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用Red/ET重组酶构建基因打靶载体 被引量：11
1
作者 杨建岭 顾淑萍 +4 位作者 陈臣 王铸钢 许燕 费俭 YANG Jian-Ling1, GU Shu-Pir 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期919-924,共6页
基因敲除的小鼠模型是研究基因功能的一种重要资源。采用常规分子克隆的方法建立基因敲除的打靶载体存在构建效率低和难以获得长片段同源臂的缺点。因此快速高效地构建打靶载体,已成为获得特定基因敲除动物模型的关键环节。为研究Resp1... 基因敲除的小鼠模型是研究基因功能的一种重要资源。采用常规分子克隆的方法建立基因敲除的打靶载体存在构建效率低和难以获得长片段同源臂的缺点。因此快速高效地构建打靶载体,已成为获得特定基因敲除动物模型的关键环节。为研究Resp18未知功能分泌肽基因,应用一种新的DNA工程平台——Red/ET同源重组技术来构建其打靶载体,并比较了这一方法在构建不同长度同源臂中的效率。研究表明,Red/ET重组方法构建打靶载体具有很高的效率,可以获得较长的同源臂,并且不会引入突变,有助于获得更高的打靶效率。因此Red/ET重组为构建打靶载体提供了一种新的可靠的方法。 展开更多
关键词 red/et重组 基因打靶 载体
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Red/ET同源重组介导细菌人工染色体的快速修饰 被引量：4
2
作者 王军平 张友明 粟永萍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期468-473,共6页
随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL... 随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL鄄neo为正/反向筛选系统,可以快速、高效地对BAC进行剪切、插入、替换等操作,其中能够进行抗性筛选的一步BAC修饰只需一周时间,以插入非抗性标记基因Cre为代表的两步BAC修饰在两周内即可完成.通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度,能使pSC101-BAD-gbaA依托质粒在发挥完Red/ET同源重组作用后自然消失,最终获得完整而纯净的修饰后BAC,为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台. 展开更多
关键词 red/et同源重组 BAC修饰 功能基因组
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Red/ET重组AHBA生物合成基因簇打靶载体的构建与鉴定 被引量：1
3
作者 王广林 张会图 +1 位作者 张金池 王以光 《安徽师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第6期569-574,共6页
为确定3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)生物合成基因簇在链霉菌中与次生代谢产物的关系,运用PCR技术,从33株AHBA合酶基因阳性菌株扩增与AHBA生物合成基因簇中编码AHBA合酶(A)、氧化还原酶(O)、磷酸化酶(P)基因,获得24株AOP基因阳性菌株.根... 为确定3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)生物合成基因簇在链霉菌中与次生代谢产物的关系,运用PCR技术,从33株AHBA合酶基因阳性菌株扩增与AHBA生物合成基因簇中编码AHBA合酶(A)、氧化还原酶(O)、磷酸化酶(P)基因,获得24株AOP基因阳性菌株.根据靶基因A基因下游和P基因上游同源序列设计50 bp引物,中间插入卡那霉素抗性基因的DNA片段,进行PCR,获得外源DNA片段.经过电转化,将外源DNA片段和pKC1139-AOP重组质粒共转入含重组酶质粒大肠杆菌HS996/pSC101-BAD-gba-(Tet).在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与重组质粒pKC1139-AOP上的AHBA基因簇的同源区域重组,构建了AHBA基因簇打靶载体.研究显示了Red/ET重组工作效率高、操作简单、精确的优点,可大大缩短构建打靶载体的时间. 展开更多
关键词 red/et重组 AHBA基因簇 打靶载体 链霉菌
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通过减毒和Red/ET同源重组构建跨界基因沉默菌株 被引量：1
