共转化法获得无筛选标记的转PEPC、PPDK基因水稻恢复系纯合体 被引量：21

1

作者 袁定阳 段美娟 +3 位作者 谭炎宁 易自力 袁隆平 辛世文 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2007年第2期57-63,共7页

用根癌农杆菌共转化的方法将pSB130/CK质粒[目的基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)、磷酸丙酮酸二激酶基因(PPDK)与筛选标记潮霉素抗性基因HPT分别构建于2个T-DNA区]导入水稻恢复系R299,经PCR、Southern检测,筛选到T0代13个转基因... 用根癌农杆菌共转化的方法将pSB130/CK质粒[目的基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)、磷酸丙酮酸二激酶基因(PPDK)与筛选标记潮霉素抗性基因HPT分别构建于2个T-DNA区]导入水稻恢复系R299,经PCR、Southern检测,筛选到T0代13个转基因植株。对T1～T3代转基因后代进行PCR跟踪鉴定,分离出无潮霉素抗性基因的转基因植株(PEPC+PPDK+HPT-),分离株系比率为15%～21%,分离株系中PEPC+PPDK+HPT-型单株分离频率为7.2%～10.0%。在T3代成功获得了无筛选标记的转基因纯合系3个(06D351,06D352和06D353),PEPC酶活性和光合速率分析结果表明,其PEPC活性比对照提高了1.5～4.9倍,光合速率提高了19%～40%,说明这些转基因纯系材料在水稻高光效育种上具有很大的应用价值。 展开更多

关键词 水稻恢复系 共转化 C4基因 PEPC ppdk 高光效育种

在线阅读 下载PDF 职称材料

籽粒苋丙酮酸磷酸二激酶(PPDK)基因的密码子偏好性 被引量：14

2

作者 聂江婷 白云凤 +2 位作者 贺飞燕 闫建俊 张维锋 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期672-681,共10页

运用CHIPS、CUSP和Codon W等程序分析了双子叶C4植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)丙酮酸磷酸二激酶(PPDK)基因的密码子偏好性,并与马铃薯(Solanum tuberosum)和苜蓿(Medicago truncatula)等双子叶植物及水稻(Oryza sativa)和玉米... 运用CHIPS、CUSP和Codon W等程序分析了双子叶C4植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)丙酮酸磷酸二激酶(PPDK)基因的密码子偏好性,并与马铃薯(Solanum tuberosum)和苜蓿(Medicago truncatula)等双子叶植物及水稻(Oryza sativa)和玉米(Zea mays)等单子叶植物进行了比较,建立了聚类树状图,以期在作物高光效基因工程中为籽粒苋PPDK基因选择合适的受体植物提供依据。研究结果表明,籽粒苋PPDK基因偏好于以A或T结尾的密码子,与其它几种被比较的双子叶作物的PPDK基因密码子偏好性趋势一致,而玉米和水稻等单子叶植物更偏好使用以G或C结尾的密码子。PPDK基因密码子使用偏好性的系统聚类分析表明,籽粒苋与马铃薯和苜蓿等双子叶植物聚为一类,而稗草(Echinochloa crusgalli)、玉米和高粱(Sorghum bicolor)等单子叶植物聚为一类,与系统进化地位一致。但单子叶植物水稻的密码子偏好性与籽粒苋较为接近,与玉米和高粱相差较远。为了选择合适的蛋白质表达系统,比较并分析了籽粒苋PPDK基因的密码子偏好性与大肠杆菌(Escherichia coli)及酵母菌的异同,发现其与酵母菌的差异小于大肠杆菌,表明选择酵母菌表达系统更为合适。 展开更多

关键词 籽粒苋 密码子偏好性 ppdk基因

原文传递

玉米高光效基因PPDK在籼稻IR64中的整合及其与光合作用相关的特性分析 被引量：17

3

作者 张建福 Swapan K.Datta +1 位作者 王国英 谢华安 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第6期797-804,共8页

