期刊文献+
共找到44篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
RT-PCR-RFLP在大麦黄矮病毒检测中的应用 被引量:4
1
作者 杜志强 周广和 +3 位作者 马占鸿 李莉 王锡锋 常胜军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期83-85,共3页
The universal primer of Luteovirus was designed and synthesized.An experimental system of RT PCR RFLP was developed in barley yellow dwarf virus (BYDVs).BYDVs can be distinguished qualitatively by RT PCR method.It was... The universal primer of Luteovirus was designed and synthesized.An experimental system of RT PCR RFLP was developed in barley yellow dwarf virus (BYDVs).BYDVs can be distinguished qualitatively by RT PCR method.It was seen that different serotypes of BYDVs have critical different RFLP patters when the PCR producs were digested by restriction enzyme HinfI.The RFLP patterns of 7 isolates of PAV serotype were greatly different.These results indicate there existed sequence variations among different serotypes of BYDVs and vector phenotypes of PAV serotype.There is no difference between MAV serotypes in RFLP analysis.The slight distinction in the segment of coat protein gene of BYDVs can be revealed by RT PCR RFLP system. 展开更多
关键词 大麦黄矮病毒 BYDVs 通用引物 rt-pcr-rflp
在线阅读 下载PDF
RT-PCR-RFLP技术在登革病毒感染早期诊断中的应用 被引量:1
2
作者 卢业成 江振友 +2 位作者 陈盛强 陈万山 张复春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期949-951,共3页
目的建立疑似登革病毒感染的病原快速鉴定分型方法,并对2004年我院收治的一例疑似登革感染患者进行确诊。方法用免疫层析法(ICT)检测DV-IgM抗体、免疫斑点法(DIBA)检测DV-IgG抗体对疑似登革病毒感染患者进行动态监测;用登革病毒通用引... 目的建立疑似登革病毒感染的病原快速鉴定分型方法,并对2004年我院收治的一例疑似登革感染患者进行确诊。方法用免疫层析法(ICT)检测DV-IgM抗体、免疫斑点法(DIBA)检测DV-IgG抗体对疑似登革病毒感染患者进行动态监测;用登革病毒通用引物通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增患者血清中的登革病毒核酸,用限制性内切酶BstnⅠ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定分型。结果发病第5天患者DV-IgM抗体开始呈弱阳性,第9天DV-IgM抗体滴度达到1∶8,第13天DV-IgM抗体滴度开始下降;发病第9天患者DV-IgG抗体呈弱阳性,第12天DV-IgG抗体滴度达到1∶8。用RT-PCR-RFLP检测疑似登革病毒感染患者早期血标本,确定2004年我院收治的一例患者为登革Ⅰ型病毒感染所致。结论利用RT-PCR-RFLP技术对登革病毒进行分型鉴定具有敏感、特异、快速的优点,与登革热抗体检测结合起来应用可缩短疑似登革感染的确诊时间、降低检测成本,具有很好的社会效益和经济效益。 展开更多
关键词 登革病毒 免疫层析法 免疫斑点法 rt-pcr-rflp
暂未订购
猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立 被引量:2
3
作者 胡继明 杨培培 +7 位作者 王颖 孙海芳 黄娟 陈俏俏 杨瑞梅 张传美 秦晓冰 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期943-949,共7页