4
作者 杨朝霞 杨霄旭 +2 位作者 李苗苗 石小亚 向双林 《生命科学研究》 CAS CSCD 2016年第3期208-213,共6页
"跨界基因沉默"技术是一种全新的、跨原核界与真核界的小分子RNA干扰传递技术。该技术构建了一种大肠杆菌,在这种大肠杆菌中转录的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)能够引发真核细胞内特异性基因的RNA干扰(RNA interferenc... "跨界基因沉默"技术是一种全新的、跨原核界与真核界的小分子RNA干扰传递技术。该技术构建了一种大肠杆菌,在这种大肠杆菌中转录的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)能够引发真核细胞内特异性基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi),所以此大肠杆菌又被称为"跨界基因沉默菌株"。"跨界基因沉默菌株"具有RNA干扰传递功能,主要得益于"跨界干扰质粒"(trans-kingdom RNAi plasmid,TRIP)。TRIP质粒主要包含inv基因、hly基因以及能够转录shRNA的基因片段。hly基因表达的listeriolysin O蛋白可以帮助细菌逃离真核细胞的吞噬体,但listeriolysin O蛋白是一种重要的毒力因子,对宿主细胞具有一定的损害。为了克服这种缺陷,在hly基因上设计了△PEST和G486D两种减毒突变。同时,为了使减毒后的TRIP质粒能够在"跨界基因沉默菌株"中稳定存在,进一步利用Red/ET同源重组将该质粒整合进大肠杆菌的基因组中。实验结果表明,减毒、整合后的"跨界基因沉默菌株"能更好地发挥RNAi作用。该技术的完善将推进工程菌的研发和利用。 展开更多
关键词 跨界基因沉默菌株 跨界干扰质粒 hly red/et同源重组
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Red/ET重组在基因打靶载体快速构建中的应用 被引量：11
5
作者 王军平 张友明 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期953-958,共6页
通过合理应用Red/ET重组技术实现基因打靶载体的快速构建。在Red/ET重组介导下,首先从基因组DNA中将靶基因片段亚克隆至打靶质粒载体中,随后将两端带有50 bp同源臂的抗性筛选基因插入并替换靶基因上的目标序列,如此两步操作即可完成一... 通过合理应用Red/ET重组技术实现基因打靶载体的快速构建。在Red/ET重组介导下,首先从基因组DNA中将靶基因片段亚克隆至打靶质粒载体中,随后将两端带有50 bp同源臂的抗性筛选基因插入并替换靶基因上的目标序列,如此两步操作即可完成一个传统型基因敲除打靶载体的构建;结合Cre-loxP系统,在传统型基因敲除打靶载体的基础上,经过再一轮的Red/ET重组就能够成功实现条件性基因敲除打靶载体的构建。整个实验过程不需要PCR扩增长、短臂序列,也不涉及酶切、连接反应,因此,不仅省时、省力,而且所构建的基因打靶载体序列准确,无突变。实验方法的建立为加速后基因组时代的基因功能研究提供了一条捷径。 展开更多
关键词 基因打靶载体构建 red/et重组 基因敲除
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Red/ET重组及其在生物医学中的应用 被引量：14
6
作者 王军平 张友明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期502-506,共5页
通过应用Rac噬菌体的RecE RecT和λ噬菌体的RedαRedβ系统而建立的DNA工程平台———Red ET重组,是一种不依赖于限制性内切酶的分子克隆新技术。运用该技术能够介导PCR产物或寡核苷酸对目标基因进行剪切、插入、融合及突变等多种操作,... 通过应用Rac噬菌体的RecE RecT和λ噬菌体的RedαRedβ系统而建立的DNA工程平台———Red ET重组,是一种不依赖于限制性内切酶的分子克隆新技术。运用该技术能够介导PCR产物或寡核苷酸对目标基因进行剪切、插入、融合及突变等多种操作,在生物医学领域里具有广阔的应用前景,尤其在基因组功能研究中对BACs、PACs和细菌染色体的打靶修饰以及基因敲除动物DNA靶分子的快速构建等方面最有效。随着Red ET重组的推广与应用,该技术本身也在不断被改进,在工作效率得到显著提高的同时,其操作也变得更加简单、省时、省力。结合自身的一些研究结果,对Red ET重组的技术特点、发展现状和在生物医学中的应用进行了详细阐述。 展开更多
关键词 red/et重组 DNA修饰 BACs 噬菌体
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Red/ET同源重组技术在载体构建中的应用 被引量：1
