精度优于对原始特征进行分类的情形,前者比后者提高了4%;在模式识别中,SSA-RVM优于其他分类器;自制数据集的诊断精度达到了97%,特征提取的时间为16.05 s。 展开更多
关键词 非线性振动信号 特征提取时间 故障识别精度(诊断精度) 精细复合多尺度分数波动散布熵 t-分布随机邻域嵌入 麻雀搜索算法优化相关向量机
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球矢量波函数在地下旋电磁各向异性介质球电磁散射中的应用
4
作者 贾永冰 耿友林 《物理学报》 北大核心 2025年第12期107-115,共9页
给出了一种T矩阵法、球矢量波函数加法定理和镜像法结合研究地下旋电磁各向异性介质球电磁散射的解析方法.针对传统方法主要集中于单点电场求解而缺乏电场分布全面分析的局限性,计算了沿目标中心轴平行的Y轴直线L的地面上的散射场,并与F... 给出了一种T矩阵法、球矢量波函数加法定理和镜像法结合研究地下旋电磁各向异性介质球电磁散射的解析方法.针对传统方法主要集中于单点电场求解而缺乏电场分布全面分析的局限性,计算了沿目标中心轴平行的Y轴直线L的地面上的散射场,并与FEKO仿真结果进行对比验证.结果表明,所提出的球矢量波函数方法与FEKO仿真结果高度吻合,验证了该方法的正确性.在此基础上,比较了两种方法在计算地下旋电磁各向异性介质球目标的计算效率.最后,给出了入射波频率和埋藏深度的变化对地面电场分布的影响,验证了该方法在多场景下的适用性.本文是现有的电磁散射理论的扩展,可应用于地下目标探测等领域. 展开更多
关键词 地下旋电磁各向异性介质球体 电磁散射 球矢量波函数 T矩阵法
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非病毒CAR-T开发工艺的研究进展
5
作者 李海鹏 朱启宇 +1 位作者 朱家良 闵静婷 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期461-467,共7页
嵌合抗原受体T(CAR-T)淋巴细胞是过继性免疫疗法中的研究热点,这项技术将肿瘤免疫治疗的应用前景推至巅峰。CAR-T对淋巴细胞起源的血液肿瘤已经取得了极佳的疗效,并为实体瘤治疗提供了可能性。CAR-T制备工艺目前以病毒载体转染T细胞为主... 嵌合抗原受体T(CAR-T)淋巴细胞是过继性免疫疗法中的研究热点,这项技术将肿瘤免疫治疗的应用前景推至巅峰。CAR-T对淋巴细胞起源的血液肿瘤已经取得了极佳的疗效,并为实体瘤治疗提供了可能性。CAR-T制备工艺目前以病毒载体转染T细胞为主,但产生病毒载体的过程长、成本高,同时病毒载体载荷量低且伴随插入不稳定性。因此目前急需努力寻找更便捷、更精确的非病毒基因传递方法。本文综述了目前最有前途的非病毒基因传递技术的现状,成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑、转座子系统,如睡美人(SB)和PiggyBac(PB)和mRNA,并对非病毒载体CAR-T的未来发展做出展望。 展开更多
关键词 非病毒载体 嵌合抗原受体T(CAR-T) 转座子 CRISPR/Cas9 综述
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基于t-SNE和ECOC-ISSA-SVM的变压器故障诊断
6
作者 刘蒙 赵晨晓 +4 位作者 朱乔波 李梁 姚旭 李鑫 赵明 《辽宁工程技术大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期606-613,共8页
为解决电力变压器故障诊断中支持向量机(support vector machine,SVM)超参数优化和多分类性能不足的问题,采用t-分布的随机邻居嵌入(t-distributed stochastic neighbor embedding,t-SNE)对26维溶解气体分析(DGA)数据进行非线性降维,引... 为解决电力变压器故障诊断中支持向量机(support vector machine,SVM)超参数优化和多分类性能不足的问题,采用t-分布的随机邻居嵌入(t-distributed stochastic neighbor embedding,t-SNE)对26维溶解气体分析(DGA)数据进行非线性降维,引入纠错输出码(error correction output codes,ECOC),将改进麻雀搜索算法(improved sparrow search algorithm,ISSA)与切比雪夫混沌映射、柯西-高斯变分策略相结合,优化SVM超参数,处理多分类问题。研究结果表明:ECOC-ISSA-SVM(t-SNE)模型的诊断精度、召回率、特异性和F1值分别为95.6%、97.8%、99.6%和97.8%,各项指标较传统模型提升效果显著,诊断时间缩短至11 ms,诊断效率显著提高。研究结论为电力设备智能运维提供技术支持。 展开更多
关键词 故障诊断 变压器 油中溶解气体 支持向量机 麻雀搜索算法 t-SNE降维 纠错输出码
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基于零共模电压的T型三电平逆变器调制策略
