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文山高峰牛朊蛋白基因(PRNP)23 bp和12 bp插入/缺失多态性分析研究 被引量：1
1
作者 种玉晴 和晓明 +8 位作者 邓文宝 农胜虎 方云霞 梁昌兴 何祖春 刘萍丹 岳丹 邓卫东 席冬梅 《家畜生态学报》 北大核心 2024年第4期15-21,共7页
为探讨文山高峰牛朊蛋白基因(prion protein gene,PRNP)启动子区23 bp和第一内含子区12 bp插入/缺失多态性特征,本研究采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和琼脂糖凝胶电泳的方法对文山高峰牛PRNP基因23 bp和12 bp位点... 为探讨文山高峰牛朊蛋白基因(prion protein gene,PRNP)启动子区23 bp和第一内含子区12 bp插入/缺失多态性特征,本研究采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和琼脂糖凝胶电泳的方法对文山高峰牛PRNP基因23 bp和12 bp位点进行基因分型,得出其多态性数据;通过与文献所报道的牛PRNP数据进行比较分析,得出文山高峰牛对疯牛病抗病性的强弱。结果表明:文山牛PRNP基因启动子区23 bp等位基因频率以缺失型为主(0.654);第一内含子区12 bp等位基因频率分别为插入型0.913,缺失型0.087;缺失型单倍型频率极低(0.082);与德国、英国以及瑞士3个国家所报道的患BSE病牛和健康牛相比较存在显著差异(P<0.05),12 bp等位基因插入/缺失频率与水牛不存在显著差异(P>0.05)。由此可见,较高的12 bp插入型等位基因和极低的缺失型单倍(23 bp插入-12 bp缺失)频率,使得文山高峰牛对BSE疾病具有较好抗病力,通过抗病育种分析能够有效预防疯牛病的发生;对中国地方牛种质资源进行相关抗病性评估,有利于为牛的抗病分子选育提供数据支撑。 展开更多
关键词 文山高峰牛 朊蛋白基因(prnp) 疯牛病(BSE) 多态性
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绵羊PRNP遗传多样性与抗病育种研究进展 被引量：14
2
作者 管峰 潘磊 +2 位作者 石国庆 刘守仁 杨利国 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期137-141,共5页
朊蛋白(Prionprotein,PrP)是近年来被确认的引起人畜共患病的新型病原体,也是目前证明的具有自我复制和传播能力的蛋白质。PrP在多种动物体内表达并具有重要生理作用,其空间结构改变被认为是可传播性海绵状脑病(Transmissible spongifor... 朊蛋白(Prionprotein,PrP)是近年来被确认的引起人畜共患病的新型病原体,也是目前证明的具有自我复制和传播能力的蛋白质。PrP在多种动物体内表达并具有重要生理作用,其空间结构改变被认为是可传播性海绵状脑病(Transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)的根源,研究发现朊蛋白编码基因(PRNP)遗传多样性与绵羊对瘙痒病的抗病性具有显著相关性。文章主要介绍了绵羊PRNP遗传多样性与痒病抗病性的关系以及PRNP遗传多样性对繁殖力和其他主要生产性能的影响等方面的研究成果,旨在为绵羊抗病育种研究提供理论参考。 展开更多
关键词 绵羊 prnp 遗传多样性 抗病性 繁殖力
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牛羊朊蛋白基因(PRNP)多态性与抗病性的研究进展 被引量：5
3
作者 席冬梅 刘情 +3 位作者 于虹漫 杨玉艾 毛华明 邓卫东 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期418-425,共8页
朊蛋白(PRNP)是近年来造成人和部分哺乳动物传染性海绵状脑病(TSE)的主要根源,该基因的多态性显著影响了人和动物对TSE的易感性或抗病性。本文分析了朊蛋白基因及其编码蛋白的结构与功能;简要介绍了绵羊基因编码区突变与致病性的关系;... 朊蛋白(PRNP)是近年来造成人和部分哺乳动物传染性海绵状脑病(TSE)的主要根源,该基因的多态性显著影响了人和动物对TSE的易感性或抗病性。本文分析了朊蛋白基因及其编码蛋白的结构与功能;简要介绍了绵羊基因编码区突变与致病性的关系;系统分析了牛科动物启动子区域内23 bp的插入/缺失、第一内含子区域内12 bp的插入/缺失及其与疯牛病(BSE)抗病性的作用机制;全面总结了全球已经报道的牛科动物12和23 bp插入/缺失的等位基因与单倍体频率,评价了其发病的可能性。该研究将为牛的分子育种提供指导。 展开更多
关键词 朊蛋白基因(prnp) 插入/缺失多态 疯牛病抗性
