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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病RT-PCR快速鉴别诊断方法的建立与临床应用 被引量：18
1
作者 刘忠华 余兴龙 +7 位作者 李润成 黄泽彬 廖立珊 白霞 李晶 向卫军 汪镇南 丁建 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1268-1272,共5页
根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因的缺失信息,设计了3条特异性引物,以含高致病性PRRSVNsp2基因的质粒pMDNSP2及普通PRRSVVR2332株RNA为模板,建立了快速诊断高致病性PRRSVRT-PCR方法。通过对临床组织病料的总RNA进行... 根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因的缺失信息,设计了3条特异性引物,以含高致病性PRRSVNsp2基因的质粒pMDNSP2及普通PRRSVVR2332株RNA为模板,建立了快速诊断高致病性PRRSVRT-PCR方法。通过对临床组织病料的总RNA进行不同稀释倍数检测,结果表明该方法能从0.265pg的总RNA中检测到PRRSV的基因,说明敏感性高。用该方法对猪瘟病毒(CSFV)、Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、伪狂犬病病毒(PRV)、链球菌(Streptococcus)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)和大肠杆菌(Escherichiacoli)同条件检测,结果都为阴性。进一步对36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料细胞培养物、2株PRRSV商品活疫苗以及52个猪场所送检的184份临床样品进行了检测应用,结果36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料的细胞培养物有5份样品为阳性且都为高致病性PRRSV,2株PRRSV商品活疫苗为普通PRRSV,52个猪场中有42个猪场(123份样品)呈阳性,其中只有1份为普通PRRSV。实验表明该方法能够准确地鉴别诊断高致病性PRRSV和普通PRRSV,且具有快速、敏感和特异的特点,具有临床实用性。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病 rt-pc 鉴别诊断
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新余市甲型H1N1流感病毒H275Y突变监测 被引量：4
2
作者 刘瑞弘 文奇 +3 位作者 付倩 毛尚根 龚甜 徐刚 《实验与检验医学》 CAS 2018年第4期472-474,491,共4页
目的分析2013年-2014年新余市甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)第275位氨基酸变异情况,掌握甲型H1N1流感病毒耐药特性。方法收集新余市流感监测哨点医院的流感样病例的咽拭子标本,采用狗肾传代细胞(MDCK)对标本进行病毒分离,随机选择15... 目的分析2013年-2014年新余市甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)第275位氨基酸变异情况,掌握甲型H1N1流感病毒耐药特性。方法收集新余市流感监测哨点医院的流感样病例的咽拭子标本,采用狗肾传代细胞(MDCK)对标本进行病毒分离,随机选择15株甲型H1N1流感病毒进行核酸提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒NA基因部分片段,应用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法进行酶切分析。结果新余市15株甲型H1N1流感病毒中,仅有A/江西渝水/SWL1220/2014(H1)发生了H275Y突变,它具有Oseltamivir耐药性。结论新余市绝大多数甲型H1N1流感毒株对Oseltamivir敏感,但仍有必要持续监测和防范Oseltamivir耐药毒株的出现。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 神经氨酸酶 H275Y突变 逆转录聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析方法
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pSG5-Cbfa1转染兔皮肤成纤维细胞及其瞬时表达 被引量：1
3
作者 肖德常 杨庆铭 +1 位作者 邓廉夫 张伟 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期502-505,共4页
目的　探讨外源性小鼠Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞中获得瞬时表达的可行性。方法　在阳离子脂质体介导下 ,将含外源性小鼠Cbfa1基因的 pSG5 Cbfa1真核表达质粒导入原代培养的第 2代兔皮肤成纤维细胞内。采用RT PCR及Western Blot法检... 目的　探讨外源性小鼠Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞中获得瞬时表达的可行性。方法　在阳离子脂质体介导下 ,将含外源性小鼠Cbfa1基因的 pSG5 Cbfa1真核表达质粒导入原代培养的第 2代兔皮肤成纤维细胞内。采用RT PCR及Western Blot法检测Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞内的瞬时表达。同时采用RT PCR法检测细胞内骨钙素及碱性磷酸酶基因的表达情况。结果　转染pSG5 Cbfa1真核表达质粒的兔皮肤成纤维细胞内有大量小鼠Cbfa1mRNA转录及蛋白瞬时表达 ,同时诱导骨钙素mRNA及碱性磷酸酶mRNA大量表达。结论　在阳离子脂质体介导下 ,小鼠Cbfa1基因能够导入兔皮肤成纤维细胞内并获得瞬时表达 。 展开更多
关键词 pSG5-Cbfal转染 皮肤成纤维细胞 瞬时表达 WESTERN-BLOT法 rt-pc
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MEKKl与胰腺癌恶性程度的相关性研究
4
作者 苏富琴 陈晓光 《中国药理通讯》 2007年第3期10-11,共2页
目的：研究人不同类型胰腺癌培养细胞系以及其他肿瘤细胞系中MEKKl的表达水平与其增殖、运动功能以及侵袭转移能力之间的关系，为寻找和建立MEKKl高表达细胞筛选模型和临床诊断奠定基础。方法：利用RT-PCR方法和Western-blot方法检测人... 目的：研究人不同类型胰腺癌培养细胞系以及其他肿瘤细胞系中MEKKl的表达水平与其增殖、运动功能以及侵袭转移能力之间的关系，为寻找和建立MEKKl高表达细胞筛选模型和临床诊断奠定基础。方法：利用RT-PCR方法和Western-blot方法检测人胰腺癌培养细胞系和其他肿瘤细胞系中MEKKl的mRNA和蛋白质表达水平。通过细胞划痕试验、改良MTT的细胞黏附实验、软琼脂集落生成实验以及细胞运动实验，观察MEKKl表达水平与细胞存活、增殖能力及侵袭转移能力的关系。结果：胰腺癌培养细胞系Bx-PC-3、SWl990、Copan-2中MEKKl的mRNA水平和蛋白质水平均高表达。MEKKl高表达细胞系的克隆形成、增殖、运动功能以及侵袭转移能力均增强。结论：胰腺癌细胞中MEKKl的表达水平与其恶性程度呈高度正相关。 展开更多
关键词 胰腺癌 高度正相关 MEKK1激酶 rt-pc方法 Western-blot方法
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