7
作者 丛应玺 金晓亮 《微型电脑应用》 2025年第6期229-233,共5页
为消除T型三电平逆变器共模电压产生的电磁干扰问题,提出一种改进型虚拟电压矢量调制策略。所提调制策略通过筛选零共模矢量并合成新虚拟矢量,可将逆变器共模电压降低为0。对电容电压不平衡的情况,采用分配系数调节矢量作用时间,对中点... 为消除T型三电平逆变器共模电压产生的电磁干扰问题,提出一种改进型虚拟电压矢量调制策略。所提调制策略通过筛选零共模矢量并合成新虚拟矢量,可将逆变器共模电压降低为0。对电容电压不平衡的情况,采用分配系数调节矢量作用时间,对中点电流进行控制,实现中点电位平衡。并对新虚拟矢量占空比进行计算,提出一种简化算法。 展开更多
关键词 T型三电平 零共模电压 虚拟矢量 中点电位平衡
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基于电压残差的T形逆变器开路故障诊断方法
8
作者 张彬彬 武菲菲 +2 位作者 杨冰 孙天誉 陈超波 《科学技术与工程》 北大核心 2024年第35期15057-15064,共8页
针对T形逆变器发生开路故障后容易导致输出谐波增大、抗干扰能力差的问题,提出一种基于电压残差的T形三电平逆变器开路故障诊断方法。首先分析T形逆变器的工作原理和开路故障特性,通过空间矢量脉宽调制技术,建立系统的状态空间模型。其... 针对T形逆变器发生开路故障后容易导致输出谐波增大、抗干扰能力差的问题,提出一种基于电压残差的T形三电平逆变器开路故障诊断方法。首先分析T形逆变器的工作原理和开路故障特性,通过空间矢量脉宽调制技术,建立系统的状态空间模型。其次,利用正常工况下线电压的参考值与实际传感器测量所得到的电压值进行比较,结合低通滤波处理获得电压残差信号,将其与故障检测阈值对比判断系统是否发生故障。然后建立诊断变量与故障开关管之间的逻辑关系,实现逆变器单管故障的精确定位。最后,通过MATLAB平台对所提出的故障诊断方法进行验证,仿真结果表明,该方法的故障诊断速度快、易于实现且可靠性高。 展开更多
关键词 T形逆变器 电压残差 空间矢量脉宽调制 低通滤波 开路故障诊断
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基于AVMD和排列熵的t分布邻域嵌入流形HHO-SVM模拟电路故障诊断方法 被引量：4
9
作者 陈晓梅 王行健 +1 位作者 蔡烨 周博 《电子测量与仪器学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期233-240,共8页
随着信息大数据时代的到来,对于电子系统的依赖程度越来越高,因此模拟电路的故障诊断的准确度要求与日俱增。而模拟电路故障诊断困难,是电子系统诊断维修的瓶颈。本文提出基于自适应变分模态分解(AVMD)和排列熵(PE)的t分布邻域嵌入流形... 随着信息大数据时代的到来,对于电子系统的依赖程度越来越高,因此模拟电路的故障诊断的准确度要求与日俱增。而模拟电路故障诊断困难,是电子系统诊断维修的瓶颈。本文提出基于自适应变分模态分解(AVMD)和排列熵(PE)的t分布邻域嵌入流形哈里斯鹰优化支持向量机(HHO-SVM)模拟电路故障诊断方法。首先,利用AVMD对待测电路的观测信号进行自适应变分模态分解,得到多组IMF信号,不仅可以克服噪声干扰,而且可以来自适应地确定分解模式的数量,进一步提升分解精度;再对IMF计算排列熵,以充分体现IMF不同时段局部特征,二者相结合构建故障特征向量。并在此基础上,采用t分布式随机邻域嵌入(t-SNE)实现特征空间的流形学习和降维,构建具有良好区分度且保留原来的局部结构特征的故障特征向量;最后依靠哈里斯鹰优化支持向量机(HHO-SVM),使其具有良好的分类准确度,从而最终完成电路故障诊断。通过仿真验证,结果显示,本文方法故障诊断正确率可达100%,效果良好。 展开更多
关键词 自适应变分模态分解AVMD t分布邻域嵌入 故障诊断 哈里斯鹰优化支持向量机
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基于多目标分析的F-T柴油机SOOT和NO_(X)排放物优化研究 被引量：1
10
作者 孟源 闫飞 《中国农机化学报》 北大核心 2024年第11期119-124,共6页
为充分发挥F-T煤制油的优良理化特性,改善柴油机SOOT和NO_(X)之间的“Trade-off”关系,以一台四缸柴油机为研究对象,将SOOT和NO_(X)作为优化目标。通过台架试验获得柴油机燃用F-T煤制油时SOOT和NO_(X)随喷油参数变化的性能试验数据,采... 为充分发挥F-T煤制油的优良理化特性,改善柴油机SOOT和NO_(X)之间的“Trade-off”关系,以一台四缸柴油机为研究对象,将SOOT和NO_(X)作为优化目标。通过台架试验获得柴油机燃用F-T煤制油时SOOT和NO_(X)随喷油参数变化的性能试验数据,采用支持向量机SVM建立喷油参数与SOOT、NO_(X)间的预测模型,并将其作为带精英策略的非支配排序遗传算法的适应度评价模型,在样本空间内获得SOOT和NO_(X)的Pareto前沿。赋予SOOT和NO_(X)不同的权重,通过Topsis对Pareto前沿进行决策分析,与原机工况点相比,SOOT下降幅度为3.7%~7.1%,NO_(X)下降幅度为1.2%~2.6%。经试验验证,SOOT的Pareto前沿与试验验证值之间的相对误差不超过8%,NO_(X)不超过5%,各工况下的R2均大于0.95。该方法改善了柴油机SOOT和NO_(X)之间的“Trade-off”关系,使柴油机排放性能得到提高。 展开更多
