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表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
沈国顺
金宁一
+3 位作者
庄天中
韩贞珍
李阳
张金双
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期405-409,共5页
分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞...
分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组。通过3次溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)加压筛选,经RT-PCR、IFA和Western blot鉴定,表明重组鸡痘病毒中的目的基因在鸡胚成纤维细胞中得到表达,获得一株携带有目的基因ORF2和ORF5的重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5。
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关键词
PRRSV
O
rf
5
pcv-
2
O
rf
2
鸡痘病毒
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职称材料
猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达、纯化及抗原性分析
被引量：
6
2
作者
杨莹莹
刘永刚
+5 位作者
郝立沙
王刚
涂亚斌
佟杰
田丽红
蔡雪辉
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第3期14-19,共6页
为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型（PCV-2）重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-2 ORF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒p ET-30a-Cap,转化E.coli BL21（DE3）,在SDS-PAGE分析基础上,结合Image J和Graphp...
为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型（PCV-2）重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-2 ORF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒p ET-30a-Cap,转化E.coli BL21（DE3）,在SDS-PAGE分析基础上,结合Image J和Graphpad prism 5.0软件的分析,对重组菌E.coli BL21（p ET-30a-Cap）表达条件进行了优化,诱导产物纯化后,经SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定其抗原性。结果表明：重组Cap蛋白的最佳表达条件是当菌体浓度（OD600值）达到1.0~1.5时,加入终浓度为0.2 mmol/L的IPTG,37℃恒温摇床175 r/min振荡培养5 h;纯化获得高纯度的重组Cap蛋白,且该蛋白具有良好的反应原性。说明表达的重组Cap蛋白具有良好的抗原性,能为检测PCV-2抗体的间接ELISA试剂盒的研制提供诊断抗原。
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关键词
pcv-
2
O
rf
2
CAP蛋白
大肠杆菌
优化表达
ImageJ软件
抗原性
原文传递
题名
表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
沈国顺
金宁一
庄天中
韩贞珍
李阳
张金双
机构
吉林大学畜牧兽医学院
军事医学科学院军事兽医研究所
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期405-409,共5页
文摘
分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组。通过3次溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)加压筛选,经RT-PCR、IFA和Western blot鉴定,表明重组鸡痘病毒中的目的基因在鸡胚成纤维细胞中得到表达,获得一株携带有目的基因ORF2和ORF5的重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5。
关键词
PRRSV
O
rf
5
pcv-
2
O
rf
2
鸡痘病毒
Keywords
PRRSV O
rf
5
pcv-20rf2
fowl pox virus
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达、纯化及抗原性分析
被引量：
6
2
作者
杨莹莹
刘永刚
郝立沙
王刚
涂亚斌
佟杰
田丽红
蔡雪辉
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
东北林业大学野生动物资源学院
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第3期14-19,共6页
基金
国际科技合作与交流专项(2011DFA32210)
文摘
为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型（PCV-2）重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-2 ORF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒p ET-30a-Cap,转化E.coli BL21（DE3）,在SDS-PAGE分析基础上,结合Image J和Graphpad prism 5.0软件的分析,对重组菌E.coli BL21（p ET-30a-Cap）表达条件进行了优化,诱导产物纯化后,经SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定其抗原性。结果表明：重组Cap蛋白的最佳表达条件是当菌体浓度（OD600值）达到1.0~1.5时,加入终浓度为0.2 mmol/L的IPTG,37℃恒温摇床175 r/min振荡培养5 h;纯化获得高纯度的重组Cap蛋白,且该蛋白具有良好的反应原性。说明表达的重组Cap蛋白具有良好的抗原性,能为检测PCV-2抗体的间接ELISA试剂盒的研制提供诊断抗原。
关键词
pcv-
2
O
rf
2
CAP蛋白
大肠杆菌
优化表达
ImageJ软件
抗原性
Keywords
PCV -
20
rf
2
Cap protein
Escherichia coli
optimized expression
ImageJ software
antigenicity
分类号
S828 [农业科学—畜牧学]
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定
沈国顺
金宁一
庄天中
韩贞珍
李阳
张金双
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达、纯化及抗原性分析
杨莹莹
刘永刚
郝立沙
王刚
涂亚斌
佟杰
田丽红
蔡雪辉
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
6
原文传递
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
统计分析
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