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PI3K/AKT/FoxO信号通路在胰岛素类似生长因子1调节神经细胞PRNP基因表达中的作用 被引量：9
4
作者 蒋国红 王长明 张丽 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第11期19-21,共3页
目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头状转录因子O亚家族蛋白(Fox O)信号通路在胰岛素类似生长因子1(IGF-1)调节神经细胞PC12细胞株PRNP基因表达中发挥的作用。方法将对数生长期的PC12细胞分为IGF-1组、实验1组和实验2组... 目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头状转录因子O亚家族蛋白(Fox O)信号通路在胰岛素类似生长因子1(IGF-1)调节神经细胞PC12细胞株PRNP基因表达中发挥的作用。方法将对数生长期的PC12细胞分为IGF-1组、实验1组和实验2组和对照组。IGF-1组加入终浓度80 ng/m L的IGF-1;实验1、2组先加入25、50μmol/L的PI3K/AKT/Fox O信号通路抑制剂LY294002,37℃培养30 min后再滴入80 ng/m L的IGF-1。对照组不加药物。继续培养24 h。采用实时荧光定量PCR法测算各组PC12细胞PRNP mRNA相对表达量,采用Western blotting法测算各组PC12细胞AKT、磷酸化AKT(p AKT)、Fox O3a和磷酸化Fox O3a(p Fox O3a)蛋白相对表达量。结果 IGF-1组PC12细胞PRNP mRNA及p AKT、p Fox O3a蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05)。实验1、2组PC12细胞PRNP mRNA及p AKT、p Fox O3a蛋白相对表达量低于IGF-1组(P均<0.05),且实验2组低于实验1组(P均<0.05)。结论 IGF-1通过磷酸化PI3K/AKT/Fox O信号通路蛋白AKT、Fox O3a调节PC12细胞PRNP基因表达。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇3激酶 蛋白激酶B 叉头状转录因子O亚家族蛋白 胰岛素样生长因子1 prnp基因
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绵羊PRNP等位基因PCR-SSCP分析条件的优化 被引量：4
5
作者 赵春林 王川 +2 位作者 吴润 李发弟 柳纪省 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期721-727,共7页
为进行绵羊PRNP等位基因密码子136、154、171的多态性研究,建立适合于绵羊PRNP等位基因开放阅读框(ORF)内高变区PCR-SSCP分析方法,对凝胶浓度、交联度、甘油浓度、电泳电压、电泳时间、PCR产物与变性缓冲液比例、电泳缓冲液浓度、上样... 为进行绵羊PRNP等位基因密码子136、154、171的多态性研究,建立适合于绵羊PRNP等位基因开放阅读框(ORF)内高变区PCR-SSCP分析方法,对凝胶浓度、交联度、甘油浓度、电泳电压、电泳时间、PCR产物与变性缓冲液比例、电泳缓冲液浓度、上样量等影响因素进行了优化试验。在优化中引入了正交试验法,以使优化过程简化,结果可靠。结果表明,交联度49∶1、甘油浓度0%、凝胶浓度12%、电泳电压200 V、PCR产物上样量≥2.0μL且<4.0μL、PCR产物与变性缓冲液比例1∶4、0.5×TBE缓冲液及4℃电泳45 h为最佳试验条件,据此建立了绵羊PRNP等位基因136、154、171密码子的PCR-SSCP分析方法。 展开更多
关键词 绵羊 prnp等位基因 聚合酶链式反应-单链构象多态性 正交试验 分析条件优化
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不同月龄PRNP基因敲除小鼠的行为学观察 被引量：3
6
作者 白换力 张海雷 +4 位作者 李忠义 鞠传静 孟轲音 万家余 申海清 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期601-605,共5页