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)在C4植物光合作用途径中,是CO2固定的关键酶。将编码玉米丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)基因的质粒通过基因枪和农杆菌介导转化导入籼稻IR64中,PCR-Southern的结果表明,玉米丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)基因已经整合到IR64中... 丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)在C4植物光合作用途径中,是CO2固定的关键酶。将编码玉米丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)基因的质粒通过基因枪和农杆菌介导转化导入籼稻IR64中,PCR-Southern的结果表明,玉米丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)基因已经整合到IR64中。在温室条件下,分析了转基因IR64植株的剑叶全氮含量,结果表明,大部分的转基因IR64植株剑叶的全氮含量高于非转基因IR64对照,在转基因IR64植株中,最高的剑叶全氮含氮量为3.61%,比非转基因的IR64对照高1.07个百分点,剑叶全氮含量提高了42.1%。对转基因IR64植株的产量构成因素的分析结果表明,不同的转基因IR64植株之间,产量构成因素差异比较大,比如植株干重、收获指数等,有助于育种家们选择不同的育种材料用于水稻育种。 展开更多

关键词 丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)基因 光合作用 水稻(Oryza SATIVA L.) 玉米(Zea mays) 整合 特性

在线阅读 下载PDF 职称材料

玉米高光效基因ppdk的克隆及其生物信息学分析 被引量：4

4

作者 王重 张跃强 +5 位作者 樊哲儒 李剑峰 赵奇 王子霞 海热古丽.阿不力孜 张宏芝 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2354-2360,共7页

【目的】获得玉米(Zea mays)的丙酮酸磷酸双激酶基因(以下简称ppdk),并对其进行生物信息学分析。【方法】使用Trizol提取玉米SC704的总RNA,并用特异引物对其进行RT-PCR扩增,将得到的cDNA片段连接到pGEM-T载体后转化大肠杆菌DH5α,然后... 【目的】获得玉米(Zea mays)的丙酮酸磷酸双激酶基因(以下简称ppdk),并对其进行生物信息学分析。【方法】使用Trizol提取玉米SC704的总RNA,并用特异引物对其进行RT-PCR扩增,将得到的cDNA片段连接到pGEM-T载体后转化大肠杆菌DH5α,然后对阳性克隆进行测序,并对序列进行生物信息学分析。【结果】获得的玉米PPDK基因CDS全长2 781 bp,与玉米z561ppdk基因同源性为99%;其编码的多肽链包含926个氨基酸,与玉米PPDK同源性为97%。【结论】克隆了玉米C4型丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)基因,它所编码的氨基酸序列具备PPDK蛋白的保守序列和催化活性中心区域。该基因的成功克隆为今后利用其改造C3植物的光合效率以提高粮食单产奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 玉米 C4植物 光合作用效率 ppdk 生物信息学

在线阅读 下载PDF 职称材料

玉米PEPC基因和PPDK基因在籼稻明恢63中的整合及与光合作用相关的特性分析 被引量：8

5

作者 张建福 谢华安 +1 位作者 王国英 Swapan K.Datta 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第5期655-662,共8页

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物光合作用途径中,二氧化碳固定的关键酶。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是在C4和景天酸(CAM)植物光合作用的初级碳同化中的一个关键酶,该酶介导不可逆的β羧化反应,将磷酸烯醇式丙酮酸转化成草酰乙酸和磷... 丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物光合作用途径中,二氧化碳固定的关键酶。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是在C4和景天酸(CAM)植物光合作用的初级碳同化中的一个关键酶,该酶介导不可逆的β羧化反应,将磷酸烯醇式丙酮酸转化成草酰乙酸和磷酸。本研究将编码玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的质粒和编码玉米丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)基因的质粒通过基因枪轰击转化的方法同时导入籼稻明恢63中,PCR-Southern印迹杂交的结果表明,玉米丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)基因已经整合到明恢63中。在温室条件下,分析了转基因明恢63植株的剑叶全氮含量,结果表明,不同的转基因明恢63植株,其剑叶的全氮含量是不同的,大部分转基因明恢63植株剑叶的全氮含量高于非转基因明恢63对照的全氮含量,转基因明恢63植株ZHM3-50剑叶全氮含量为3.82%,比非转基因明恢63对照高0.45%。对转基因明恢63植株的产量构成因素的分析结果表明,在温室条件下,不同的转基因明恢63植株之间,产量构成因素差异比较大,比如植株干重、收获指数等。这些有助于育种家们选择不同的育种材料。 展开更多

