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纳米免疫磁珠联合巢式PCR检测胰腺癌患者外周循环微转移的意义 被引量：2
1
作者 胡亮 周家华 +3 位作者 易永祥 丁海 刘俊卯 赵亮 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1097-1101,共5页
目的:建立一种检测胰腺癌患者外周血循环微转移的有效方法。方法:用人胰腺癌细胞株PANC-1与正常人外周血单核细胞(PBMC)以不同比例混合,用EpCAM抗体的纳米免疫磁珠对各比例组进行阳性分选,分离富集出肿瘤细胞,用巢式RT-PCR(RT-nest-PCR... 目的:建立一种检测胰腺癌患者外周血循环微转移的有效方法。方法:用人胰腺癌细胞株PANC-1与正常人外周血单核细胞(PBMC)以不同比例混合,用EpCAM抗体的纳米免疫磁珠对各比例组进行阳性分选,分离富集出肿瘤细胞,用巢式RT-PCR(RT-nest-PCR)检测细胞中端粒酶亚催化单位(h-TERT)和c-met的表达,以确定该检测方法的敏感度;用以上纳米免疫磁珠联合RT-nest-PCR方法检测25例胰腺癌患和15例良性病患者PBMC中h-TERT和c-met的表达,并分析两者与胰腺癌患者临床病理因素的关系。结果:纳米免疫磁珠联合RT-nest-PCR法检测h-TERT和c-met的敏感度分别为1个肿瘤细胞/1×107个PBMC和1个肿瘤细胞/1×106个PBMC。良性疾病组h-TERT及c-met基因表达率均为0(0/15),胰腺癌组h-TERT和c-met基因表达率分别为100%(25/25)和80%(20/25),且c-met阳性表达率与肿瘤分期有关(P<0.05)。结论:免疫磁珠联合RT-nest-PCR法检测h-TERT和c-met是发现胰腺癌外周血循环微转移的高敏感度方法。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 微转移 纳米免疫磁珠 巢式聚合酶链式反应 端粒酶亚催化单位 原癌基因蛋白质C-MET
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人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1的巢式PCR法克隆、测序及表达载体的构建 被引量：2
2
作者 田梅 刘林林 李修义 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期9-12,共4页
目的 :克隆人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用RT- nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约 1 2 0 0 bp的 DNA片段 ,与 p UCm- T载体连接 ,作全自动测序确证 ,并将其重组入 pc DNA 3.1载体中 ,构建为... 目的 :克隆人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用RT- nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约 1 2 0 0 bp的 DNA片段 ,与 p UCm- T载体连接 ,作全自动测序确证 ,并将其重组入 pc DNA 3.1载体中 ,构建为表达质粒 pc DNA- w P。结果 :对 PCR产物进行测序 ,序列基本正确。结论 :利用 RT- nested PCR法成功克隆了人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1c DNA序列并构建了表达质粒 pc DNA- w P。 展开更多
关键词 PTEN/MMAC1 逆转录聚合酶链反应 巢式pcr法 表达载体 基因 抑制 肿瘤 基因表达
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湖南省家犬感染狂犬病病毒状况调查研究 被引量：13
3
作者 刘富强 陈立章 +1 位作者 高立冬 张红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期675-679,共5页