利用Prnp0/0型青年鼠和老年鼠,通过水迷宫试验、跳台试验和自主活动试验,探讨Prnp0/0型小鼠从青年到老年是否遵循学习和记忆能力下降的一般生理规律,从而反映PrPc蛋白是否对神经系统的老化过程有影响。结果表明:在Morris水迷宫定位航行... 利用Prnp0/0型青年鼠和老年鼠,通过水迷宫试验、跳台试验和自主活动试验,探讨Prnp0/0型小鼠从青年到老年是否遵循学习和记忆能力下降的一般生理规律,从而反映PrPc蛋白是否对神经系统的老化过程有影响。结果表明:在Morris水迷宫定位航行试验中,2组鼠的潜伏期在统计学上差异不显著,但是青年鼠的潜伏期均低于老年鼠;在空间探索试验中,Prnp0/0型青年鼠穿越平台次数比老年鼠多,差异显著(P<0.05),青年鼠第1次穿越平台的时间比老年鼠短。在跳台试验中,Prnp0/0型青年鼠和老年鼠第1天的错误次数差异显著(P<0.05),24 h后错误次数差异极显著(P<0.01),第1次跳下平台的时间即潜伏期差异极显著(P<0.01)。在自主活动试验中,青年鼠较老年鼠活动强,在第4天差异极显著(P<0.01),且随着时间的延长,2组鼠的活动次数都减少。Prnp0/0型青年鼠的学习记忆能力强于老年鼠,反映出PrPc蛋白的缺失并没有显著影响到小鼠神经系统的老化过程。 展开更多
关键词 prnp基因敲除鼠 行为学 水迷宫 自主活动
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绵羊PRNP密码子136和154及171等位基因型的ARMS-PCR鉴定方法的建立 被引量：4
7
作者 王芳 赵春林 +1 位作者 吴润 王川 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期118-125,共8页
根据已获得的绵羊PRNP密码子136、154和171等位基因型的序列,设计并合成了针对各等位基因型的特异性引物,摸索3′末端引入的错配碱基种类及位置,优化扩增条件,以建立绵羊PRNP密码子136、154和171等位基因型的ARMS-PCR鉴定方法。应用ARMS... 根据已获得的绵羊PRNP密码子136、154和171等位基因型的序列,设计并合成了针对各等位基因型的特异性引物,摸索3′末端引入的错配碱基种类及位置,优化扩增条件,以建立绵羊PRNP密码子136、154和171等位基因型的ARMS-PCR鉴定方法。应用ARMS-PCR分析已知PRNP等位基因型的绵羊血样,验证ARMS-PCR与PCR-SSCP鉴定PRNP等位基因型的符合率。经ARMS-PCR验证,已知的15种绵羊PRNP等位基因型的94份血样,两者的基因分型符合率达100%。研究结果显示,该ARMS-PCR分型法能够准确鉴定出绵羊PRNP密码子136、154和171的等位基因型,且具有简便、快速、廉价的优点,适合于绵羊PRNP等位基因型的普查。 展开更多
关键词 绵羊 prnp等位基因 ARMS-PCR分型法
原文传递
PRNP基因SYBR GreenⅠ双标准曲线法荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：5
8
作者 艾文娜 吴润 刁小龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1240-1245,共6页
为建立双标准曲线法荧光定量PCR检测方法,以PRNP为目标基因、β-actin为内参基因进行扩增,将扩增产物连入pMD18-T载体,获得阳性标准品进行定量扩增。并将MDV标准毒株MD5、疫苗株CV1988和1株野毒株接种CEF,收集不同日龄病变细胞以提取RNA... 为建立双标准曲线法荧光定量PCR检测方法,以PRNP为目标基因、β-actin为内参基因进行扩增,将扩增产物连入pMD18-T载体,获得阳性标准品进行定量扩增。并将MDV标准毒株MD5、疫苗株CV1988和1株野毒株接种CEF,收集不同日龄病变细胞以提取RNA,用以上方法进行扩增。把结果代入标准曲线公式进行计算,分析PRNP基因表达与MDV致瘤的相关性。结果显示,该方法能检测出的PRNP基因和β-actin基因的最低拷贝数为1×103,特异性和重复性较好。相对于对照组,接种3株毒株的PRNP的表达量都有明显的差异。表明MDV的感染对PRNP的表达量确实存在影响。据此推测PrPC对MDV的感染可能发挥着重要的生理功能。 展开更多
关键词 prnp基因 双标准曲线法 实时荧光定量PCR
原文传递
7例散发性Creutzfeldt-Jakob病患者的PRNP和APOE基因突变/变异检测及其临床意义 被引量：3
9
作者 罗曼 李骄星 +1 位作者 孙逊沙 盛文利 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期729-731,共3页
目的探讨散发性Creutzfeldt-Jakob病(CJD)与朊蛋白(PRNP)基因、载脂蛋白E(APOE)基因突变/变异的关系。方法对临床很可能的7例CJD患者的PRNP基因的开放阅读框架及APOE基因第四外显子进行PCR扩增,产物直接测序,异常者重复测序。结果发现1... 目的探讨散发性Creutzfeldt-Jakob病(CJD)与朊蛋白(PRNP)基因、载脂蛋白E(APOE)基因突变/变异的关系。方法对临床很可能的7例CJD患者的PRNP基因的开放阅读框架及APOE基因第四外显子进行PCR扩增,产物直接测序,异常者重复测序。结果发现1例患者存在PRNP基因E200K杂合突变,6例患者为PRNP基因129基因型MM,1例患者存在APOE基因ε4等位基因。结论 PRNP基因E200K突变为CJD致病性突变,129MM基因型与散发性CJD易感性相关,APOE基因ε4等位基因可能与散发性CJD进展有关。 展开更多