关键词 籼稻(Oryza sativa L. ssp.indica) 丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)基因 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) 基因 玉米(Zea mays) 整合 光合作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

双分子荧光互补技术(BiFC)分析玉米SSⅠ与PPDK1之间的蛋白互作 被引量：5

6

作者 崔喜艳 张继晓 +3 位作者 窦瑶 孙小杰 尹悦佳 刘相国 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第7期49-53,59,共6页

【目的】分析玉米胚乳可溶性淀粉合成酶(SSⅠ)与质体型糖酵解途径关键催化酶丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)的蛋白互作关系,揭示可能发生互作的亚细胞位置。【方法】采用酶切连接的方法构建326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1双分子荧光互补表达... 【目的】分析玉米胚乳可溶性淀粉合成酶(SSⅠ)与质体型糖酵解途径关键催化酶丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)的蛋白互作关系,揭示可能发生互作的亚细胞位置。【方法】采用酶切连接的方法构建326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1双分子荧光互补表达载体,转化农杆菌EHA105,瞬时浸染烟草叶片组织,激光共聚焦显微镜下观察SSⅠ和PPDK1相互作用产生的荧光信号。【结果】双酶切试验鉴定表明,326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1重组载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;双分子荧光互补试验中,可观测到SSⅠ和PP-DK1相互结合而产生的黄色荧光信号。【结论】证实SSⅠ和PPDK1能够在植物活体细胞内发生真实的蛋白互作。 展开更多

关键词 SSⅠ ppdk1 双分子荧光互补技术(BiFC) 瞬时转化 蛋白质互作

在线阅读 下载PDF 职称材料

谷子PPDK2在非生物逆境胁迫下的表达分析 被引量：2

7

作者 杜艳伟 王高鸿 +6 位作者 李颜方 赵根有 阎晓光 王振华 王玉文 余爱丽 赵晋锋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期40-47,共8页

谷子是具有抗旱、耐瘠、抗逆性强、适应性广等特点的C4禾本科作物,发掘谷子高光效、逆境相关基因,旨在揭示谷子在光照和逆境胁迫下的基因表达特征。采用生物信息学方法,在谷子中鉴定出一个PPDK基因,命名为SiPPDK2;该基因位于谷子3号染色... 谷子是具有抗旱、耐瘠、抗逆性强、适应性广等特点的C4禾本科作物,发掘谷子高光效、逆境相关基因,旨在揭示谷子在光照和逆境胁迫下的基因表达特征。采用生物信息学方法,在谷子中鉴定出一个PPDK基因,命名为SiPPDK2;该基因位于谷子3号染色体,含有18个内含子,有3个转录本,原始转录本编码945个氨基酸。亚细胞定位预测结果显示,该基因位于叶绿体中。功能域分析和多序列比对发现,SiPPDK2蛋白与玉米、高粱和水稻PPDK蛋白的亲缘关系较近。Real-time PCR分析表明,PEG、ABA、盐和低温胁迫对苗期SiPPDK2基因表达有不同程度的诱导。进一步研究表明,SiPPDK2基因在拔节期、抽穗期和灌浆期均参与了对干旱和光照的胁迫响应,其中抽穗期和灌浆期在干旱条件下及拔节期和灌浆期在弱光条件下其表达量显著上调。顺式元件分析结果表明,在SiPPDK2启动子区域主要包括激素类应答、逆境应答、光应答以及其他类生长调控相关的顺式元件。结果推测,SiPPDK2基因可能参与了谷子对非生物逆境胁迫的响应。 展开更多

关键词 谷子 丙酮酸磷酸双激酶(ppdk) 非生物逆境 表达分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