7
作者 郭善军 张晓林 +1 位作者 陈章宝 曾吉 《科教导刊（电子版）》 2017年第1期168-169,共2页
Red/ET同源重组技术是以原有的重组技术为基础，利用Rac噬菌体ET系统或者噬菌体的Red系统进行外源基因重组的重组方法。该方法使同源重组过程变得更方便快捷。本文对Red/ET同源重组技术的原理，改进和载体构建方面的应用做了综述。
关键词 red/et 同源重组 噬菌体 载体构建
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Red/ET同源重组技术在载体构建中的应用 被引量：2
8
作者 曾吉祥 《生物技术世界》 2015年第7期232-233,共2页
Red/ET同源重组技术是以原有的重组技术为基础,利用Rac噬菌体ET系统或者λ噬菌体的Red系统进行外源基因重组的重组方法。该方法使同源重组过程变得更方便快捷。本文对Red/ET同源重组技术的原理,改进和载体构建方面的应用做了综述。
关键词 red/et同源重组 噬菌体载体构建
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利用Red/ET重组技术构建表达非洲猪瘟病毒CP530R和F317L基因的重组伪狂犬病毒 被引量：2
9
作者 孔洁 邵洋洋 +6 位作者 乔延召 赵琪琪 李鸿鑫 张新珩 蔺文成 陈伟国 谢青梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1716-1721,共6页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的一种高度接触型传染病,由于该病毒感染机制极为复杂,能够引起世界范围内的猪群发生致病性死亡。本研究参考Georgia 2007/1株(GenBank登录... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的一种高度接触型传染病,由于该病毒感染机制极为复杂,能够引起世界范围内的猪群发生致病性死亡。本研究参考Georgia 2007/1株(GenBank登录号:FR682468)的CP530R和F317L基因序列,人工合成PUC57-CMV-HA-CP530R-F317L-BGH质粒,利用Red/ET重组工程技术和ccdB反向筛选技术,将ASFV特定基因定向插入到伪狂犬病毒TK位点,构建重组毒株rBartha-K61-CP530R-F317L。结果表明,构建成功的感染性克隆在PK-15细胞上完成适应性传代并持续传至20代,PCR扩增得到正确基因条带,测序结果未发现缺失与插入。本研究将外源基因成功插入到pBeloBAC11-Bartha-K61载体上,重组伪狂犬病毒构建成功,为进一步研制新型ASF活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CP530R F317L 伪狂犬病毒载体 TK基因 red/et重组技术
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Red/ET系统研究进展及在微生物研究中的应用 被引量：1
10
作者 徐飞 张宜平 奚涛 《药物生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期221-224,共4页
传统的基因工程技术现已经不满足于后基因组时代的生命科学研究。新的同源重组系统-Red/ET系统具有所需同源臂短(35—60 bp),重组效率高等特点,通过诱导recE/recT或redα/redβ完成重组,可以采用各种策略对目标基因进行插入、敲除、点... 传统的基因工程技术现已经不满足于后基因组时代的生命科学研究。新的同源重组系统-Red/ET系统具有所需同源臂短(35—60 bp),重组效率高等特点,通过诱导recE/recT或redα/redβ完成重组,可以采用各种策略对目标基因进行插入、敲除、点突变等一系列修饰操作,并且不需限制性内切酶和连接酶的作用。文章针对Red/ET系统的产生背景、原理、系统改进和应用作一阐述,并对Red/ET在微生物研究中的应用作了举例。 展开更多
关键词 red/et重组系统 同源重组 DNA修饰作用 基因打靶
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利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选敲除AcMNPV lef-10基因 被引量：1
11
作者 白玉 许晓东 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第12期181-190,198,共11页