为了解湖南省家犬狂犬病病毒(RV)的感染状况,为防制狂犬病提供科学依据。本研究于2005年11月～2008年3月选择在全省18个县(市)收集市售家犬的脑组织标本,采用直接免疫荧光法(DFA)初筛检测RV抗原和套式RT-PCR方法检测RV特异性核酸进行确... 为了解湖南省家犬狂犬病病毒(RV)的感染状况,为防制狂犬病提供科学依据。本研究于2005年11月～2008年3月选择在全省18个县(市)收集市售家犬的脑组织标本,采用直接免疫荧光法(DFA)初筛检测RV抗原和套式RT-PCR方法检测RV特异性核酸进行确证。共检测家犬脑1613份,结果表明家犬RV感染率为4.15%。其中,雄性、雌性家犬RV感染率为4.68%和2.85%(p>0.05);大型、中型家犬RV感染率为4.57%和3.02%(p>0.05);成年犬、幼犬RV感染率为4.95%和1.57%(p<0.01);有、无狂犬疫苗免疫史的家犬RV感染率分别为1.29%、4.63%(p<0.05);春、夏、秋、冬季家犬RV感染率为9.56%、7.53%、2.31%、3.23%(p<0.01)。2005年～2006年、2007年～2008年各监测点家犬RV感染率分别与2006年、2007年人狂犬病发病率呈正相关(p<0.05)。检测结果表明湖南省家犬RV感染率较高(4.15%),存在地区、季节差异,而且家犬RV感染率与人狂犬病发病率呈正相关。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 感染率 直接免疫荧法 套式逆转录聚合酶链反应
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博尔纳病毒在宁夏的人和动物感染的检测 被引量：3
4
作者 刘建 马彦 +2 位作者 张颖 王振海 谢鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期389-393,共5页
目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单... 目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单核细胞的p24和p40基因片段。对检测阳性标本进行连接测序,应用MEGA和DnaSP4.0软件对测序结果同国外的标准株HE80、H1766、strainV等进行核酸和氨基酸序列对比分析,并构建病毒基因的系统发生树。结果在60例VE患者及其接触的710绵羊中,PCR检测发现有3例阳性,阳性检出率5%;9头绵羊阳性,阳性检出率为1.27%。基因聚合分析显示人和动物BDV的核酸序列和编码氨基酸序列与德国马源性的HE80株同源性高达100%,重构基因系统发生树可见宁夏VE患者和牛羊BDV核苷酸序列与国外的标准株形成宁夏-德国-日本的混合支系,同时宁夏绵羊BDV序列也形成了一个独立的支系。结论宁夏地区人和牛羊存在BDV的自然感染,并且人的感染存在动物源性,其传染途径很可能是呼吸道的传播可能引起脑炎的非特异性的临床症状,病毒在种系发生中与德国马源性HE80株有极高的同源性,病毒可能由国外引入本土,不排除病毒株变异的可能,人和绵羊之间存在相互传染的可能。 展开更多
关键词 博尔纳病毒 感染 巢式逆转录实时荧光定量pcr
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首次从深圳市登革热患者血清中分离到一株登革4型病毒 被引量：5
5
作者 周丽 阳帆 +2 位作者 刘建军 杨洪 张海龙 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第6期1010-1012,共3页
目的:对深圳市2005年登革热病原体进行分离鉴定。方法:采用酶链免疫吸附试验法和胶体金免疫层析法检测登革热疑似患者血清中的特异性IgM和IgG抗体。用C6/36细胞对早期病例血清进行病毒分离,以MGB荧光PCR方法鉴定。用逆转录-套式PCR方法... 目的:对深圳市2005年登革热病原体进行分离鉴定。方法:采用酶链免疫吸附试验法和胶体金免疫层析法检测登革热疑似患者血清中的特异性IgM和IgG抗体。用C6/36细胞对早期病例血清进行病毒分离,以MGB荧光PCR方法鉴定。用逆转录-套式PCR方法对其进行型别鉴定。结果:从8份标本中成功分离到一株登革病毒,经逆转录-套式PCR方法鉴定为登革4型病毒,将其命名为DEN4-SZ0524。结论:首次从2005年登革热患者血清中分离到一株登革4型病毒,为进一步研究和控制该地区登革热提供了科学依据。 展开更多
关键词 登革热 登革4型病毒 病毒分离 逆转录-套式pcr
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宁夏地区黄牛博尔纳病病毒自然感染状况的探讨 被引量：3
6
作者 马彦 王振海 +1 位作者 孔繁元 谢鹏 《宁夏医科大学学报》 2010年第1期22-25,I0002,共5页
目的了解宁夏地区黄牛博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)的自然感染情况,对检测到的BDVp24基因阳性扩增片段进行核苷酸序列比对,探讨其与国际标准病毒株及其分离株的同源性。方法采用荧光定量巢式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR... 目的了解宁夏地区黄牛博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)的自然感染情况,对检测到的BDVp24基因阳性扩增片段进行核苷酸序列比对,探讨其与国际标准病毒株及其分离株的同源性。方法采用荧光定量巢式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测宁夏地区205例健康牛外周血单个核细胞(PB-MCs)BDVp24基因片段,并对其中的阳性扩增产物进行基因序列测定,然后应用BLAST软件以及DNAsist5.0软件对测序结果分析。结果205例中3例阳性,阳性率为1.5%;该BDVp24片段的核苷酸序列与StrainH3915同源性最高达97.67%,与标准病毒株H1766同源性为96.51%,与StrainV/FR的同源性为95.35%,且它们编码的氨基酸相同。结论宁夏地区黄牛中存在动物源性BDV的自然感染,该BDVp24核苷酸序列与标准病毒株具有高度同源性。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 荧光定量巢式逆转录酶聚合酶链反应 牛外周血 宁夏