本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆... 本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 野毒株 兔化弱毒疫苗株 rt-pcr-rflp
在线阅读 下载PDF
猪繁殖与呼吸综合征病毒华东地区分离株RT-PCR-RFLP分析 被引量:12
4
作者 邓雨修 姜平 +3 位作者 李玉峰 王先炜 蒋文明 汤景元 《中国病毒学》 CSCD 2004年第4期398-400,共3页
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates identified in samples from 50 field cases originated from eastern China herds were studied. ORF5 gene of PRRSV isolates was amplified by reverse tran... Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates identified in samples from 50 field cases originated from eastern China herds were studied. ORF5 gene of PRRSV isolates was amplified by reverse transcript polymerase chain reaction(RT-PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns for enzymes MluⅠ, HincⅡand SacⅡwere determined on these ORF5 genes. The RFLP pattern obtained from 39 isolates was 2-2-1(78%), 3 isolates was 1-1-1(6%) and 8 isolates identified in 2003 was 1-3-1 (16%). The results showed PRRSV strains have variations and existed no less than 3 gene subtypes in the area. 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 华东地区 限制性片段长度多态性 RT-PCR PRRSV 抗原性 毒力
在线阅读 下载PDF
RT-PCR-RFLP方法鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒 被引量:3
5
作者 张亮 田耕 +7 位作者 石双艳 袁磊 刘澣扬 黄小波 伍锐 文心田 文翼平 曹三杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1555-1560,共6页
建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消... 建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消化后于15g·L-1琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并利用建立的RT-PCR-RFLP方法对78份临床样品进行了JEV的检测及基因型鉴定。结果显示,特异性引物可扩增出长为819bp的片段,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性。经SpeⅠ酶切,基因Ⅰ型JEV RT-PCR产物被切为568和251bp 2个条带,基因Ⅲ型JEV RT-PCR产物被切为446、251和122bp 3个条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合RT-PCR产物被切为568、446、251和122bp 4个条带,该方法最低可检出1.5pg·μL-1的JEV RNA。RT-PCR-RFLP结果显示78份临床样品中有14份为JEV阳性,其中6份为基因Ⅰ型,8份为基因Ⅲ型,与核苷酸测序分析结果一致。本研究为日本脑炎病毒的实验室诊断及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的鉴别提供了一种快速有效的分子生物学方法。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 反转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 基因Ⅰ型 基因Ⅲ型 鉴别
在线阅读 下载PDF
鉴别犬瘟热病毒疫苗株和野毒株RT-PCR-RFLP方法的建立及应用 被引量:3
6
作者 张洪亮 张传美 +3 位作者 王聪 黄娟 任颖超 单虎 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1647-1656,共10页