【目的】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选建立苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子lef-10点突变载体,为进一步研究AcMNPVlef-10的功能奠定基础。【方法】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选BAC修饰系统对AcMNPV lef-10进行点突... 【目的】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选建立苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子lef-10点突变载体,为进一步研究AcMNPVlef-10的功能奠定基础。【方法】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选BAC修饰系统对AcMNPV lef-10进行点突变,由于lef-10和必需基因vp1054有重叠,所以在敲除lef-10时只能通过引进点突变使lef-10失活,避免影响vp1054的正常表达。首先,构建rpsL-AMP筛选盒,然后在野生型AcBacmid中引进点突变(方法是通过2次Red/ET重组:第1次重组在野生型AcBacmid lef-10中引进rpsL-AMP抗性筛选标记,形成一次重组Bacmid,第2次重组是在一次重组Bacmid中引进含点突变的lef-10片段),再利用链霉素反向筛选去除rpsL-AMP抗性筛选标记,同时引入相应的点突变。将从lef-10基因点突变重组菌中提取得到的AcBacmid与质粒pTriEx1.1和pTriEx-innateP-lef10分别共转染草地贪夜蛾Sf9细胞,同时用野生型AcBacmid与质粒pTriEx1.1共转染Sf9细胞作为对照,显微镜下观察病毒的复制情况,确定lef-10基因是否为AcMNPV的必需基因。【结果】通过对重组Bacmid的PCR鉴定和点突变序列的测定,证明AcMNPVlef-10基因已经发生点突变;通过共转染试验发现,随着转染时间的延长,lef-10补回型病毒和野生型病毒一样,均能在Sf9细胞中复制产生具有感染性的子代病毒粒子BV,从而对邻近细胞造成二次感染,使得细胞死亡,且lef-10补回型重组病毒产生感染性病毒粒子的能力与野生型基本一致;而由于lef-10缺失型重组病毒不能产生有感染性的病毒粒子,所以在被lef-10缺失型重组病毒转染的细胞中,细胞数目不会随着转染时间的增加而发生明显改变。【结论】利用Red/ET重组系统结合rpsL反向筛选系统可以在Ac MNPVlef-10基因中引入点突变,且lef-10是杆状病毒生活周期中的一个必需基因,其缺失会影响杆状病毒的复制。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV) lef-10 red/et重组系统 rpsL反向筛选系统 基因敲除
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Red/ET同源重组介导的基因克隆载体pBACS的构建、鉴定与应用 被引量：1
12
作者 侯少阳 李岚芳 +5 位作者 杜丽霞 孙林慧 李典 禚惠荣 姜莉莉 张大虎 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第5期590-597,共8页
目的通过Red/ET同源重组技术构建pBACS基因克隆及测序质粒载体。方法以质粒pBAC2015、pET28a为模板设计四对引物,PCR扩增得到四段彼此间有50 bp同源区域的基因片段,分别命名为bac-sop、bac-ori、bac-kan和bac-T7。利用Red/ET同源重组技... 目的通过Red/ET同源重组技术构建pBACS基因克隆及测序质粒载体。方法以质粒pBAC2015、pET28a为模板设计四对引物,PCR扩增得到四段彼此间有50 bp同源区域的基因片段,分别命名为bac-sop、bac-ori、bac-kan和bac-T7。利用Red/ET同源重组技术,将四段基因片段电转至E.coli GB05-dir感受态中进行线线重组。经酶切、测序验证阳性克隆质粒。此外,对重组质粒pBACS进行稳定性鉴定;利用pBACS分别进行细菌16S rDNA和真菌ITS基因克隆和基因测序。结果酶切和测序的验证结果显示,质粒的大小、元件方向及序列正确;pBACS具有较强的稳定性,适用于作为基因工程的克隆载体;可高效用于细菌16S rDNA和真菌ITS序列的克隆,阳性率为100%。结论成功利用Red/ET技术构建克隆载体pBACS,质粒载体具有稳定性强、重组效率高的特点,在基因克隆和基因测序等方面具有良好的应用潜力。 展开更多
关键词 pBACS 克隆 red/et技术 同源重组