籽粒苋中PPDK基因的克隆及表达特性分析 被引量：5

8

作者 王淼 王旭静 +1 位作者 唐巧玲 王志兴 《生物技术进展》 2011年第1期50-55,F0003,共7页

为寻找能提高植物光合效率的基因资源,以高光效植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus L.)为试材,利用同源克隆和RACE技术克隆了丙酮酸磷酸二激酶(Pyruvate orthophosphate dikinase,PPDK)基因,基因cDNA全长为3224bp,其中5'非翻译... 为寻找能提高植物光合效率的基因资源,以高光效植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus L.)为试材,利用同源克隆和RACE技术克隆了丙酮酸磷酸二激酶(Pyruvate orthophosphate dikinase,PPDK)基因,基因cDNA全长为3224bp,其中5'非翻译区为71bp,阅读框为2868bp,3'非翻译区为285bp,推导的蛋白质为956个氨基酸,分子量约106kDa。序列分析表明,克隆的基因含有PPDK基因的功能结构域。表达模式分析显示克隆的PPDK基因在绿色组织中特异表达,为PPDK基因的长转录本,初步确定已克隆得到为籽粒苋中的PPDK基因,将其命名为AhPPDK。 展开更多

关键词 籽粒苋 ppdk基因 表达特性

在线阅读 下载PDF 职称材料

小叶章PPDK基因的克隆和生物信息学分析 被引量：2

9

作者 王丽媛 张玉 +4 位作者 徐明怡 伍一宁 冷海楠 许楠 倪红伟 《生物技术》 CAS 2019年第2期140-146,187,共8页

[目的]获得小叶章PPDK的cDNA序列,推测蛋白氨基酸理化性质及二三级结构等,以及已知物种PPDK氨基酸系统进化分析。[方法]利用RT-PCR技术扩增PPDK序列,通过ProtParam、Blast、THMHMM、SOPMA等生物信息软件分析序列。[结果]获得了小叶章PPD... [目的]获得小叶章PPDK的cDNA序列,推测蛋白氨基酸理化性质及二三级结构等,以及已知物种PPDK氨基酸系统进化分析。[方法]利用RT-PCR技术扩增PPDK序列,通过ProtParam、Blast、THMHMM、SOPMA等生物信息软件分析序列。[结果]获得了小叶章PPDK的c DNA序列,长1 035 bp,相对分子量41. 910 kDa,等电点为9. 70,氨基酸中含量最高的是丝氨酸,72个;蛋白二级结构中无规卷曲占48. 83%,不含信号肽和跨膜结构,氨基酸系统进化树结果分析发现小叶章PPDK与二穗短柄草、水稻亲缘关系最近。[结论]小叶章PPDK含有385个氨基酸,含1个PDRP活性调控位点,72个参与信号传导的磷酸化位点。 展开更多

关键词 ppdk 小叶章 RT-PCR 系统进化树 ProtParam

原文传递

植物PPDK基因在基因工程中的应用 被引量：5

10

作者 王原媛 白云凤 张定宇 《山西农业科学》 2010年第8期88-91,共4页

PPDK基因是C4酶系统中催化CO2初级受体——磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）的生成,是C4途径的专一性酶,也是C4植物能进行高光合作用的限速酶之一。利用转基因工程原理及方法将PPDK导入粮食作物中,从而提高其产量和抗性,已成为科研人员研究的重点。

关键词 ppdk基因 结构和功能 基因工程

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国人源蓝氏贾第鞭毛虫ppdk基因的克隆及其表达产物的鉴定 被引量：1

11

作者 张永轻 滕美君 +1 位作者 王云华 李雅杰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第11期834-839,共6页