根据Onderstepoort株H基因序列,设计1对引物建立RT-PCR-RFLP检测方法,对不同宿主来源的疑似犬瘟热临床样品进行检测,并对检出的犬瘟热病毒野毒山东株PCR产物进行克隆和序列分析,验证RT-PCR-RFLP检测方法。结果RT-PCR扩增片段为1 921bp,... 根据Onderstepoort株H基因序列,设计1对引物建立RT-PCR-RFLP检测方法,对不同宿主来源的疑似犬瘟热临床样品进行检测,并对检出的犬瘟热病毒野毒山东株PCR产物进行克隆和序列分析,验证RT-PCR-RFLP检测方法。结果RT-PCR扩增片段为1 921bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被NdeⅠ酶切为1 282、345和294bp 3个片段,弱毒疫苗株则不能被切开;病毒RNA的最小检出量为2.15ng。临床检测共检出19份样品为犬瘟热阳性,其中15份为野毒株感染,其H基因编码区全长为1 824bp,均在1 279和1 543处有NdeⅠ酶切位点,推导氨基酸与野毒株的同源性在92.9%~96.9%,与疫苗株的同源性在89.0%~90.8%,进化树分析显示这些毒株在基因型上属于Asia-1型,为野毒株谱系。该方法的建立为临床上犬瘟热病毒的鉴别检测和诊断提供了依据。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 鉴别方法 RT—PCR-RFLP 血凝素蛋白(H)
原文传递
One-step RT-PCR-RFLP方法筛查新型甲型H1N1流感病毒Oseltamivir耐药株 被引量:2
7
作者 熊英 施勇 +3 位作者 李健雄 龚甜 周珺 徐刚 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第23期3409-3411,共3页
目的分析2013年江西省甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因第275位氨基酸变异情况,掌握甲型H1N1流感病毒耐药特性,为甲型H1N1流感临床治疗和疾病控制提供参考。方法收集江西省流感监测哨点医院采集的流感样病例的鼻咽拭子标本,采用狗肾... 目的分析2013年江西省甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因第275位氨基酸变异情况,掌握甲型H1N1流感病毒耐药特性,为甲型H1N1流感临床治疗和疾病控制提供参考。方法收集江西省流感监测哨点医院采集的流感样病例的鼻咽拭子标本,采用狗肾传代细胞(MDCK)对标本进行病毒分离,对分离的31株新型甲型H1N1流感病毒进行核酸提取,采用一步法逆转录-聚合酶链反应(One-step RT-PCR)扩增病毒NA基因部分片段,采用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法,分析扩增的部分NA基因第275位是否发生组氨酸(H)到酪氨酸(Y)的突变。结果2013年江西省31株甲型H1N1流感病毒NA基因第275位氨基酸均为组氨酸,未发生变异。结论 2013年31株毒株均对Oseltamivir敏感,One-step RT-PCR-RFLP方法筛查新型甲型H1N1流感病毒Oseltamivir耐药株简便可行。 展开更多
关键词 新型甲型H1N1流感病毒 神经氨酸酶基因 耐药性 一步法逆转录聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析方法
原文传递
应用RT-PCR-RFLP鉴别2014年新余市麻疹病毒感染病例 被引量:1
8
作者 文奇 廖秀海 +3 位作者 潘虹 胡传琛 龚甜 李健雄 《实验与检验医学》 CAS 2019年第2期202-204,共3页
目的引进一种区别麻疹病毒疫苗株与野生株的简单方法,用以检测新余市麻疹病毒感染病例标本。方法新余市8份麻疹病毒感染病例标本和1株S191麻疹疫苗株经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒H基因部分片段,应用限制性内切酶片段长度多态... 目的引进一种区别麻疹病毒疫苗株与野生株的简单方法,用以检测新余市麻疹病毒感染病例标本。方法新余市8份麻疹病毒感染病例标本和1株S191麻疹疫苗株经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒H基因部分片段,应用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法进行酶切分析。结果 S191麻疹疫苗株被AflII限制性酶酶切成2个片段,8份麻疹病毒感染病例标本均未酶切消化。结论新余8例麻疹病例全部为麻疹野病毒所感染;RT-PCR-RFLP方法简单、有效,非常适合条件受限的实验室使用。 展开更多
关键词 麻疹病毒 疫苗株 野生株 逆转录聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析方法