关键词 散发性CJD prnp基因 APOE基因 突变 单核苷酸多态性
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牛源粪肠球菌人工感染BALB/c雌鼠肾脏组织过程中PRNP和PRND的表达变化研究 被引量：3
10
作者 樊杰 张钊 +5 位作者 杨宇泽 魏亚琴 孙康永杰 俞海山 万学瑞 王川 《中国草食动物科学》 CAS 2021年第1期36-40,64,共6页
为了研究牛源粪肠球菌感染对小鼠PRNP和PRND基因表达水平的影响,用牛源粪肠球菌感染小鼠,在1~7 d内解剖小鼠,制作病理组织革兰氏染色及石蜡切片HE染色,最后通过荧光定量PCR检测感染后1~7 d内PRNP和PRND的表达情况。结果表明:牛源粪肠球... 为了研究牛源粪肠球菌感染对小鼠PRNP和PRND基因表达水平的影响,用牛源粪肠球菌感染小鼠,在1~7 d内解剖小鼠,制作病理组织革兰氏染色及石蜡切片HE染色,最后通过荧光定量PCR检测感染后1~7 d内PRNP和PRND的表达情况。结果表明:牛源粪肠球菌感染BALB/c雌鼠后,肾脏组织病变较明显,实时荧光定量检测确实对PRNP和PRND基因的表达量存在影响;球菌感染PRNP和PRND基因在每个时段的表达量均高于空白对照组。说明小鼠肾脏的PRNP和PRND基因的表达水平随着感染时间的改变而发生变化。 展开更多
关键词 牛源粪肠球菌 prnp基因 PRND基因 荧光定量PCR
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小尾寒羊PRNP等位基因密码子136、154和171的多态性研究 被引量：1
11
作者 赵春林 吴润 +3 位作者 李发弟 柳纪省 王川 王芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期74-76,共3页
为研究小尾寒羊PRNP等位基因密码子多态性,本研究以绵羊全血基因组DNA为模版,通过PCR,扩增绵羊PRNP等位基因目的片段,并将其克隆于pMD-18T载体。经SSCP法筛选出阳性克隆后测序,确定各绵羊PRNP136位、154位和171位密码子等位基因型及频... 为研究小尾寒羊PRNP等位基因密码子多态性,本研究以绵羊全血基因组DNA为模版,通过PCR,扩增绵羊PRNP等位基因目的片段,并将其克隆于pMD-18T载体。经SSCP法筛选出阳性克隆后测序,确定各绵羊PRNP136位、154位和171位密码子等位基因型及频率分布。在104只绵羊中共检出15个PRNP136位、154位和171位密码子等位基因型,痒病易感基因型占优势(53.85%,56/104)。本研究证明,该绵羊群属于痒病易感/易发群体,一旦痒病传入具有罹患痒病的极大可能性。 展开更多
关键词 绵羊 prnp等位基因 136 154和171位密码子 多态性 PCR-SSCP
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马立克氏病鸡组织中PRNP基因表达量分析 被引量：2
12
作者 刘桂林 吴润 +3 位作者 于宏伟 王川 万学瑞 贾晓蕊 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期30-36,共7页
【目的】探明PRNP基因表达量与鸡马立克氏病发病之间的关系.【方法】从甘肃省康乐县某养鸡场采集马立克(MD)病鸡组织样品,通过RT-PCR检测MDV致瘤相关基因Meq和pp38以及病理组织学观察将样品分为MD肿瘤病变鸡、MD无病变鸡与健康鸡,最后... 【目的】探明PRNP基因表达量与鸡马立克氏病发病之间的关系.【方法】从甘肃省康乐县某养鸡场采集马立克(MD)病鸡组织样品,通过RT-PCR检测MDV致瘤相关基因Meq和pp38以及病理组织学观察将样品分为MD肿瘤病变鸡、MD无病变鸡与健康鸡,最后通过荧光定量PCR方法分析3组中PRNP基因mRNA水平的相对表达量的差异.【结果】MD无病变鸡中PRNP基因的表达规律与健康鸡基本一致,但与MD肿瘤病变鸡完全不同;除脑外,MD病鸡组织PRNP基因的表达量均高于健康鸡,其中肿瘤病变组织PRNP基因的表达量显著高于无病变组织(P<0.05),而且PRNP基因在MD病鸡肿瘤病变组织与健康鸡组织的表达差异与肿瘤病变程度有关.【结论】PRNP基因的表达量与MDV感染存在相关性,PRNP基因在MD肿瘤组织中过表达,且PRNP基因的差异表达与肿瘤病变程度有关. 展开更多
关键词 鸡 马立克病 肿瘤 prnp基因 实时荧光定量PCR
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PRNP基因在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用 被引量：1