目的获取中国人源性蓝氏贾第鞭毛虫ppdk基因及相关基因产物方法以中国人源性贾第虫基因组DNA为模板,设计引物进行PCR扩增,获取ppdk基因并进行测序分析。筛选得到的阳性克隆连接至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,并转化宿主菌... 目的获取中国人源性蓝氏贾第鞭毛虫ppdk基因及相关基因产物方法以中国人源性贾第虫基因组DNA为模板,设计引物进行PCR扩增,获取ppdk基因并进行测序分析。筛选得到的阳性克隆连接至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,并转化宿主菌大肠埃希菌感受态细胞E.coliBL21(DE3),进行重组蛋白的IPTG诱导表达。收集重组表达产物进行亲和层析纯化,再用Western blot进行免疫学分析鉴定。结果序列测定分析可知,获得的阳性克隆插入片段包含一个2 655 bp的开放阅读框架;比对其基因序列发现,其与ATCC 50803(美国WB虫株C6株)的同源性可高达99%。该基因片段编码884个氨基酸,预测其表达蛋白的分子质量单位大小约为97.6 ku。Western blot显示该基因序列的原核表达产物能够被抗6个组氨酸标签的特异性抗体识别,提示重组表达产物为实验预期的目的蛋白。结论对贾第虫ppdk基因进行了克隆及原核表达,并对表达产物进行了纯化和免疫学初步鉴定,为贾第虫病治疗的高通量药物筛选等的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 ppdk 克隆 原核表达 鉴定

原文传递

甘蔗全长丙酮酸磷酸二激酶(PPDK)基因的克隆 被引量：1

12

作者 杨福明 徐德昌 侯爱菊 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期87-92,共6页

和C3植物相比,C4植物具有明显的生长优势及水分和营养利用率,生物产量也较高。甘蔗是典型的C4作物之一。以甘蔗叶片提取的基因组DNA为模板,以GenBank公布的甘蔗PPDK基因cDNA序列设计引物,进行LA-PCR(Long Acute PCR)扩增。将PCR产物克隆... 和C3植物相比,C4植物具有明显的生长优势及水分和营养利用率,生物产量也较高。甘蔗是典型的C4作物之一。以甘蔗叶片提取的基因组DNA为模板,以GenBank公布的甘蔗PPDK基因cDNA序列设计引物,进行LA-PCR(Long Acute PCR)扩增。将PCR产物克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109,测序,得到了13.5kb的甘蔗全长PPDK基因序列。为方便后续实验,在引物中引入可利用的XhoI和NotI酶切位点,将全长PPDK基因分两段克隆到pMD18-TSimple载体中,转化大肠杆菌JM109,完成了甘蔗全长丙酮酸磷酸二激酶(PPDK)基因的完整克隆,为将其导入C3作物中奠定了研究基础。 展开更多

关键词 甘蔗 ppdk基因 LA-PCR技术 全长DNA克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

转PEPC&PPDK双基因水稻灌浆期的光合生理特性 被引量：1

13

作者 宋涛 张小娟 +4 位作者 苑中原 郑宝刚 叶露幻 陈国祥 吕川根 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第1期58-61,共4页

在野外条件下,利用荧光动力学分析和生理生化研究技术,在灌浆期对转PEPC&PPDK双基因水稻R2P及其原种R299功能叶的光合特性和抗氧化系统进行比较研究。结果表明:(1)与R299相比,R2P的功能叶叶绿素含量高12.43%,净光合速率高26.86%;(2)... 在野外条件下,利用荧光动力学分析和生理生化研究技术,在灌浆期对转PEPC&PPDK双基因水稻R2P及其原种R299功能叶的光合特性和抗氧化系统进行比较研究。结果表明:(1)与R299相比,R2P的功能叶叶绿素含量高12.43%,净光合速率高26.86%;(2)R2P的PSⅡ具有更高光化学活性,有活性的反应中心数量多,热耗散的能量比例较少,光能吸收、传递和转化为电能效率较高;(3)R2P具有较强电能转化为活跃化学能能力,全电子链电子传递活性和光合磷酸化活性分别比R299高58.2%和48.1%;(4)暗反应关键酶方面,R2P的Rubisco初始活性较高,具有较高的PEPC和PPDK活性,差异显著;(5)与R299相比,R2P抗氧化酶SOD、POD和CAT活性分别高12%、15%、22%,O2.-生成速率和MDA含量分别低9%、22%。研究证明R2P在光反应和暗反应方面优势明显,抗氧化能力较高。 展开更多

关键词 PEPC ppdk 转基因水稻 光合生理特性

在线阅读 下载PDF 职称材料

玉米C_4型PPDK基因的分段PCR克隆及其表达载体构建

14

作者 崔震海 王雷 +3 位作者 阮燕晔 张立军 朱延姝 樊金娟 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期691-695,共5页

