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RecET重组机制及应用研究进展
1
作者 郑园霞 张毅 刘亮伟 《河南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期379-388,共10页
RecE/RecT(即RecET)介导短臂(30~60 bp)DNA重组,从而成为一种新的工具广泛用于质粒构建、基因组编辑代谢路径等方面。综述了RecET重组工具由创建到完善的发展过程、在质粒构建及基因组编辑中的应用、RecE/RecT蛋白晶体结构及冷冻电镜结... RecE/RecT(即RecET)介导短臂(30~60 bp)DNA重组,从而成为一种新的工具广泛用于质粒构建、基因组编辑代谢路径等方面。综述了RecET重组工具由创建到完善的发展过程、在质粒构建及基因组编辑中的应用、RecE/RecT蛋白晶体结构及冷冻电镜结构的解析,探讨了其外切活性重组说及ssDNA退火机制,进而说明了体外重组、体外互作、在真核生物研究中的价值等,并对其存在的问题和未来发展进行了展望。 展开更多
关键词 recet重组 recet基因组编辑工具 recet蛋白结构 外切活性重组说 ssDNA退火机制
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运动发酵单胞菌RecET重组系统的构建及应用 被引量：1
2
作者 李涛 曹庆华 +2 位作者 吴燕 谭雪梅 张义正 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期209-214,共6页
为了提高外源基因整合到染色体的效率,在已构建的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体基础上,构建了RecET表达质粒pSUZM3a-RecET.选取乙醇脱氢酶Ⅰ(adhA)基因作为靶基因,四环素抗性基因(Tcr)作为筛选标记基因,检测RecET重组系统在Z.mobili... 为了提高外源基因整合到染色体的效率,在已构建的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体基础上,构建了RecET表达质粒pSUZM3a-RecET.选取乙醇脱氢酶Ⅰ(adhA)基因作为靶基因,四环素抗性基因(Tcr)作为筛选标记基因,检测RecET重组系统在Z.mobilis中进行基因重组的可行性.将两端带有60bp adhA基因同源臂的四环素抗性基因片段电击转化含有RecET重组系统表达质粒的运动发酵单胞菌ZM4,获得adhA基因缺失突变菌株.对突变菌株adhA基因的PCR产物进行测序发现,adhA基因已被置换为四环素抗性基因.上述结果表明:RecET重组系统在运动发酵单胞菌中具有高效、便捷和可操作性,只需60bp同源臂即可完成同源重组. 展开更多
关键词 运动发酵单胞菌 recet重组系统 基因敲除 基因敲入
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噬菌体重组酶介导的DNA同源重组工程 被引量：7
3
作者 李瑞娟 赵晓雨 +5 位作者 杨润雨 刘洋 颜富 王海龙 张友明 符军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期3230-3248,共19页
来源于噬菌体的遗传操作工具在基因工程中具有非常重要的地位,例如位点特异性重组酶、柯斯质粒DNA文库及同源重组酶等。其中,来源于Lambda噬菌体的同源重组酶Redα/Redβ和来源于Rac原噬菌体的同源重组酶RecE/RecT能够高效地介导35–50b... 来源于噬菌体的遗传操作工具在基因工程中具有非常重要的地位,例如位点特异性重组酶、柯斯质粒DNA文库及同源重组酶等。其中,来源于Lambda噬菌体的同源重组酶Redα/Redβ和来源于Rac原噬菌体的同源重组酶RecE/RecT能够高效地介导35–50bp短同源臂之间的重组。基于噬菌体同源重组酶Redα/Redβ和RecE/RecT开发的DNA同源重组工程(Recombineering)能够对靶标DNA分子进行快速、精准、高效的修饰,不受限制性内切酶识别位点和DNA分子大小限制,已发展成为一种新型的基因工程技术。本文主要综述了噬菌体同源重组酶及其作用机制、在大肠杆菌及其他细菌中的应用和开发,以及在微生物次级代谢产物的挖掘、动植物转基因、病毒基因组克隆和修饰等方面的应用。原位激活沉默基因簇需要宿主特异性的DNA同源重组工程进行启动子和调控元件的修饰;异源表达次级代谢产物的首要步骤一般是通过RecET直接克隆大的DNA片段;动植物转基因复杂载体的构建效率在有了Red同源重组系统以后有了革命性的发展;RecET直接克隆和Red同源重组介导的感染性克隆构建和修饰方法,不仅有利于病毒基因组功能研究,同时也为载体疫苗开发提供了最优方案。 展开更多
关键词 噬菌体同源重组酶 同源重组工程 Red系统 recet系统 次级代谢产物 动植物转基因 病毒反向遗传学
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同源重组方法在制备DNA大片段中的应用 被引量：5
4
作者 倪现朴 季州翔 夏焕章 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期663-668,共6页
