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DHAV-3弱毒活疫苗株(HB80株)与野毒株鉴别检测的RT-PCR-RFLP方法的建立
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作者 傅秋玲 万春和 +13 位作者 焦文龙 韩相敏 程龙飞 陈珍 赖志 陈红梅 梁齐章 江南松 刘荣昌 施少华 陈翠腾 苏敬良 黄瑜 傅光华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期691-696,共6页
为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒... 为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒株与HB80株的反转录聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RTPCR-RFLP)方法。利用该方法检测DHAV-3野毒株和疫苗株,以及DHAV-1、鸭3型星状病毒、H9亚型禽流感病毒、禽坦布苏病毒、鸭瘟病毒、鸭3型腺病毒、鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒,结果显示该方法仅能特异性扩增DHAV-3(包括野毒株和疫苗株)的682 bp片段,且仅DHAV-3野毒株的RT-PCR产物(682 bp片段)能够被Apa I酶切为444 bp和238 bp两个片段。将DHAV-3的RNA 10倍倍比稀释(1.7×10^(6)拷贝/μL~1.7×10^(1)拷贝/μL)后作为模板,利用该方法检测,结果显示该方法能够检出DHAV-3 RNA的最低浓度为170拷贝/μL。重复性结果显示,该方法对3个不同浓度DHAV-3野毒株和HB80株RNA的检测结果均一致。利用该方法和常规RT-PCR方法同时对疑似临床鸭肝炎组织、实验感染DHAV-3野毒株(HB株)和免疫DHAV-3活疫苗株鸭组织等10^(1)份样品检测,结果显示两者检测结果的符合率为100%。本研究首次建立了能特异性鉴别检测DHAV-3野毒株与我国弱毒活疫苗株的RT-PCR-RFLP方法,为我国鸭DHAV-3感染的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭3型甲肝病毒 野毒株 弱毒疫苗株 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法 鉴别
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非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型PCR-RFLP鉴别方法的建立
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作者 孙仁杰 徐慧玲 +6 位作者 孙思琪 柴娟 虞一聪 谢荣辉 李肖梁 赵灵燕 张传亮 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第5期1017-1028,共12页
本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常... 本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常见的9种猪病病毒均无交叉反应。通过该引物扩增获得覆盖B646L基因全长的DNA片段作为检测靶标,结合BmgBⅠ酶切进行RFLP图谱分析,即可实现对B646L基因全序列的快速检测,有效区分ASFV基因Ⅰ型和Ⅱ型,最低检测DNA质量浓度可达到5 pg·mL^(-1)。模拟临床样本的研究结果表明,本方法还能够有效应对实际检测中基因Ⅰ型和Ⅱ型的混合感染。综上,本方法操作简便、准确性高、特异性强、灵敏度高、成本较低,具有良好的应用前景,为基层兽医技术人员开展非洲猪瘟疫情的监测和流行病学研究提供了一种新方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 基因Ⅰ型 基因Ⅱ型
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一种鉴别山豆根的PCR-RFLP方法研究
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作者 肖阳央 林锦锋 +3 位作者 张金聚 黄国凯 陆佳 刘潇潇 《中国药事》 2025年第9期1027-1037,共11页
目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化... 目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化PCR-RFLP反应体系和程序,进行退火温度、反应循环数、仪器品牌、样品DNA模板量、酶切反应体系的方法学考察。结果:山豆根和混伪品苦参的ITS2序列具有明显差异,山豆根序列有1个关键差异性位点可被限制性内切酶BamHI识别和酶切。经PCR-RFLP反应后,山豆根在200~300 bp附近有2条条带,混伪品苦参无条带。其中,最适退火温度为58℃,最适循环次数为35次。结论:建立了有效区分山豆根和混伪品苦参的PCR-RFLP方法。 展开更多
关键词 山豆根 苦参 ITS2 BamHI 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析
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中药材地骨皮PCR-RFLP鉴别方法研究
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作者 王庆 董文静 +3 位作者 张美 齐喜红 张宇欣 胡寒雪 《中国药事》 2025年第3期317-326,共10页