关键词 F-T煤制油 支持向量机 遗传算法 排放性能 多目标优化
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模拟矢量调制器原理及其在T/R组件中的应用
11
作者 杨立 《舰船电子对抗》 2024年第5期115-120,共6页
有源相控阵天线系统是近年来国内外天线技术研究的一个热门领域。由于相控阵天线阵元间距随着工作频率的升高而变得越来越小,对相控阵T/R组件的尺寸提出了更高的要求。同时,为了保持相控阵天线系统的电扫特性,需要对幅相进行精细的控制... 有源相控阵天线系统是近年来国内外天线技术研究的一个热门领域。由于相控阵天线阵元间距随着工作频率的升高而变得越来越小,对相控阵T/R组件的尺寸提出了更高的要求。同时,为了保持相控阵天线系统的电扫特性,需要对幅相进行精细的控制。模拟矢量调制器(VM)因其较小的体积、低廉的成本及较高的控制精度得到了重视。基于模拟矢量调制器原理,介绍了VM体制T/R组件的特点及应用情况,并进行样件验证,说明了VM体制T/R组件在相控阵中具备较好的应用前景。 展开更多
关键词 有源相控阵 矢量调制器 T/R组件
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T克隆载体的构建
12
作者 胡学军 李江 +2 位作者 袁晓东 李晶泉 安利佳 《大连大学学报》 1998年第6期81-83,共3页
以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒Amp^r基因的Eam11057酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam11051酶切位点,将一人工合成的具有两个Eam11051酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam1105I酶切位点的pUC... 以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒Amp^r基因的Eam11057酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam11051酶切位点,将一人工合成的具有两个Eam11051酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam1105I酶切位点的pUC118质粒的BamHI位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E,该载体经Eam11051酶切后,可产生3’端突出一个T碱基的T-vector,能与PCR产物直接连接,经转化大肠杆菌JM109证实,该改造过的pUC118质粒,仍可使宿主细胞具有氨苄抗性,可作为氨苄选择标记的克隆载体。 展开更多
关键词 t-vector pUC118 PCR产物 Eam11051
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T克隆载体的构建
13
作者 胡学军 徐红梅 +2 位作者 赵东利 李晶泉 袁晓东 《北京农学院学报》 2001年第4期6-8,共3页
本文描述了一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体 pUC118为骨架载体,在 pUC118质粒Ampr 基因的Eam110 5I酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam110 5I酶切位点。经转化大肠杆菌JM 10 9证实,该改造过的pUC118质粒,... 本文描述了一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体 pUC118为骨架载体,在 pUC118质粒Ampr 基因的Eam110 5I酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam110 5I酶切位点。经转化大肠杆菌JM 10 9证实,该改造过的pUC118质粒,可使宿主细胞具有氨苄抗性,仍可作为氨苄选择标记的克隆载体。将一人工合成的具有两个Eam110 5I酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam110 5I酶切位点的pUC118 载体的BamHI位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E。该载体经Eam110 5I酶切后,可产生 3 端突出一个T碱基的T -vector,能与PCR产物直接连接。 展开更多
关键词 t-vector pUC118 PCR产物 限制酶Eam1105I