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物和景天科酸代谢(CAM)植物光合作用的关键酶,催化形成固定CO2的初始分子受体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)。玉米的C4型PPDK基因序列较长,难以直接克隆。本研究设计多对引物,首先利用常规PCR扩增PPDK启动子,再利... 丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物和景天科酸代谢(CAM)植物光合作用的关键酶,催化形成固定CO2的初始分子受体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)。玉米的C4型PPDK基因序列较长,难以直接克隆。本研究设计多对引物,首先利用常规PCR扩增PPDK启动子,再利用分段PCR扩增PPDK基因全长编码序列;测序证实克隆序列正确无误,最后利用In-Fusion技术将各个片段定向克隆至载体p CAMBIA-1391Z,成功构建了玉米C4型PPDK基因的植物表达载体。最终为C4型PPDK基因功能研究和C3植物遗传转化提供可用的基因序列,为全长基因的高效克隆及表达载体构建提供参考。 展开更多

关键词 玉米 ppdk 分段PCR 克隆 In-Fusion技术 表达载体构建

在线阅读 下载PDF 职称材料

玉米质体型AGPase小亚基和糖酵解关键酶PPDK1互作关系的研究

15

作者 崔喜艳 王阔 +4 位作者 张继晓 鹿丹 范贝 尹悦佳 刘相国 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第7期47-52,60,共7页

【目的】利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在烟草叶肉细胞中分析玉米ADP-葡萄糖焦磷酸化酶质体型小亚基(AGPase-bt2)与丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)之间的相互作用。【方法】构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-PPDK1双分子荧光表达载体,转... 【目的】利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在烟草叶肉细胞中分析玉米ADP-葡萄糖焦磷酸化酶质体型小亚基(AGPase-bt2)与丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)之间的相互作用。【方法】构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-PPDK1双分子荧光表达载体,转化农杆菌EHA105,瞬时浸染烟草叶肉细胞,激光共聚焦显微镜下观察AGPase-bt2和PPDK1的相互作用。【结果】双酶切试验表明,326-CYCHA-AGPase-bt2、326-CYNEE-PPDK1载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;浸染烟草叶片后,AGPase-bt2和PPDK1在叶肉细胞中高效表达,出现BiFC荧光信号。【结论】AGPase-bt2和PPDK1在植物细胞内存在真实互作关系。 展开更多

关键词 AGPase-bt2 ppdk1 双分子荧光互补技术 蛋白质互作

在线阅读 下载PDF 职称材料

转ZmPEPC与ZmPPDK基因拟南芥对干旱胁迫的反应 被引量：6

16

作者 杜西河 许为钢 +5 位作者 胡琳 张磊 李艳 齐学礼 王会伟 王玉民 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期477-484,共8页

为探究干旱胁迫对转玉米高光效基因ZmPEPC与ZmPPDK拟南芥的影响,本研究选用2个转PEPC基因株系(PC90,PC73),2个转PPDK基因株系(PK17,PK26),1个转PEPC+PPDK基因株系(PCK110)和对照株系(GLC)为试验材料。在幼苗期分别用150mmol/L和250mmol/... 为探究干旱胁迫对转玉米高光效基因ZmPEPC与ZmPPDK拟南芥的影响,本研究选用2个转PEPC基因株系(PC90,PC73),2个转PPDK基因株系(PK17,PK26),1个转PEPC+PPDK基因株系(PCK110)和对照株系(GLC)为试验材料。在幼苗期分别用150mmol/L和250mmol/L甘露醇(Mannitol)模拟干旱胁迫处理,测定幼苗根长,结果显示,在胁迫处理下,转PEPC、PPDK和PEPC+PPDK基因拟南芥幼苗的平均相对根长分别较对照增加了43.8%,48.4%和50.6%。在成株期进行干旱胁迫处理,测定莲座叶片的叶绿素荧光参数,叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白、丙二醛含量和成株死亡率,结果显示,在胁迫处理下,供试材料F0增加,Fv/Fm减小,对照F0增幅最大,为20.4%,Fv/Fm最小,为0.78;转PEPC、PPDK和PEPC+PPDK基因拟南芥株系平均相对叶绿素含量分别较对照增加12.6%,15.4%和23.1%;可溶性糖含量分别较对照增加3.0%,16.3%和24.4%;可溶性蛋白含量分别较对照增加0.6%,10.8%和15.4%;丙二醛含量较对照降低,分别为对照的93.5%,90.3%和84.10%;死亡率分别为12.3%,13.3%和6.7%,极显著低于对照(87.7%)(P<0.01)。上述结果表明,玉米高光效基因ZmPEPC和ZmPPDK可增强拟南芥抵抗干旱胁迫的能力,且这两个基因的共表达可能存在协同作用。 展开更多