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肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白mRNA与单核细胞端粒酶活性检测 被引量：1
7
作者 黄宇琨 范学工 +1 位作者 邱氟 王志明 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期525-528,共4页
目的探讨外周血甲胎蛋白(AFP)mRNA和外周血单核细胞(PBMC)端粒酶活性的检测在肝细胞癌(HCC)诊断中的意义。方法采用巢式逆转录PCR(Nest RT-PCR)法检测HCC、肝脏良性肿瘤、慢性肝病患者及正常人外周血的AFP mRNA表达,聚合酶链反应-酶联... 目的探讨外周血甲胎蛋白(AFP)mRNA和外周血单核细胞(PBMC)端粒酶活性的检测在肝细胞癌(HCC)诊断中的意义。方法采用巢式逆转录PCR(Nest RT-PCR)法检测HCC、肝脏良性肿瘤、慢性肝病患者及正常人外周血的AFP mRNA表达,聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(PCR-ELISA)检测PBMC的端粒酶活性。结果 (1)AFP mRNA在HCC外周血中阳性率为73.3%(22/30),在肝脏良性肿瘤、慢性肝病患者及正常人外周血中无表达(分别为0/10,0/30,0/30),(均P<0.001)。(2)HCC患者PBMC端粒酶活性的阳性率(93.3%,28/30)显著高于肝脏良性肿瘤患者(40%,4/10)和慢性肝病患者(6.7%,2/30)及正常人(0),(分别P<0.01,<0.001,<0.001)。(3)外周血AFP mRNA与HCC PBMC的端粒酶活性表达呈显著正相关(r=0.6742,P<0.05)。结论 AFP mRNA是外周血HCC细胞的特异性标志物;端粒酶活性的检测具有更高的敏感性;两者的联合检测具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 癌 肝细胞/诊断 甲胎蛋白/血液 端粒酶/血液 巢式逆转录聚合酶链反应
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宁夏地区绵羊博尔纳病病毒自然感染状况研究 被引量：1
8
作者 刘建 马彦 +1 位作者 王振海 谢鹏 《宁夏医科大学学报》 2010年第1期26-29,32,I0003,共6页
目的探讨中国宁夏地区绵羊博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)的自然感染状况,并分析比较中国宁夏地区绵羊自然感染BDVp24基因序列与国外人和动物来源BDV分离株及其标准株StrainV和He/80的同源性。方法采用巢式逆转录荧光定量PCR(FQ... 目的探讨中国宁夏地区绵羊博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)的自然感染状况,并分析比较中国宁夏地区绵羊自然感染BDVp24基因序列与国外人和动物来源BDV分离株及其标准株StrainV和He/80的同源性。方法采用巢式逆转录荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR技术)检测了中国宁夏地区268例绵羊PBMCs中BDVp24基因片段,对阳性标本FQ-PCR产物进行基因序列测定,测序结果应用BLAST软件以及DNAsist5.0软件对测序结果分析,与国外人与动物来源的BDV分离株以及标准株StrainV和He/80进行序列比较。结果268例中4例绵羊外周血BDVp24基因片段阳性,阳性率为1.49%;测序分析结果表明,宁夏地区绵羊感染的BDVp24的核苷酸序列与马源性病毒株H3575同源性最近,同源性为98.84%(85/86),与标准株StrainV和He/80同源性为94.19%和100%。并且它们编码的氨基酸序列相同。结论宁夏地区绵羊中可能存在动物源性的BDV自然感染,该地区感染的BDVp24核苷酸序列与马源性病毒株H3575、标准株StrainV和He/80存在高度的同源性,其感染来源可能相同亦或存在相互之间感染的可能。 展开更多
关键词 BORNA病病毒 感染 巢式逆转录荧光定量pcr