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γ-逆转录病毒载体包装及浓缩方法对比研究
14
作者 张帆 程奕宁 +4 位作者 沈齐 詹思建 汪洋 胡翰 刘滨磊 《湖北工业大学学报》 2024年第5期74-79,共6页
为选择合适的包装条件与安全高效的浓缩方法生产用于CAR-T制备的γ-逆转录病毒载体,使用两种包装条件γ-逆转录病毒表达载体(pMIG与pMIGⅡ)和包装质粒总量(20μg与40μg)分别生产逆转录病毒载体,利用流式细胞术检测不同条件下生产的病... 为选择合适的包装条件与安全高效的浓缩方法生产用于CAR-T制备的γ-逆转录病毒载体,使用两种包装条件γ-逆转录病毒表达载体(pMIG与pMIGⅡ)和包装质粒总量(20μg与40μg)分别生产逆转录病毒载体,利用流式细胞术检测不同条件下生产的病毒滴度;使用超速离心与超滤离心两种浓缩方法得到逆转录病毒浓缩液,运用流式细胞术,检测两种病毒浓缩液滴度及其对T细胞的转导效率,并监测CAR-T细胞增殖与存活率。数据显示,pMIGⅡ载体包装病毒滴度较高(p<0.05),20μg与40μg质粒总量对病毒滴度无显著影响(p>0.05),超滤离心法与超速离心法浓缩后逆转录病毒滴度无显著差异(p>0.05)。研究表明,pMIGⅡ载体与20μg质粒总量更适合包装γ-逆转录病毒,超滤离心法可用于实验室小规模浓缩逆转录病毒,满足CAR-T研究的需要。 展开更多
关键词 γ-逆转录病毒载体 病毒包装 超速离心 超滤离心 CAR-T细胞
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人工智能在煤矿瓦斯风险评估中的应用 被引量：1
15
作者 申小明 《陕西煤炭》 2024年第9期168-172,共5页
瓦斯事故是影响煤矿安全生产的主要事故类型,为降低瓦斯事故风险,提出一种创新实用的煤矿瓦斯风险等级评价方法,为煤矿瓦斯事故的防治提供帮助。研究主要包括3个步骤,首先,收集煤矿瓦斯事故的真实数据;其次,由于属性特征较多,数据集具... 瓦斯事故是影响煤矿安全生产的主要事故类型,为降低瓦斯事故风险,提出一种创新实用的煤矿瓦斯风险等级评价方法,为煤矿瓦斯事故的防治提供帮助。研究主要包括3个步骤,首先,收集煤矿瓦斯事故的真实数据;其次,由于属性特征较多,数据集具有过于高维、大规模和高复杂性的结构特征,采用t分布随机邻域嵌入(t-SNE)方法处理复杂的高维气体事故数据;最后,利用遗传算法(GA)对支持向量机(SVM)进行优化,对煤矿瓦斯事故的严重程度进行预测。结果表明,通过对预测效果、误差分布、时间成本等性能的比较,引入t-SNE的评价模型可以准确预测89%的事故结果,同时节省约60%的时间成本。 展开更多
关键词 风险评估 煤矿瓦斯事故 t-分布随机邻域 遗传算法(GA) 支持向量机(SVM)
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利用T载体克隆快速构建布鲁氏菌缺失突变株 被引量：15
16
作者 白耀霞 杨毅 +7 位作者 王玉飞 王同坤 于爽 陈燕芬 付思美 黄留玉 田晋红 陈泽良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期62-67,共6页
目的:建立一种基于T载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法,提高布鲁氏菌突变株构建的效率。方法:采用融合PCR的方法,将待缺失基因上下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合起来,构建突变盒,然后将突变盒直接与T载体连接,构建突变载体,将... 目的:建立一种基于T载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法,提高布鲁氏菌突变株构建的效率。方法:采用融合PCR的方法,将待缺失基因上下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合起来,构建突变盒,然后将突变盒直接与T载体连接,构建突变载体,将载体转入布鲁氏菌感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得布鲁氏菌的缺失突变株。结果:结合融合PCR和T载体快速克隆,能够在48h之内构建好突变载体,与传统的酶切连接相比,效率高、周期短。结论:基于T载体快速克隆是一种非常高效的构建突变株的方法,为布鲁氏菌突变株的构建提供了一种新方法。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 T载体 突变株构建
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使用与Gateway技术兼容的T载体获得入门克隆 被引量：10
17
作者 陈其军 安瑞 +2 位作者 周海梦 陈珈 王学臣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期951-954,共4页