暂未订购
马铃薯卷叶病毒RT-PCR-RFLP的检测分析 被引量:1
9
作者 张磊 董家红 张仲凯 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期43-46,共4页
马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)是马铃薯生产上的主要病毒病原之一,侵染马铃薯后,造成减产和品质退化.采自云南、内蒙古和贵州的马铃薯样品经过DAS-ELISA检测为PLRV阳性,经RT-PCR扩增出约350 bp的DNA片段表明感染了马铃薯... 马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)是马铃薯生产上的主要病毒病原之一,侵染马铃薯后,造成减产和品质退化.采自云南、内蒙古和贵州的马铃薯样品经过DAS-ELISA检测为PLRV阳性,经RT-PCR扩增出约350 bp的DNA片段表明感染了马铃薯卷叶病毒.进一步用HaeⅢ和StuⅠ限制性内切酶对马铃薯卷叶病毒的RT-PCR产物进行Restriction fragment length polymorphism (RFLP)分析,RFLP图谱与预期图谱相符.证实RT-PCR-RFLP方法是1种快速、准确的检测方法. 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 RT-PCR RFLP分析
原文传递
番木瓜环斑病毒株系的分子生物学方法鉴定 被引量:8
10
作者 贺国安 肖火根 +2 位作者 张曙光 李华平 范怀忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期21-25,共5页
以 PRSV株系特异性引物对 PRSV的 PRSV12 6 (PRSV日本分离物 )、Ys、Vb和 Sm等株系进行 RT- PCR方法鉴定 ,引物 PR2 1/ PR2 2能把 Ys从 Vb和 Sm中鉴定出来 ,PR30 0 / PR30 1则能把 Vb从 Ys、Sm和 PRSV12 6中鉴定出来 ;用限制性内切酶 Ha... 以 PRSV株系特异性引物对 PRSV的 PRSV12 6 (PRSV日本分离物 )、Ys、Vb和 Sm等株系进行 RT- PCR方法鉴定 ,引物 PR2 1/ PR2 2能把 Ys从 Vb和 Sm中鉴定出来 ,PR30 0 / PR30 1则能把 Vb从 Ys、Sm和 PRSV12 6中鉴定出来 ;用限制性内切酶 Hae II、Sau3A I和 Hinf I对 PRSV的PRSV12 6、Ys、Vb和 Sm等株系进行单酶切 RT- PCR- RFLP分析 ,Hinf I能把 PRSV12 6与 Ys、Vb和Sm鉴别开来 ,Sau3A I能把 Ys与 Vb和 Sm鉴别开来 ,Hae II则能把 Ys与 PRSV12 6、Vb和 Sm鉴别开来 ;以 P1/ P2为引物 ,对 Vb、Ys和 Sm株系进行 RT- PCR- RFLP- SSCP分析 ,结果能一次把三者较好地区别开来。 展开更多
关键词 分子生物学方法 番木瓜环斑病毒 株系鉴定 RT-PCR rt-pcr-rflp rt-pcr-rflp-SSCP
在线阅读 下载PDF
黄瓜花叶病毒2个分离物的亚组鉴定及株系分化研究 被引量:19
11
作者 席德慧 林宏辉 向本春 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期232-237,共6页
基于黄瓜花叶病毒甜菜分离物CMV-X J1和CMV-X J2独特的生物学特性,利用RT-PCR对接种寄主植物进行了检测。RT-PCR产物的RFLP结果显示,2个病毒分离物的M spI酶切图谱与CMV亚组I病毒的酶切图谱很相似,但经EcoR I酶切后出现显著差异;进一步... 基于黄瓜花叶病毒甜菜分离物CMV-X J1和CMV-X J2独特的生物学特性,利用RT-PCR对接种寄主植物进行了检测。RT-PCR产物的RFLP结果显示,2个病毒分离物的M spI酶切图谱与CMV亚组I病毒的酶切图谱很相似,但经EcoR I酶切后出现显著差异;进一步对2个分离物的外壳蛋白基因进行了克隆,序列分析表明,CMV-X J1和CMV-X J2归属CMVIB亚组,二者存在着株系分化的趋势。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 rt-pcr-rflp 序列分析 亚组鉴定 株系分化
在线阅读 下载PDF
长沙市2013-2014年麻疹野毒株与疫苗株的快速鉴定与分析 被引量:4
12
作者 叶文 孙边成 +4 位作者 陈发明 欧新华 张如胜 黄政 刘晓蕾 《实用预防医学》 CAS 2016年第7期789-790,884,共3页