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Red/ET同源重组系统介导的质粒载体快速构建
13
作者 苏春 余佳 +1 位作者 邱荣国 唐莉 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期12-17,共6页
Red/ET重组技术是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术,该技术简便、快速.首先,通过一步融合的方法将链霉素抗性基因和氯霉素抗性基因同时克隆至pUC19上,从而构建出含有正反选择标记的载体pRC;其次,用安普霉素抗... Red/ET重组技术是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术,该技术简便、快速.首先,通过一步融合的方法将链霉素抗性基因和氯霉素抗性基因同时克隆至pUC19上,从而构建出含有正反选择标记的载体pRC;其次,用安普霉素抗性基因或者氯霉素抗性基因替换了常用表达载体pET-28b上的卡那霉素抗性基因,改变了其抗性选择标记,得到的表达载体pMT和pCT可以更广泛地应用于不同宿主中;最后,还将启动和终止表达的区域定点插入pACYC184载体中,使其成为可以独立表达蛋白的表达载体p184.本研究所得到的载体为大肠杆菌宿主菌中的基因克隆和蛋白表达提供了基础. 展开更多
关键词 red et技术 同源重组 抗性基因 一步融合 正反选择标记 克隆
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Red/ET同源重组技术及其在微生物基因组挖掘中的应用进展 被引量：12
14
作者 郑文韬 张友明 卞小莹 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1735-1746,共12页
Red/ET同源重组技术(Red/ET recombineering)是由来源于大肠杆菌λ噬菌体的蛋白对Redα/Redβ或来源于Rac原噬菌体的蛋白对Rec E/Rec T所介导的基于短同源臂(40–50 bp)的同源重组技术,能对宿主DNA序列进行快速、高效、精确的修饰和操... Red/ET同源重组技术(Red/ET recombineering)是由来源于大肠杆菌λ噬菌体的蛋白对Redα/Redβ或来源于Rac原噬菌体的蛋白对Rec E/Rec T所介导的基于短同源臂(40–50 bp)的同源重组技术,能对宿主DNA序列进行快速、高效、精确的修饰和操作。本文主要综述了2010年以来Red/ET同源重组技术在大肠杆菌及其他细菌中的研究进展,同时简要介绍了该技术在微生物基因组挖掘,尤其是在微生物基因簇的异源表达领域的应用进展。 展开更多
关键词 red/et同源重组技术 直接克隆 遗传工程 基因组挖掘 次级代谢产物 异源表达
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不孕女性患者红细胞叶酸水平与IVF-ET结局的相关性
15
作者 王晶 孙超 +4 位作者 王红娜 孟鹏 刘闯 张建芳 田国华 《山西医科大学学报》 2026年第1期105-109,共5页
目的探讨不孕女性患者红细胞叶酸水平对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响,及其在辅助生殖周期中对卵泡募集、卵子成熟、卵子受精与早期胚胎发育的潜在作用。方法本研究回顾性纳入2021年1—12月于空军军医大学西京医院妇产科生殖中心... 目的探讨不孕女性患者红细胞叶酸水平对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响,及其在辅助生殖周期中对卵泡募集、卵子成熟、卵子受精与早期胚胎发育的潜在作用。方法本研究回顾性纳入2021年1—12月于空军军医大学西京医院妇产科生殖中心行IVF-ET治疗的105例不孕女性患者,检测患者取卵前2天红细胞叶酸水平,并比较获卵数、成熟卵数、双原核(2PN)数、2PN卵裂胚胎数和可移植胚胎数,采用线性回归分析红细胞叶酸水平与IVF-ET结局指标的相关性,并按红细胞叶酸水平分成≥800 nmol/L组和<800 nmol/L组,采用独立样本t检验分析两组间IVF-ET各结局指标差异,进一步分析红细胞叶酸水平与IVF-ET各结局指标之间的效应关系。结果线性回归分析显示,红细胞叶酸水平与获卵数、成熟卵数(MⅡ)数及可移植胚胎数无显著相关性(P>0.05),但与2PN数和2PN卵裂胚胎数呈边缘负相关(P接近0.05)。进一步分组后结果显示红细胞叶酸≥800 nmol/L组2PN数、2PN卵裂胚胎数及可移植胚胎数显著低于<800 nmol/L组(P<0.05)。结论体内红细胞叶酸累积到一定的阈值时,可能对卵子受精及胚胎早期发育产生不利影响,故辅助生殖人群叶酸补充应结合个体水平和代谢状态进行个体化干预。 展开更多