目的介绍快速、简便制备DNA大片段的新方法。方法查阅国内外近年关于DNA大片段制备方法的文献33篇,对这些方法进行归纳和总结。结果综述了大肠杆菌Red/ET重组系统和基于酿酒酵母重组系统的DNA自组装和TAR克隆在DNA片段制备中的应用。结... 目的介绍快速、简便制备DNA大片段的新方法。方法查阅国内外近年关于DNA大片段制备方法的文献33篇,对这些方法进行归纳和总结。结果综述了大肠杆菌Red/ET重组系统和基于酿酒酵母重组系统的DNA自组装和TAR克隆在DNA片段制备中的应用。结论同源重组系统不仅提高了克隆DNA大片段的效率,而且简化了操作流程。这些方法在制备DNA大片段用于组合生物合成和合成生物学制备药物中具有重要的应用前景。 展开更多
关键词 合成生物学 同源重组 recet系统 DNA自组装 酵母TAR克隆
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重组工程系统研究进展 被引量：3
5
作者 于梅 周建光 《生物技术通讯》 CAS 2004年第6期617-619,共3页
大肠杆菌的同源重组依靠内源性的RecA蛋白。RecBCD降解双链线性DNA分子,因此必须构建环状质粒打靶载体才能完成体内重组,操作过程繁琐,所需同源臂长。最近建立起的依赖于Rac噬菌体的ET重组系统和基于λ噬菌体的Red重组系统,可有效利用线... 大肠杆菌的同源重组依靠内源性的RecA蛋白。RecBCD降解双链线性DNA分子,因此必须构建环状质粒打靶载体才能完成体内重组,操作过程繁琐,所需同源臂长。最近建立起的依赖于Rac噬菌体的ET重组系统和基于λ噬菌体的Red重组系统,可有效利用线性DNA片段作为打靶分子,对大肠杆菌染色体DNA和BAC、PAC载体中包含的真核细胞基因组DNA进行基因敲除、敲入、替换、单碱基突变及体内基因克隆等修饰。这2种系统重组效率高,用PCR方法便可合成双链线性DNA打靶分子,不需要限制酶和连接酶,操作过程简单、精确、快速、经济,大大缩短了构建打靶载体的时间,成为功能基因组研究的有力工具。 展开更多
关键词 体内 靶分子 ET 大肠杆菌 打靶载体 BAC 内源性 重组工程 双链 DNA分子
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论艺术院校播音与主持专业朗诵教学——以组织参加全国首届“夏青杯”朗诵大赛为例 被引量：2
6
作者 刘惠彬 《新疆艺术学院学报》 2012年第1期92-95,共4页
朗诵是播音主持专业学生一项基本功。本文从组织参加首届"夏青杯"朗诵大赛活动着手,试图阐述大赛对播音与主持专业课教学带来的有益启示,反思当前艺术院校播音与主持艺术专业人才培养中存在的基本功训练不够扎实,声音表现缺... 朗诵是播音主持专业学生一项基本功。本文从组织参加首届"夏青杯"朗诵大赛活动着手,试图阐述大赛对播音与主持专业课教学带来的有益启示,反思当前艺术院校播音与主持艺术专业人才培养中存在的基本功训练不够扎实,声音表现缺乏技巧,舞台上缺乏"对象交流",舞台感不强等问题。 展开更多
关键词 “夏青杯”播音主持朗诵人才培养
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染色体DNA琼脂糖包埋法辅助的ExoCET技术克隆放线菌天然产物生物合成基因簇
7
作者 马婧贤 韩舒婷 +7 位作者 盛勇 王珩瑜 邢利 罗晓霞 白林泉 康前进 邓子新 欧一新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4964-4980,共17页
【目的】本研究旨在通过将琼脂糖包埋染色体DNA的方法与ExoCET重组技术相结合,建立放线菌天然产物生物合成基因簇的捕获方法。然后将克隆基因簇导入通用底盘宿主中,实现目标生物合成基因簇的异源表达。【方法】首先,利用低熔点琼脂糖包... 【目的】本研究旨在通过将琼脂糖包埋染色体DNA的方法与ExoCET重组技术相结合,建立放线菌天然产物生物合成基因簇的捕获方法。然后将克隆基因簇导入通用底盘宿主中,实现目标生物合成基因簇的异源表达。【方法】首先,利用低熔点琼脂糖包埋技术制备菌株的染色体基因组总DNA,再用限制性内切酶消化含有染色体DNA的琼脂块,获得线性化的DNA样品;然后利用ExoCET重组技术,以p15A线性载体片段将目标基因簇线性片段进行捕获;再通过PCR-targeting的方法向目标质粒中引入所需的接合转移DNA元件。接着,将改造质粒通过接合转移导入到Streptomyces coelicolor M1252宿主中,获得不同的重组菌株。最后,对不同的菌株进行发酵并提取化合物,最后进行活性检测以及质谱检测。【结果】通过该方法,从菌株S.lincolnensis NRR2936中成功获得了林可霉素生物合成基因簇(lmb-BGC),从菌株Nonomuraea nitratireducens WYY166^(T)中克隆得到了2个核糖体肽类化合物的生物合成基因簇(nioblantin,niob-BGC和nitblantin,nitb-BGC),并实现了lmb-BGC在天蓝色链霉菌M1252中的成功表达。【结论】本研究通过将低熔点琼脂糖包埋技术与ExoCET重组技术进行合理整合,定向克隆得到了林可霉素以及2个新颖的羊毛硫肽类化合物的生物合成基因簇。然后,分别对重组质粒改造后,在天蓝色链霉菌M1252宿主中进行表达,分别获得重组菌株MJX01、MJX02和MJX04。最后,利用质谱以及活性测试的手段对发酵提取物进行了检测,确定了林可霉素生物合成基因簇在天蓝色链霉菌M1252中成功表达。本研究为通过基因簇克隆和异源表达发掘新化合物奠定了基础。 展开更多
关键词 染色体DNA的琼脂糖包埋方法 ExoCET技术 林可霉素 羊毛硫肽 异源表达 质谱
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