关键词 PEPC基因 ppdk基因 干旱胁迫 转基因拟南芥

在线阅读 下载PDF 职称材料

流产布鲁菌ppdk基因缺失株的构建及其生物学特性分析 被引量：9

17

作者 高建鹏 田明星 +5 位作者 鲍衍清 李朋 刘佳萌 王少辉 丁铲 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第3期27-34,共8页

布鲁菌病是由布鲁菌感染引起的呈全球性分布的人畜共患细菌性传染病。布鲁菌是一种兼性胞内菌,感染宿主依赖多种基因的表达和调控。近年来,胞内菌的碳代谢与致病力的关系成为研究的热点。前期研究发现碳代谢相关的丙酮酸磷酸双激酶(ppdk... 布鲁菌病是由布鲁菌感染引起的呈全球性分布的人畜共患细菌性传染病。布鲁菌是一种兼性胞内菌,感染宿主依赖多种基因的表达和调控。近年来,胞内菌的碳代谢与致病力的关系成为研究的热点。前期研究发现碳代谢相关的丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)基因与布鲁菌毒力相关。本研究利用同源重组方法构建流产布鲁菌ppdk基因缺失株,通过环境压力因子耐受性实验、胞内存活实验和动物致病性实验等探讨ppdk基因对布鲁菌毒力的影响。结果显示,ppdk基因缺失能减弱布鲁菌对多粘菌素B和大牛血清的抵抗性,减弱细菌胞内存活的能力和对小鼠的致病力,表明ppdk基因与流产布鲁菌的毒力密切相关。 展开更多

关键词 流产布鲁菌 ppdk基因 毒力

在线阅读 下载PDF 职称材料

玉米丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)研究进展 被引量：2

18

作者 董洋 沈杰 王柏臣 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期642-652,共11页

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物光合作用的关键酶,主要功能是催化CO2原初受体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的再生,其中PEP参与固定CO2及碳骨架的形成。在C4种子发育过程中,PPDK参与淀粉合成、淀粉-蛋白平衡等重要生物学过程。本文通过总结C4... 丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物光合作用的关键酶,主要功能是催化CO2原初受体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的再生,其中PEP参与固定CO2及碳骨架的形成。在C4种子发育过程中,PPDK参与淀粉合成、淀粉-蛋白平衡等重要生物学过程。本文通过总结C4关键作物(玉米)PPDK的最新研究进展,归纳总结了玉米PPDK在转录、翻译和翻译后修饰等方面的调控机制;阐释了基因类型、蛋白质结构及其胁迫应答等几个方面的分子生物学机制;通过比较C3和C4植物PPDK的异同,并结合PPDK蛋白酶活调控方面的最新研究结果,深入讨论了植物中PPDK进化的生物学意义。这为科研工作者快速深入地了解玉米PPDK的最新研究进展提供了有意义的参考,同时也为C3植物引入C4高光效机制的基因工程改造奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 玉米 丙酮酸磷酸双激酶(ppdk) 功能 调节

在线阅读 下载PDF 职称材料

蓝氏贾第鞭毛虫PPDK多肽抗体制备与定位研究 被引量：2

19

作者 冯宪敏 张宏梅 +2 位作者 李瑶 鞠晓红 卢思奇 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第2期144-147,共4页