13
作者 池霞 郭锡熔 +4 位作者 张敏 倪毓辉 王玢 童梅玲 李晓南 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期489-491,共3页
目的探讨3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中PRNP基因表达水平的变化及TNF-α对其调节作用。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（MDI）方案诱导3T3-L1细胞分化成熟,并收集分化前、分化0～10 d各... 目的探讨3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中PRNP基因表达水平的变化及TNF-α对其调节作用。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（MDI）方案诱导3T3-L1细胞分化成熟,并收集分化前、分化0～10 d各时段细胞,采用RT-PCR技术检测诱导分化不同时段3T3-L1细胞PRNP基因表达水平;同时在成功诱导3T3-L1细胞分化成熟的基础上,应用不同水平TNF-α（0.1、1.0、10.0μg/L）干预分化后的成熟脂肪细胞（第10天）,收集TNF-α刺激前（0 h）及刺激后0.5、2.0、6.0、12.0、24.0 h的脂肪细胞,通过RT-PCR测定TNF-α干预前后不同时间点脂肪细胞中PRNP基因表达水平。采用Excel软件进行统计学分析。结果1.PRNP基因低表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,至分化第10天其表达水平最高。PRNP基因表达水平除在诱导分化前（第-1天）至第4天、第2～5天、第6～10天时段内无显著性差异外（Pa〉0.05）,其余各时段间表达水平均有显著性差异（Pa〈0.05）;2.在分化前的3T3-L1脂肪细胞和成熟脂肪细胞中,不同水平TNF-α（0.1、1.0、10.0μg/L）均能在短时间内明显抑制PRNP基因mRNA的表达,且呈时间依赖性。结论PRNP基因可能参与3T3-L1脂肪细胞分化及脂质积聚过程;不同水平重组TNF-α对成熟脂肪细胞的PRNP基因表达具有抑制作用,其抑制效应总体趋势上呈时间依赖性。 展开更多
关键词 prnp基因 3T3-L1脂肪前体细胞 细胞分化 肿瘤坏死因子-Α
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山羊PRNP基因启动子转录活性研究
14
作者 周荣艳 魏彦辉 +4 位作者 锡建中 李兰会 陈辉 高立杰 张振红 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1990-1997,共8页
【目的】分析山羊PRNP基因启动子活性区域,旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子,为阐明山羊PRNP基因的表达调控提供理论依据,并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路;【方法】以山羊PRNP基因序列(Gen Bank登录号:EU870... 【目的】分析山羊PRNP基因启动子活性区域,旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子,为阐明山羊PRNP基因的表达调控提供理论依据,并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路;【方法】以山羊PRNP基因序列(Gen Bank登录号:EU870890)为模板,设计特异性引物,扩增山羊PRNP基因5′侧翼区片段,并将扩增片段克隆至p EASY-T3载体,鉴定为阳性的克隆进行测序;利用生物信息学方法和在线工具进行启动子区域和转录因子结合位点的预测;利用缺失突变技术扩增启动子区不同长度的片段11个,并克隆至p EASY-T3载体后,鉴定为阳性的质粒和pGL3-Basic载体分别用限制性内切酶Mlu I和Bgl II进行酶切,并回收酶切产物;利用T4连接酶进行目的片段与pGL3-Basic连接,鉴定为阳性的荧光素酶报告基因重组质粒进行测序,并提取无内毒素质粒,用脂质体转染法瞬时转染至SH-SY5Y细胞,转染48h后,利用双荧光素酶检测试剂盒进行各缺失突变重组质粒在细胞内的启动活性检测;【结果】成功克隆了山羊PRNP基因5′侧翼区片段,长度为2 332 bp,且该片段含有预测的启动子活性区域、保守的motifs和多个转录因子的结合位点;成功克隆了11个含有不同长度启动子的片段,并与荧光素酶报告基因连接,并构建了目的片段与荧光素酶报告基因的重组质粒;转染时脂质体与DNA的比例为1﹕0.5,萤火虫荧光素酶载体与海肾荧光素酶比例为50﹕1;山羊PRNP基因5′侧翼区存在着核心启动子,启动子活性最强的区域为-519—+82 bp,且在-220—+59 bp这一区域存在着正调控元件,外显子1对启动子活性中起重要的调控作用;4个motifs可能为正调控元件结合位点;在强启动子活性区存在10个Sp1结合位点,2个AP-2 alpha结合位点和1个AP-1结合位点;山羊PRNP基因motif 3和motif 4分别预测为转录因子Foxp3和COE1的结合位点。【结论】确定了山羊PRNP基因启动子的核心区域(-519—+82bp),外显子1对启动子活性起重要的调控作用。 展开更多
