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PRMT2慢病毒表达载体的构建及鉴定
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作者 钟警 杨心治 +3 位作者 张艳敏 高海花 秦旭平 文格波 《中南医学科学杂志》 CAS 2015年第1期73-77,共5页
目的构建精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)慢病毒表达载体。方法通过PCR扩增PRMT2 c DNA,将PRMT2 c DNA连接于GV308载体,经测序确认后,将GV308/PRMT2与p Helper 1.0和p Helper 2.0共转染至293T细胞中,收获病毒,通过Real time PCR测定滴度;将PR... 目的构建精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)慢病毒表达载体。方法通过PCR扩增PRMT2 c DNA,将PRMT2 c DNA连接于GV308载体,经测序确认后,将GV308/PRMT2与p Helper 1.0和p Helper 2.0共转染至293T细胞中,收获病毒,通过Real time PCR测定滴度;将PRMT2慢病毒表达载体侵染293T细胞,通过四环素诱导和Western blot检测PRMT2慢病毒表达载体的表达能力。结果在感染PRMT2慢病毒载体293T细胞中能检测到PRMT2-3Flag融合蛋白的表达。结论成功构建PRMT2的慢病毒表达载体。 展开更多
关键词 prmt2 慢病毒载体 基因治疗
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干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响 被引量:1
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作者 明志勇 鞠佳霓 +6 位作者 代全楷 黄山 李科志 邬国斌 陈闯 何剑波 赵荫农 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第7期1104-1109,共6页
目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对... 目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对PRMT2基因的3对小干扰RNA,体外通过脂质体Lipofectamine 3000转染到相对高表达PRMT2的人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中抑制PRMT2基因的表达,并设置阴性对照组(NC组)和空白对照组。qRT-PCR、Western blot检测转染后细胞PRMT2 mRNA水平和蛋白水平的变化。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:与人正常肝细胞LO2相比,PRMT2基因在人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中相对高表达。将siPRMT2转染HepG2和SMMC-7721细胞后,与NC组相比,siPRMT2-1和siPRMT2-2组的PRMT2 mRNA和蛋白表达均明显降低(P均<0.05),NC组与空白对照组无明显差异。与NC组相比,将siPRMT2-1和siPRMT2-2转染进HepG2和SMMC-7721细胞后,细胞增殖速度减慢、迁移和侵袭能力显著减弱(P均<0.05),NC组与空白对照组无明显差异。结论:RNA干扰抑制PRMT2表达后,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,PRMT2可能影响肝癌的预后。 展开更多
关键词 肝癌 prmt2 增殖 迁移 侵袭
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子宫内膜癌组织中PRMT2高表达及其促进细胞增殖的机制探讨 被引量:1
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作者 董娜 梁冰锋 +1 位作者 马丽 赵子军 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第17期2975-2980,共6页
目的:探究蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)在子宫内膜癌恶性进展中的作用及临床意义。方法:免疫组化方法检测子宫内膜癌组织及其癌旁组织中PRMT2的表达。通过感染PRMT2 shRNA慢病毒和转染pcDNA3.1... 目的:探究蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)在子宫内膜癌恶性进展中的作用及临床意义。方法:免疫组化方法检测子宫内膜癌组织及其癌旁组织中PRMT2的表达。通过感染PRMT2 shRNA慢病毒和转染pcDNA3.1-PRMT2质粒,构建子宫内膜癌HEC-1A细胞PRMT2敲低和过表达模型,CCK-8和克隆形成实验检测PRMT2对细胞增殖的影响。通过RT-qPCR探明PRMT2下游靶基因,并采用Western blot实验进行验证。采用挽救实验证实PRMT2调控靶基因的特异性和在子宫内膜癌增殖中的重要性。结果:免疫组化实验发现PRMT2在子宫内膜癌组织中表达明显高于癌旁组织,且PRMT2表达与患者生存期呈显著负相关(P<0.05)。敲低PRMT2表达能显著抑制子宫内膜癌细胞增殖(P<0.05),并且发现PRMT2敲低可以抑制CCND1表达;相反,过表达PRMT2能够促进子宫内膜癌细胞增殖(P<0.05),促进CCND1表达。挽救实验结果表明,在PRMT2敲低的细胞中过表达CCND1能够部分恢复细胞的增殖能力。结论:PRMT2在子宫内膜癌组织中高表达,并且PRMT2能够通过调控CCND1表达促进子宫内膜癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 prmt2 子宫内膜癌 CCND1 细胞增殖
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PRMT2基因的miRNA载体构建及其活性鉴定 被引量:1
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作者 唐焱 周宏 +1 位作者 钟警 姜浩 《中南医学科学杂志》 CAS 2012年第4期360-363,380,共5页
目的构建蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)基因的miRNA真核表达栽体,鉴定其转染乳腺癌MCF7细胞株后的生物活性。方法根据PRMT2基因序列设计合成4对pre-miRNA片段,定向克隆到pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,采用菌落的PCR和测... 目的构建蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)基因的miRNA真核表达栽体,鉴定其转染乳腺癌MCF7细胞株后的生物活性。方法根据PRMT2基因序列设计合成4对pre-miRNA片段,定向克隆到pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,采用菌落的PCR和测序分析鉴定插入序列的完整性;并将重组载体转染至MCF7细胞株中,采用Westen b1ot方法鉴定重组载体转染MCF7细胞后对PRMT2蛋白表达的干扰效果以确定其生物活性。结果构建的重组体插入片段的碱基序列完全正确,并且重组体瞬时定转染MCF7细胞后成功干扰PRMT2的表达。结论成功构建了靶向PRMT2基因的pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体,且在瞬时转染MCF7细胞后能下调PRMT2的表达。 展开更多
关键词 MIRNA 蛋白精氨酸N-甲基转移酶 雌激素受体Α 转染
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PRMT2下调NF-κB对甲状腺癌细胞增殖及凋亡的影响
5
作者 刘美萍 钟警 +1 位作者 曹仁贤 文格波 《现代医药卫生》 2010年第21期3206-3209,共4页
目的:构建稳定表达PRMT2和空载体细胞系SW579-PRMT2-V5、SW579-V5,探讨PRMT2对人甲状腺癌SW579细胞生长的影响及其作用机制。方法:应用Lipofectamine2000将真核表达载体pCDNA3.1/NT-V5-PRMT2和空载体pCDNA3.1/NT-V5导入SW579细胞,经G41... 目的:构建稳定表达PRMT2和空载体细胞系SW579-PRMT2-V5、SW579-V5,探讨PRMT2对人甲状腺癌SW579细胞生长的影响及其作用机制。方法:应用Lipofectamine2000将真核表达载体pCDNA3.1/NT-V5-PRMT2和空载体pCDNA3.1/NT-V5导入SW579细胞,经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成细胞系,MTT法检测稳定表达PRMT2对SW579细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡的变化,Western blot检测转录因子NF-κB及相关基因的变化。采用RT-PCR和Western blot鉴定稳定表达PRMT2的SW579细胞。结果:成功建立了稳定表达PRMT2和空载体的细胞系SW579-PRMT2-V5、SW579-V5。PRMT2显著抑制SW579细胞体外增殖能力。而且在诱导SW579细胞发生凋亡的同时,PRMT2可下调NF-κB活性及其调节基因cyclin D1的表达。结论:PRMT2可通过诱导细胞凋亡和下调NF-κB活性而抑制人甲状腺癌细胞增殖。 展开更多
关键词 甲状腺癌细胞 prmt2 CYCLIN D1 NF-ΚB 细胞凋亡 基因转染 细胞周期
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