目的制备蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)磷酸烯醇式丙酮酸双激酶(PPDK)特异性多肽抗体并进行PPDK定位。方法采用DNAstar软件和BIOSUN生物医学软件,结合抗原表位分析的基本原理,对贾第虫PPDK的氨基酸序列进行抗原分析,最终确定贾第虫PPDK的... 目的制备蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)磷酸烯醇式丙酮酸双激酶(PPDK)特异性多肽抗体并进行PPDK定位。方法采用DNAstar软件和BIOSUN生物医学软件,结合抗原表位分析的基本原理,对贾第虫PPDK的氨基酸序列进行抗原分析,最终确定贾第虫PPDK的优势抗原表位肽。将上述抗原表位肽与KLH进行偶联,获得3个偶联蛋白,经脱盐柱吸附、洗脱纯化后,对抗原表位肽-KLH偶联蛋白进行定量测定。将得到的3条多肽-KLH偶联物混合,用PBS稀释为1mg/ml,分别与第1、15、29和43d免疫4只新西兰白兔[于颈背部皮下多点(至少8点)注射多肽抗原2mg],获得抗PPDK抗血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot试验检测抗体的滴度和特异性。以R3为一抗,以DyLight 649抗兔IgG为二抗,采用免疫荧光法进行PPDK的细胞定位。结果根据PPDK抗原分析结果,最终确定PPDK的优势抗原表位3个,即p1:TPENQPANSELC(氨基酸位点12-23),p2:KTRYGRKTDPELC(氨基酸位点167-178)和p3:DLQKKLAEDMNKKHC(氨基酸位点641-654)。与KLH偶联获得3个多肽偶联蛋白,即P1、P2和P3。3个偶联蛋白联合免疫新西兰白兔获得4份抗PPDK抗血清,纯化后的抗体分别命名为R1、R2、R3和R4。Western blot检测显示,R3和R4可与PPDK特异性结合,无交叉反应。以R3为一抗进行免疫荧光试验,结果显示PPDK主要定位于贾第虫细胞的胞浆内。结论本研究获得2个可与贾第虫PPDK特异性结合的抗体,并初步判断PPDK主要分布于贾第虫细胞胞浆,为PPDK功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 磷酸烯醇式丙酮酸双激酶 多肽抗体

原文传递

谷子丙酮酸磷酸双激酶基因(SiPPDK1)对非生物逆境的响应 被引量：1

20

作者 杜艳伟 王高鸿 +6 位作者 李颜方 赵根有 阎晓光 王振华 王玉文 余爱丽 赵晋锋 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第1期13-21,共9页

通过序列比对在谷子基因组中鉴定出一个PPDK基因,命名为Si PPDK1。为揭示该基因对逆境胁迫的响应,本研究通过对Si PPDK1的基因结构、蛋白特征、功能、启动子区域顺势元件、亚细胞定位、进化特征等进行了系统的分析和预测。荧光实时定量... 通过序列比对在谷子基因组中鉴定出一个PPDK基因,命名为Si PPDK1。为揭示该基因对逆境胁迫的响应,本研究通过对Si PPDK1的基因结构、蛋白特征、功能、启动子区域顺势元件、亚细胞定位、进化特征等进行了系统的分析和预测。荧光实时定量PCR检测了该基因在苗期不同逆境、关键生育期干旱以及不同光照条件下的表达。结果表明该基因位于谷子9号染色体,含有17个内含子,有2个可变剪切。功能域分析和多序列比对发现Si PPDK1蛋白具有非常保守的序列结构,并且与其它植物PPDK蛋白非常相似。q RT-PCR表达谱分析表明Si PPDK1基因在苗期被PEG、ABA、Na Cl和低温胁迫强烈诱导。进一步研究表明Si PPDK1基因在拔节、抽穗和灌浆期干旱和不同光照强度条件下均参与了对干旱和光照的胁迫响应,推测该基因参与了谷子对非生物逆境的应答,尤其在抽穗期干旱和光照胁迫应答中起重要作用。 展开更多

关键词 谷子 丙酮酸磷酸双激酶 非生物逆境 基因表达

原文传递