关键词 山羊 prnp基因 启动子 转录活性
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新疆地方绵羊品种PRNP基因多态性研究
15
作者 兰邹然 阿依土拉 +3 位作者 张鲁安 张学成 刘雨田 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第10期22-25,共4页
从新疆采取了8个地方绵羊品种的血液样品171份,提取绵羊基因组DNA,用PCR方法扩增绵羊PRNP基因,通过序列测定,对它们的PRNP基因型进行研究,确定了PRNP基因136、154、171位密码子的多态性为136(A/A),154(H/R)和171(Q/R/H/K),结果发现所检... 从新疆采取了8个地方绵羊品种的血液样品171份,提取绵羊基因组DNA,用PCR方法扩增绵羊PRNP基因,通过序列测定,对它们的PRNP基因型进行研究,确定了PRNP基因136、154、171位密码子的多态性为136(A/A),154(H/R)和171(Q/R/H/K),结果发现所检测的新疆地方绵羊品种PRNP基因136位密码子均为A,其基因型均为A型痒病抵抗性基因型。 展开更多
关键词 prnp基因型 PCR 序列测定 多态性
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PRNP基因八肽重复突变研究进展
16
作者 韩露 韩俊 董小平 《国际遗传学杂志》 CAS 2006年第3期187-190,共4页
某些遗传性朊病毒病,例如,家族性Creutzfeldt-Jakob病(fCJD)、GSS综合征均与PRNP基因八肽重复区插入突变相关。关于插入突变Prp分子的研究对于揭示遗传性朊病毒病发病机制具有重要意义。
关键词 遗传性朊病毒病 prnp基因 插入突变
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牛朊蛋白基因prnp敲除载体的构建及真核细胞转染 被引量：3
17
作者 张海林 程胖 +2 位作者 兰杰 宋永利 张涌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期297-304,共8页
利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力。... 利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力。本研究采用正负筛选策略,构建了牛prnp基因的双等位基因敲除载体,经内切酶Sac Ⅱ线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞,分别用600μg/mL G418、200nmol/mL Ganciclovir(GCV)进行正负药物筛选,最终获得了176个药物抗性细胞克隆,进一步采用PCR、测序、间接免疫荧光试验及Western blotting试验对细胞克隆进行鉴定,结果表明,其中的9个细胞克隆为中靶细胞,证明牛prnp基因被成功敲除。本研究为牛prnp的敲除提供了可行性依据,并为体细胞核移植生产敲除朊蛋白基因的转基因动物提供供体细胞。 展开更多
关键词 基因打靶 正负筛选策略 朊蛋白 牛胎儿成纤维细胞 prnp 间接免疫荧光 Western BLOTTING
原文传递
利用启动子缺陷型打靶载体敲除牛胎儿成纤维细胞中的Prnp 被引量：2
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作者 朱采红 俞国华 +5 位作者 李蓓 许媛媛 俞慧清 陈建泉 钱旻 成国祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1988-1992,共5页
利用启动子捕获对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。敲除动物的Prnp可使其具有抵抗Prion病感染的能力。采用启动子捕获策略,构建了牛Prnp启动子缺陷型打靶载体BoPrneo,线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细... 利用启动子捕获对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。敲除动物的Prnp可使其具有抵抗Prion病感染的能力。采用启动子捕获策略,构建了牛Prnp启动子缺陷型打靶载体BoPrneo,线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞BFF,用250μg/mL G418进行药物筛选,共得到99个药物抗性细胞克隆。对细胞克隆进行PCR、测序及Southern blotting鉴定,结果表明,其中的4个细胞克隆为中靶细胞,说明牛胎儿成纤维细胞中的Prnp一条等位基因被成功敲除。本研究为牛Prnp的敲除提供了一种简单、安全、有效的方法。 展开更多