目的了解2013-2014年长沙地区是否存在疫苗株感染,建立实验室快速鉴别麻疹野毒株与疫苗株方法。方法按照《全国麻疹监测方案》,采集麻疹疑似病例咽拭子标本,应用RT-PCR方法进行麻疹病毒核酸检测,再从麻疹病毒核酸阳性病例的咽拭子标本... 目的了解2013-2014年长沙地区是否存在疫苗株感染,建立实验室快速鉴别麻疹野毒株与疫苗株方法。方法按照《全国麻疹监测方案》,采集麻疹疑似病例咽拭子标本,应用RT-PCR方法进行麻疹病毒核酸检测,再从麻疹病毒核酸阳性病例的咽拭子标本中提取核酸,采用转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(reverse transcription-polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法进行疫苗株和野毒株的快速鉴定和基因序列分析。结果共采集到697份麻疹疑似病例的咽拭子标本,检出224份麻疹病毒核酸阳性,9例出现麻疹临床症状的患者有麻疹减毒活疫苗(measles attenuated live vaccine,MV)接种史。经RT-PCR-RFLP方法鉴定,均为野毒株感染。测序及序列比对分析结果显示均为H1a基因型。结论 2013-2014年长沙麻疹疑似症状者及9例MV接种史患者均为野毒株感染。成功建立RT-PCR-RFLP方法区别疫苗株与野毒株的感染。 展开更多
关键词 麻疹 野毒株 疫苗株 rt-pcr-rflp
原文传递
汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究 被引量:4
13
作者 唐家琪 操敏 +3 位作者 王长军 雷万里 魏春宝 叶春燕 《中国病毒学》 CSCD 1999年第4期314-321,共8页
根据HFRSV汉滩型(HTN)代表株76-118和汉城型(SEO)代表株R22基因资料,设计了两组引物,用电脑软件分析证明设计符合引物标准。以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。非融... 根据HFRSV汉滩型(HTN)代表株76-118和汉城型(SEO)代表株R22基因资料,设计了两组引物,用电脑软件分析证明设计符合引物标准。以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。非融合表达产量虽不及融合表达高,但生物活性好。以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原,其工作浓度均达1:100000用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株,2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本,并与cELISA法比较,二者阳性检出率分别为100%和84.6%,符合率为84.6%,但前者比后者敏感性高15.4%。对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切,建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)分型法。被定为HTN型的9株,SEO型的8株,余3株未能定型。此20个毒株曾用血清学方法分型,仅11株分型成功.与RT-PCR-RFLP法结果符合。分型成功率RT-PCR-RFLP法比血清法高30%。 展开更多
关键词 基因分型 重组抗原 HFRSV RT-PCR rt-pcr-rflp
暂未订购
番木瓜环斑病毒株系的分子生物学方法鉴定
14
作者 贺国安 《中山大学研究生学刊(自然科学与医学版)》 2002年第3期96-102,共7页
以 PRSV 株系特异性引物对 PRSV 的 PRSV126(PRSV 日本分离物)、Ys、Vb 和 Sm 等株系进行 RT-PCR 方法鉴定,引物 PR21/PR22 能把Ys 从 Vb 和 Sm 中鉴定出来,PR300/PR301则能把 Vb 从 Ys、Sm 和 PRSV126中鉴定出来;用限制性内切酶 Hae Ⅱ... 以 PRSV 株系特异性引物对 PRSV 的 PRSV126(PRSV 日本分离物)、Ys、Vb 和 Sm 等株系进行 RT-PCR 方法鉴定,引物 PR21/PR22 能把Ys 从 Vb 和 Sm 中鉴定出来,PR300/PR301则能把 Vb 从 Ys、Sm 和 PRSV126中鉴定出来;用限制性内切酶 Hae Ⅱ、Sau3A Ⅰ和 Hinf Ⅰ对 PRSV 的PRSV126、Ys、Vb 和 Sm 等株系进行单酶切 RT-PCR-RFLP 分析,Hinf Ⅰ能把 PRSV126与 Ys、Vb 和 Sm 鉴别开来,Sau3A Ⅰ能把 Ys 与 Vb 和 Sm 鉴别开来,Hae Ⅱ则能把 Ys 与 PRSV126、Vb 和 Sm 鉴别开来;以 P1/P2为引物,对 Vb、Ys 和 Sm 株系进行 RT-PCR-RFLP-SSCP 分析,结果能一次把三者较好地区别开来。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 株系鉴定 rt-pcr-rflp-SSCP 分子生物学 植物病毒病 病害防治
在线阅读 下载PDF
用RT-PCR和RFLP对禽传染性支气管炎病毒中国分离株的分型 被引量:9