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博尔纳病病毒感染与病毒性脑炎发病的关系 被引量：2
9
作者 马彦 王振海 +1 位作者 孔繁元 张颖 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1284-1287,共4页
目的 检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）博尔纳病病毒（BDV）携带情况，分析BDV与标准病毒株之间的同源性。探讨BDV感染性疾病与不明原因病毒性脑炎之间的关系，同时也为部分病毒性脑炎的病因学诊断及其防... 目的 检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）博尔纳病病毒（BDV）携带情况，分析BDV与标准病毒株之间的同源性。探讨BDV感染性疾病与不明原因病毒性脑炎之间的关系，同时也为部分病毒性脑炎的病因学诊断及其防治提供实验依据。方法采用荧光定量巢式反转录酶聚合酶链反应（FQ—nRT-PCR）检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者及正常人PBMCsBDVp24基因片段，并对其中阳性扩增产物进行基因序列测定，然后采用BLAST软件以及DNAsist5．0软件对测序结果进行分析。结果病毒性脑炎组样本BDVp24基因片段FQ．nRT-PCR阳性率（10．17％）显著高于正常对照组（0％）（P〈0．05）。病毒性脑炎患者检出BDVp24基因片段的核苷酸序列与马BDV标准病毒株H3915序列同源性为97．67％，与H1766株比较在3个位点出现一致性突变（nt1659T-c，nt1668A→G，nt1674T→C；突变率为3．49％）；与strainV株比较在4个位点出现一致性突变（nt1648C→T，nt1658e→A，nt1667A—G，nt1673T→C；突变率为4．65％），但编码的氨基酸相同。证实扩增所得目的基因片段确系BDVp24的相应片段。结论宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者中存在BDV感染，提示部分不明原因病毒性脑炎的发生可能与BDV感染有关。且该BDVp24扩增产物核苷酸序列与标准病毒株高度同源性，与马源strainH3915同源性最高。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 病毒性脑炎 荧光定量巢式反转录酶聚合酶链反应
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临床病毒性脑炎标本的博尔纳病病毒核酸检测 被引量：1
10
作者 姚能云 徐平 郭振元 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期154-157,共4页
目的探讨临床病毒性脑炎（viral eneephalitis，VE）患者与博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）感染的关系，分析BDV感染的病毒性脑炎患者临床特征。方法用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应（FQ-nRT-PCR）方法检测病毒性脑炎患者... 目的探讨临床病毒性脑炎（viral eneephalitis，VE）患者与博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）感染的关系，分析BDV感染的病毒性脑炎患者临床特征。方法用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应（FQ-nRT-PCR）方法检测病毒性脑炎患者及非感染性疾病施行蛛网膜下腔阻滞麻醉的手术患者脑脊液单个核细胞（cembmspinl fluid mononuclear cell，CSFMC）中BDV p24基因片段，同时用β-肌动蛋白（β-actin）作为内参照，脑脊液（CSF）阳性标本基因测序分析并总结出临床特征。结果32例病毒性脑炎脑脊液标本BDVp24基因片段检出率为12．5％（4/32），拷贝数〉10^2/μl。对其中一份CSF阳性标本测序后，与BDV标准病毒株Ⅴ和马源的BDV病毒株H1766序列比较同源性分别为95．35％和98．84％。在4个位点出现基因突变（nt1649 T→C、nt1656 G→A、nt1670 C→T、nt1676 C→T）。该目的基因片段与马源的BDV病毒株亲缘关系最近。阳性脑炎患者主要以精神行为异常为临床特征。结论贵州省合肥市部分病毒性脑炎的发生与BDV感染有关，主要以精神行为异常为临床特征。 展开更多
关键词 病毒性脑炎 博尔纳病病毒 荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应
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