关键词 红细胞叶酸水平 体外受精-胚胎移植结局 卵泡募集 卵子成熟 卵子受精 早期胚胎发育 叶酸补充 不孕女性
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利用Rde/ET技术构建表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒 被引量：10
16
作者 兰德松 石星明 +6 位作者 王云峰 刘长军 王玫 崔红玉 田国彬 李继松 童光志 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期78-84,共7页
【目的】本研究以火鸡疱疹病毒(HVT)BAC分子克隆为平台,构建表达禽流感HA基因的重组火鸡疱疹病毒,以开发新型病毒活载体疫苗。【方法】利用Red/ET重组技术,经过两步法重组:第一步,用两端带有50bp大小左、右同源臂a和b的选择标记基因rpsL... 【目的】本研究以火鸡疱疹病毒(HVT)BAC分子克隆为平台,构建表达禽流感HA基因的重组火鸡疱疹病毒,以开发新型病毒活载体疫苗。【方法】利用Red/ET重组技术,经过两步法重组:第一步,用两端带有50bp大小左、右同源臂a和b的选择标记基因rpsL-neo表达盒替换HVT基因组US2区;第二步,用两端带有同样的50 bp左、右同源臂a和b的HA基因表达盒替换选择标记基因rpsL-neo表达盒。在含有氯霉素和链霉素双抗性的平板上筛选阳性克隆,经卡那霉素抗性反向筛选和PCR进一步鉴定,鉴定正确的克隆命名为pHVT-HA。提取并纯化pHVT-HA DNA,转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF),以完成重组病毒的拯救。【结果】命名为pHVT-HA3的BAC克隆转染CEF后第4天,出现病毒噬斑,噬斑形态与野生型HVT相似,获得拯救的重组病毒,命名为rHVT-HA3,将重组病毒rHVT-HA3在CEF上连续传代培养,经PCR和间接免疫荧光检测表明,重组病毒在连续传代过程中仍能稳定表达HA蛋白。【结论】本研究以HVT BAC为平台,利用Red/ET重组技术,构建了表达禽流感A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的血凝素(HA)基因的重组火鸡疱疹病毒,为新型禽流感重组活载体疫苗开发奠定基础。 展开更多
关键词 火鸡疱疹病毒 细菌人工染色体 red/et克隆 禽流感病毒 HA基因
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MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失BAC克隆株的构建及其体外增殖特性 被引量：4
17
作者 余祖华 丁轲 +3 位作者 滕蔓 迟佳琦 宿靖伟 程相朝 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期851-857,共7页
为构建缺失马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)Meq基因簇microRNAs(Meq-clustered miRNAs的突变株,本研究在vv MDV GX0101细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)克隆的基础上,采用Red/ET同源重组技术将Meq-clus... 为构建缺失马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)Meq基因簇microRNAs(Meq-clustered miRNAs的突变株,本研究在vv MDV GX0101细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)克隆的基础上,采用Red/ET同源重组技术将Meq-clustered miRNAs的编码基因进行缺失突变,经PCR鉴定及序列分析证明Meq-cluster miRNAs序列成功缺失后,提取Δmeq-miRNAs BAC DNA,转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,用SYBR GreenⅠqRT-PCR检测病毒体外增殖特性。结果表明成功拯救出缺失MDV Meq-clustered miRNAs基因的感染性BAC克隆株GX0101Δmeq-miRNAs,且该缺失株与亲本株GX0101BAC具有相似的增殖曲线,Meq-clustered miRNAs是MDV体外复制的非必需基因。MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失感染性BAC克隆株的成功构建为进一步研究MDV Meq-clustered miRNAs在MDV致病和致肿瘤方面的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 细菌人工染色体 red/et 克隆
