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降解毒死蜱多功能菌株的构建及其对土壤的修复作用 被引量：1
1
作者 李红梅 张广志 +3 位作者 张新建 黄玉杰 李纪顺 杨合同 《山东科学》 CAS 2011年第5期14-17,共4页
将实验室保存的有机磷降解酶基因mpd连接到自杀性质粒pUT-Km1上,构建重组质粒pUT-M,通过三亲杂交,将mpd整合到越南伯克氏菌B418的染色体上,获得多功能工程菌株。实验证明工程菌株的原有解磷、解钾、固氮活性没有改变;48 h后对溶液中毒... 将实验室保存的有机磷降解酶基因mpd连接到自杀性质粒pUT-Km1上,构建重组质粒pUT-M,通过三亲杂交,将mpd整合到越南伯克氏菌B418的染色体上,获得多功能工程菌株。实验证明工程菌株的原有解磷、解钾、固氮活性没有改变;48 h后对溶液中毒死蜱降解率达到65%;对室内模拟污染土壤有一定的降解能力,20 d对土壤中的毒死蜱降解率达91%。 展开更多
关键词 降解毒死蜱 多功能菌株 载体构建 越南伯克氏菌 土壤修复
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含增强型绿色荧光蛋白rhBMP-2基因真核表达载体的构建 被引量：1
2
作者 刘玉 孙钦峰 +1 位作者 杨丕山 杜芳 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2007年第6期627-631,共5页
目的:构建含增强型绿色荧光蛋白的重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)基因真核表达质粒。方法:采用PCR方法扩增rhBMP-2基因,并在两端添加合适的酶切位点;利用定向克隆技术将rhBMP-2基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别插入到载体pIRES的... 目的:构建含增强型绿色荧光蛋白的重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)基因真核表达质粒。方法:采用PCR方法扩增rhBMP-2基因,并在两端添加合适的酶切位点;利用定向克隆技术将rhBMP-2基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别插入到载体pIRES的上下游多克隆位点中,两者通过IRES连接,以防止融合表达;重组的pIRES-rhBMP2-EGFP在大肠杆菌DH5α内扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建成功。结果:通过对重组质粒pIRES-rhBMP2-EGFP进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达重组质粒pIRES-rhBMP2-EGFP构建成功,开放阅读框架正确。结论:利用PCR、T/A克隆等分子生物学技术,可成功地将编码rhBMP-2的DNA片段和EGFP片段克隆到载体pIRES中,构建出重组子pIRES-rhBMP2-EGFP。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白-2(hBMP-2) 质粒 绿色荧光蛋白
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含有小鼠CD40、IgG2aFc基因片段腺病毒的构建及检测 被引量：1
3
作者 李传光 谭映霞 +1 位作者 沈志坚 张启瑜 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第13期2041-2044,共4页
目的:构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况。方法:提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-I... 目的:构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况。方法:提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-IRS-GFP,转染293细胞。出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的蛋白情况并检测目的蛋白表达量。结果:成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效地感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加。当病毒浓度增加到一定程度时目的蛋白表达趋于无明显差异性。结论:构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内、分泌表达目的蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 抗原 CD40 PDC316质粒 融合基因 质粒构建 重组腺病毒
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不同破壁方法提取无乳链球菌质粒DNA的比较 被引量：1
4
作者 王佳 易弋 +4 位作者 杨军 罗福广 夏杰 黄翠姬 伍时华 《食品科技》 CAS 北大核心 2013年第5期22-26,共5页
选择反复冻融、液氮研磨、超声波、石英砂研磨、溶菌酶、蜗牛酶6种方法破碎无乳链球菌细胞壁,再用质粒小提试剂盒提取无乳链球菌的质粒DNA。通过对所得的质粒DNA进行质量分析,比较不同破壁方法对无乳链球菌质粒提取的影响。实验结果表... 选择反复冻融、液氮研磨、超声波、石英砂研磨、溶菌酶、蜗牛酶6种方法破碎无乳链球菌细胞壁,再用质粒小提试剂盒提取无乳链球菌的质粒DNA。通过对所得的质粒DNA进行质量分析,比较不同破壁方法对无乳链球菌质粒提取的影响。实验结果表明溶菌酶酶解破壁是无乳链球菌质粒提取较为有效且简便的方法。 展开更多
关键词 破壁 无乳链球菌 质粒提取
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