关键词 基因打靶 启动子捕获策略 PRION病 牛胎儿成纤维细胞 prnp
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金黄色葡萄球菌ATCC25923人工感染BALB/c雌鼠肾脏组织PRNP和PRND的表达变化研究 被引量：2
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作者 孙康永杰 魏亚琴 +6 位作者 杨宇泽 万学瑞 樊杰 赵波 赵云海 郭容霞 王川 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期988-992,1013,共6页
目的为了研究细胞型朊蛋白和Doppel蛋白在金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法本实验用金黄色葡萄球菌ATCC25923感染BALB/c雌鼠后,分别在1~7 d内解剖小鼠,进行组织抹片革兰氏染色和石蜡切片制作,最后采用荧光定量PCR检测PRNP和PRND在1~7 ... 目的为了研究细胞型朊蛋白和Doppel蛋白在金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法本实验用金黄色葡萄球菌ATCC25923感染BALB/c雌鼠后,分别在1~7 d内解剖小鼠,进行组织抹片革兰氏染色和石蜡切片制作,最后采用荧光定量PCR检测PRNP和PRND在1~7 d中的相对表达量。结果金黄色葡萄球菌最先出现在肾脏,且对肾脏组织有损伤作用;PRNP和PRND基因在每个时段的表达量都高于空白对照组,其中PRNP在第1 d的表达量最高,为空白对照组的6.1倍,PRND在第2 d的表达量最高,为空白对照组的13.1倍。结论小鼠肾脏的PRNP和PRND的mRNA表达水平随着金黄色葡萄球菌感染的时间发生变化。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌ATCC25923 prnp基因 PRND基因 荧光定量PCR
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利用RNAi抑制牛骨髓间充质干细胞中朊蛋白基因(PRNP)的表达 被引量：1
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作者 宋少康 董雅娟 +5 位作者 柏学进 王文明 刘玮 牛召姗 赵仕全 杨莉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1683-1688,共6页
利用RNAi技术,根据牛源PRNP基因cDNA设计3段siRNA序列和1个阴性对照序列,分别将其连接到RNA干扰载体pRNAT-U6.1/Neo上构建成shRNA载体,并将shRNA载体转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC);通过Real-time PCR和Western Blotting筛选抑制效果最... 利用RNAi技术,根据牛源PRNP基因cDNA设计3段siRNA序列和1个阴性对照序列,分别将其连接到RNA干扰载体pRNAT-U6.1/Neo上构建成shRNA载体,并将shRNA载体转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC);通过Real-time PCR和Western Blotting筛选抑制效果最佳的载体;并用800mg/L G418对转染最佳载体的细胞进行药物筛选。结果显示:成功构建了3个靶向shRNA载体和1个阴性对照shRNA载体;转染后48h在荧光镜下检测各组均可观察到绿色荧光的表达;Real-time PCR和Western Blotting结果显示,3个靶向shRNA载体在不同时间段均在一定程度上下调了PRNP mRNA的表达,抑制了朊蛋白PrPC的生成,得到了1个最佳干扰载体sh3;通过药物筛选出了稳定转染的细胞单克隆。本研究获得了1个有效抑制朊蛋白基因表达的shRNA载体,并筛选出稳定转染的细胞单克隆,上述结果可为抗疯牛病体细胞核移植提供供体细胞。 展开更多
关键词 疯牛病 prnp 朊蛋白PrPc shRNA BMSC
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