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复方玫瑰胶囊对家兔心肌缺血-再灌注损伤中NO、ET的影响 被引量：2
18
作者 王昕 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2003年第11期33-34,共2页
目的:探讨复方玫瑰胶囊对家兔心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:以家兔血清中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)为指标进行观察。结果:复方玫瑰胶囊对心肌缺血-再灌注损伤家兔血清中NO的升高与ET的降低有显著作用(P<0.01)。结论:复方玫... 目的:探讨复方玫瑰胶囊对家兔心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:以家兔血清中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)为指标进行观察。结果:复方玫瑰胶囊对心肌缺血-再灌注损伤家兔血清中NO的升高与ET的降低有显著作用(P<0.01)。结论:复方玫瑰胶囊通过对NO与ET含量的影响对再灌注心肌损伤起到保护作用。 展开更多
关键词 复方玫瑰胶囊 心肌缺血 再灌注损伤 一氧化氮 内皮素
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PTE-ET-18-OCH_3诱导线粒体聚积并促发凋亡 被引量：1
19
作者 张辉 方芳 +2 位作者 方云祥 喻莉萍 Faustino Mollinedo 《湘南学院学报（医学版）》 2007年第1期1-3,9,共4页
目的探讨PTE-ET-18-OCH3(ET-18-OCH3荧光拟似物)引起Jurkat细胞凋亡的作用机制。方法应用PTE-ET-18-OCH3染色、Mito Traker(red)染色和TUNEL试验检测药物的沉积部位及药物促发细胞凋亡的途径。结果应用PTE-ET-18-OCH3处理肿瘤细胞后,PTE... 目的探讨PTE-ET-18-OCH3(ET-18-OCH3荧光拟似物)引起Jurkat细胞凋亡的作用机制。方法应用PTE-ET-18-OCH3染色、Mito Traker(red)染色和TUNEL试验检测药物的沉积部位及药物促发细胞凋亡的途径。结果应用PTE-ET-18-OCH3处理肿瘤细胞后,PTE-ET-18-OCH3染色和Mito Traker(red)共同染色可见,药物沉积于线粒体,并诱导线粒体的聚集;TUNEL试验可见,处理组细胞染色体DNA链断裂,Propidium iodide荧光显示细胞核发生碎裂并溶解。结论PTE-ET-18-OCH3主要沉积于肿瘤细胞的线粒体并诱导线粒聚集,随后通过线粒体诱导的凋亡通路促发肿瘤细胞的凋亡。 展开更多
关键词 PrE-et-18-OCH3 Mito Traker(red) TUNEL试验 细胞凋亡
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微生物采油技术的研究进展
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作者 曹功泽 李彩风 +2 位作者 郑文韬 汪卫东 王雪 《石油钻采工艺》 北大核心 2025年第1期1-13,共13页
微生物采油技术(MEOR)具有耗能低、环境友好等优势,但极端油藏环境(高温、高盐、厌氧)中高效驱油菌株的缺乏制约了微生物采油技术的应用。针对极端油藏环境,利用基因编辑技术优化微生物的耐热性和厌氧能力是微生物采油的技术瓶颈。利用... 微生物采油技术(MEOR)具有耗能低、环境友好等优势,但极端油藏环境(高温、高盐、厌氧)中高效驱油菌株的缺乏制约了微生物采油技术的应用。针对极端油藏环境,利用基因编辑技术优化微生物的耐热性和厌氧能力是微生物采油的技术瓶颈。利用基因工程对分离自极端油藏储层环境中的微生物进行定向改造,是获得微生物采油菌株的有效方式。从微生物采油的作用机理、应用现状以及发展方向三个方面对微生物采油技术进行了综述,并引入了酶法强化采油技术(EEOR)这一新概念,通过使用生物酶催化剂改变岩石物理性质,提高石油质量和开采效率。这些研究将有助于更好地理解油藏极端环境微生物的生态系统,并为其应用提供更好的科学依据。 展开更多
关键词 微生物采油 提高采收率 基因工程 耐厌氧 高温 red/et重组工程 酶法强化采油
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