15
作者 王林川 廖明 +2 位作者 王红宁 黄勇 辛朝安 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期365-368,共4页
用RT-PCR方法获取了禽传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株M41、H52、A5968和国内分离株D41、F、G的S1基因,对它们做RFLP分析,发现D41、F株属于马萨诸塞血清型、G株为变异株。对用RT-PCR和... 用RT-PCR方法获取了禽传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株M41、H52、A5968和国内分离株D41、F、G的S1基因,对它们做RFLP分析,发现D41、F株属于马萨诸塞血清型、G株为变异株。对用RT-PCR和RFLP来区分IBV的分型方法的应用理论和前景进行了论述。 展开更多
关键词 禽病 传染性支气管炎 病毒 RT-PCR RFLP 分离株
在线阅读 下载PDF
RT-PCR和RFLP对我国部分传染性支气管炎病毒分离株分型 被引量:4
16
作者 尹燕博 邹勇 +9 位作者 邰友华 徐兰芳 吴时友 蒋正军 康顺文 龚振华 郭福生 蔡丽娟 马洪超 孙淑芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期535-538,共4页
用2 对引物分别对4 株传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株(Gray、M41、H120、MA5)和5 株国内地方分离株(KF8、18KF7、QF3、XF7、XF18)进行RT-PCR,结果均获得了与预期大小一致的片段。对此2 种PCR 产物进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分... 用2 对引物分别对4 株传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株(Gray、M41、H120、MA5)和5 株国内地方分离株(KF8、18KF7、QF3、XF7、XF18)进行RT-PCR,结果均获得了与预期大小一致的片段。对此2 种PCR 产物进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析,分别用3 种限制性内切酶(HaeⅢ、HinfⅠ、PvuⅡ)进行酶切,根据不同的酶切图谱将测试的IBV 毒株分为不同的基因型。2 对引物的PCR 产物酶切分型结果基本一致。9 株IBV 毒株分为3 种基因型,即H120、M41、XF7、XF18、MA5 和KF8 属于Ⅰ型,Gray 属于Ⅱ型,QF3、18KF7 展开更多
关键词 传染性支气管炎 病毒株 RT-PCR 基因型 RFLR
在线阅读 下载PDF
红壤坡地利用方式对土壤细菌群落结构的影响 被引量:28
17
作者 秦红灵 袁红朝 +3 位作者 张慧 朱亦君 吴敏娜 魏文学 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期594-602,共9页
利用中国科学院桃源农业生态试验站坡地不同利用方式长期定位观测试验场农田、自然恢复和茶园土壤为研究对象,直接从土壤中抽提总DNA,应用T-RFLP和RT-PCR技术研究红壤坡地利用方式对土壤细菌群落结构的影响。结果表明,红壤坡地三种土地... 利用中国科学院桃源农业生态试验站坡地不同利用方式长期定位观测试验场农田、自然恢复和茶园土壤为研究对象,直接从土壤中抽提总DNA,应用T-RFLP和RT-PCR技术研究红壤坡地利用方式对土壤细菌群落结构的影响。结果表明,红壤坡地三种土地利用方式土壤细菌多样性指数农田>茶园>自然恢复(p<0.05),但土壤细菌数量茶园>自然恢复>农田(p<0.05),茶园土壤细菌数量是农田的8.76倍。基于T-RFLP图谱的样品间相似性指数和主要限制性片段(T-RFs)定性分析均表明,农田与茶园和自然恢复土壤均存在显著的差异(p<0.05),而茶园和自然恢复土壤细菌群落比较相似。不同土地利用方式土壤有机质、有效磷和速效钾均对土壤细菌群落结构产生显著影响(p<0.05)。综合考虑经济效益和保持红壤坡地的可持续利用,茶园将成为中国南方红壤丘陵坡地可持续利用的一种有效方式。 展开更多
关键词 土地利用 土壤细菌 多样性 T-RFLP RT-PCR
在线阅读 下载PDF
应用巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP对山东肾综合征出血热病人血清中HV基因检测和分型研究 被引量:4
18
作者 刘运喜 赵仲堂 +6 位作者 许晓群 李健 高媛 江佳富 张景兰 杨占清 曹务春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期624-628,共5页