与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与... 与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与Gateway重组克隆技术进行整合 ,构建了与Gateway技术兼容的两种TA克隆载体 ,用于在克隆PCR产物或其他来源的目的DNA片段的同时获得入门克隆 .利用兼容Gateway技术的TA克隆载体有效地解决了上述瓶颈问题 . 展开更多
关键词 Gateway克隆技术 TA克隆技术 入门载体 T载体 入门克隆
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人神经生长因子的基因克隆和序列分析 被引量：7
18
作者 马巍 吴玲 +4 位作者 刘淼 任惠民 扬广笑 王全颖 王德利 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期338-341,共4页
目的　克隆人神经生长因子基因编码区。方法　由人末梢血白细胞中提取细胞总DNA ,利用PCR法 ,从DNA中扩增出人神经生长因子编码区基因DNA片段 ;将获得的基因片段插入 pGEM T Easy质粒中 ,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制... 目的　克隆人神经生长因子基因编码区。方法　由人末梢血白细胞中提取细胞总DNA ,利用PCR法 ,从DNA中扩增出人神经生长因子编码区基因DNA片段 ;将获得的基因片段插入 pGEM T Easy质粒中 ,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制性内切酶酶切核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒。结果　经质粒DNA酶切分析及序列测定 ,获得了人神经生长因子DNA片段序列。结论　首次由人白细胞DNA中克隆获得了人神经生长因子基因 ,为神经生长因子的基因治疗提供了前提条件。 展开更多
关键词 人神经生长因子 基因克隆 序列分析 聚合酶链反应
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T载体研究进展 被引量：10
19
作者 林陈水 武胜伟 杨丹燕 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第6期623-628,共6页
T载体是直接克隆或表达PCR产物的新型载体,重组过程无需酶切和纯化,简便高效.在总结国内外研究的基础上,概述了构建T载体的方法,其中内切酶法是T载体制备方法中最先进的方式.阐述了T载体在抗体库构建、目的基因克隆、某些蛋白的融合表... T载体是直接克隆或表达PCR产物的新型载体,重组过程无需酶切和纯化,简便高效.在总结国内外研究的基础上,概述了构建T载体的方法,其中内切酶法是T载体制备方法中最先进的方式.阐述了T载体在抗体库构建、目的基因克隆、某些蛋白的融合表达方面的应用以及目前T载体的商业化.对表达型T载体与克隆型T载体进行了比较,其中表达型T载体可以同时满足基因克隆和表达的需要,还具有其他独特的优势.介绍了表达型T载体的构建难点,探讨了今后T载体的研究发展方向. 展开更多
关键词 T载体 克隆 表达
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一种lacZ报告基因T载体的构建及其在沙门氏菌鞭毛主调控基因flhDC表达活性测定中的应用 被引量：4
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作者 刘蕾 李永霞 +2 位作者 刘金泽 王明晓 余旭平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期711-716,共6页
为研究5'-非翻译区(UTR)对沙门氏菌鞭毛主调控基因flhDC表达的影响,本研究以鼠伤寒沙门氏菌542(STM542)基因组DNA为模板,扩增含不同长度5'-UTR的flhDC全长基因(共5种),并将其克隆至含阿拉伯糖启动子的质粒PBAD33中。通过测定含... 为研究5'-非翻译区(UTR)对沙门氏菌鞭毛主调控基因flhDC表达的影响,本研究以鼠伤寒沙门氏菌542(STM542)基因组DNA为模板,扩增含不同长度5'-UTR的flhDC全长基因(共5种),并将其克隆至含阿拉伯糖启动子的质粒PBAD33中。通过测定含阿拉伯糖的半固体平板上包含不同长度flhDC基因的重组大肠杆菌菌落的直径,初步评估不同5'-UTR调控序列对flhDC基因表达的影响。为精确测定不同调控序列的活性差异,本实验室进一步构建了以lacZ为报告基因的T载体,并将扩增的对应于前4种flhDC基因调控序列片段克隆于构建的T载体,通过测定其β-半乳糖苷酶活性获得相应调控序列的活性参数。结果显示,在阿拉伯糖诱导下,对应于1572bp的flhDC基因片段的调控序列活性最低,对应于1201bp的flhDC基因片段的调控序列活性最高,本实验为进一步研究flhDC基因的调控功能奠定基础。 展开更多
关键词 flhDC基因 鞭毛 lacZ报告基因 T载体
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