目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中... 目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中的HV进行基因扩增,采用RFLP、SSCP分型,并进行序列测定与分析。结果48份临床和ELISA检测确诊的HFRS病人血清经巢式RT-PCR扩增后,41份阳性,阳性率85.42%。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经HindIII、HinfI酶切后,呈现2种不同的RFLP图谱:33份显示与R22株相似的酶切图谱,应属SEOV型;另外8份显示出与HTN76-118株相似的图谱,属HTNV型,这8份HTNV型标本均为10-12月间收集的病人血清。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经SSCP分析,亦呈现2种不同的图谱:33份具有与R22株相似的SSCP图谱,应属SEOV型;而另8份则与HTN76-118株具有相似的SSCP图谱,属HTNV型。对部分扩增产物序列采用系统进化树分析也得出类似的结果:sdp1、sdp2、sdp3与HTN型76-118株亲缘关系相近,属同一簇,而sdp22、sdp37与SEOV型Z37、R22株亲缘关系相近,属另外一簇,这与RFLP和SSCP获得的结果相一致。结论山东肾综合征出血热重疫区病人基因型以SEOV型为主,但在秋冬季节也存在HTNV型。巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP法可对HV准确分型,而且简便、迅速,适合于大规模流行病学调查。 展开更多
关键词 HV 巢式RT-PCR RFLP SSCP 序列分析 基因型
暂未订购
中国禽肾病变IBV分离株S1基因的RT-PCR/RFLP特性 被引量:2
19
作者 王林川 张桂云 +2 位作者 黄勇 李华 廖明 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期32-36,共5页
对中国13个省市分离到的29个肾病变IBV毒株作了S1基因的RT-PCR/RFLP特性鉴定.用相同的一对引物,8个毒株———广东/01/83,河南/04/94,河南/05/94,内蒙/01/93,江苏/01/93,河... 对中国13个省市分离到的29个肾病变IBV毒株作了S1基因的RT-PCR/RFLP特性鉴定.用相同的一对引物,8个毒株———广东/01/83,河南/04/94,河南/05/94,内蒙/01/93,江苏/01/93,河南/01/93,天津/02/93,内蒙/02/93,经RT-PCR扩增获得了包含有S1基因cDNA的1734bp的片段;河南/06/95的为一1000bp左右的片段;其它20个毒株没有结果.经RFLP分析,广东/01/83,河南/04/94,河南/05/94,内蒙/01/93归类于Massachusets血清型,江苏/01/93归于Gray血清型,河南/01/93,天津/02/93,内蒙/02/93是新的变异株.研究结果表明,国内禽肾病变IB的致病毒株,在不同的地区有其特异的变异株。 展开更多
关键词 IBV S1基因 RFLP 肾病变
在线阅读 下载PDF
DNA和cDNA水平对比研究施肥对稻田土壤细菌多样性的影响 被引量:3
20
作者 王聪 吴讷 +3 位作者 侯海军 汤亚芳 沈健林 秦红灵 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第11期4372-4379,共8页
依托长沙农业环境观测研究站不同施肥方式长期定位试验,直接从土壤中抽提总DNA和RNA,应用T-RFLP和RTPCR技术在DNA和c DNA水平对比研究施肥对亚热带稻田土壤细菌丰度和群落结构的影响.结果表明,施肥和秸秆还田显著改变了土壤细菌群落组成... 依托长沙农业环境观测研究站不同施肥方式长期定位试验,直接从土壤中抽提总DNA和RNA,应用T-RFLP和RTPCR技术在DNA和c DNA水平对比研究施肥对亚热带稻田土壤细菌丰度和群落结构的影响.结果表明,施肥和秸秆还田显著改变了土壤细菌群落组成(DNA水平)和转录组成(c DNA水平)结构,且不同处理中DNA水平的T-RFLP图谱与cDNA水平相差很大.施肥和秸秆还田降低了土壤中存在的细菌多样性,对土壤中转录的细菌多样性没有影响.土壤16S rRNA基因丰度(DNA水平)平均是其转录丰度(c DNA水平)的337倍,与不施氮肥处理(N0)相比,平衡施肥(NPK)没有改变土壤细菌的数量,在平衡施肥的基础上进行秸秆还田增加了土壤细菌的数量,但高量与低量秸秆还田没有显著差异.RDA分析表明,稻田土壤中铵态氮含量是调控各处理土壤中存在及转录的细菌群落的关键因子.总体而言,不管在DNA还是c DNA水平,研究施肥对土壤细菌丰度的影响均是可行并可信的;但只有在c DNA水平开展研究,才能有效发现细菌群落对环境的适应性. 展开更多
关键词 施肥 土壤细菌 c DNA T-RFLP RT-PCR
原文传递
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部