目的:建立中药材地骨皮聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法,有效区分地骨皮正伪品,保障其用药安全。方法:运用SnapGene软件对地骨皮正品来源中国枸杞(Lycium chinense)和宁夏枸杞(Lycium barbarum),伪品来源鹅绒藤(... 目的:建立中药材地骨皮聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法,有效区分地骨皮正伪品,保障其用药安全。方法:运用SnapGene软件对地骨皮正品来源中国枸杞(Lycium chinense)和宁夏枸杞(Lycium barbarum),伪品来源鹅绒藤(Cynanchum chinense)、黑果枸杞(Lycium ruthenicum)、香加皮(Periploca sepium)的ITS序列进行比对分析,筛选出差异限制性内切酶位点Eag I,利用Eag I对ITS序列PCR扩增产物进行酶切鉴别。主要对药材DNA提取方法,PCR扩增的退火温度、循环数及不同酶的扩增效果,酶切反应时间和酶切底物量进行优化,建立地骨皮PCR-RFLP鉴别方法,并对该方法的稳定性、准确性进行考察。结果:药材DNA适宜提取方法为试剂盒法,PCR扩增适宜退火温度为67℃、适宜循环数为35。Eag I酶切反应适宜底物量为25μL、温度为37℃、反应30min,地骨皮正品PCR扩增产物可被酶切产生酶切条带,而地骨皮伪品PCR扩增产物不能被酶切。结论:研究建立了地骨皮正伪品的PCR-RFLP鉴别方法,可为地骨皮市场流通鉴别提供技术支撑。 展开更多
关键词 地骨皮 正品药材 伪品 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 鉴别方法
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结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP分型方法的建立 被引量:1
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作者 徐啊慧 冯彩彩 +6 位作者 丰山旺 赵立卓 齐闻新 张雯 胡苏辉 王天奇 闫文朝 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期829-833,840,共6页
目的建立高效、特异的结肠小袋纤毛虫遗传亚型分析方法。方法选择限制性内切酶ApoI和PflMI对结肠小袋纤毛虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的PCR扩增产物进行酶切分析,建立PCR-RFLP分型方法,利用建立的PCR-RFLP方法对猪源、羊源和豚鼠源临床粪便... 目的建立高效、特异的结肠小袋纤毛虫遗传亚型分析方法。方法选择限制性内切酶ApoI和PflMI对结肠小袋纤毛虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的PCR扩增产物进行酶切分析,建立PCR-RFLP分型方法,利用建立的PCR-RFLP方法对猪源、羊源和豚鼠源临床粪便样品进行遗传亚型分析。结果基于ApoI和PflMI的PCR-RFLP方法可以准确区分结肠小袋纤毛虫遗传变异型A和B,用PflMI可以进一步将遗传变异型B细分为B-c和B-t两个亚型。与镜检和测序结果比较,建立的PCR-RFLP方法具有良好的特异性和更高的灵敏性,不仅可以鉴定临床样品中结肠小袋纤毛虫单个亚型,而且可以鉴别单个样品中结肠小袋纤毛虫多个亚型的混合感染。结论本研究成功建立了结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP方法,可用于结肠小袋纤毛虫遗传多态性鉴定和分子流行病学研究。 展开更多
关键词 结肠小袋纤毛虫 pcr-rflp分析 豚鼠
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利用PCR-RFLP方法快速鉴别中国牛蒡属药用植物
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作者 黄彦昌 宋跃岳 +6 位作者 许亮 郑汉 董玉玮 张娜 胡传银 窦德强 康廷国 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第12期80-83,I0021,共5页
目的随着近十几年来国内学者对牛蒡属药用植物研究的深入,中国牛蒡属植物鉴定需要一种快速、准确的分子鉴别手段。因此研究拟通过利用聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length pol... 目的随着近十几年来国内学者对牛蒡属药用植物研究的深入,中国牛蒡属植物鉴定需要一种快速、准确的分子鉴别手段。因此研究拟通过利用聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length polymorphism,PCR-RFLP)建立一种快速鉴定中国牛蒡属药用植物的方法。方法通过对两种中国牛蒡属药用植物牛蒡与毛头牛蒡常用鉴定DNA条形码进行限制性核酸内切酶图谱分析,找到牛蒡在内源转录间隔区1(internal transcribed spacer-1,ITS1)片段中有一个单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphism,SNP)位点,正好为BsaAⅠ酶(YAC/GTR)的酶切位点,根据该酶切位点,设计引物对目标片段进行扩增。另外建立PCR体系:95℃预变性5min,循环反应40次(90℃20s,60℃20s,72℃20s),72℃延伸5min,4℃保温。建立限制性内切酶BsaAⅠ酶切体系,制作琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果电泳结果表明在经过BsaAⅠ酶切后牛蒡将会产生长度分别为101bp与125bp的短条带,而毛头牛蒡未被切开仍为226bp的长条带,成功将两种药用植物区分开。该方法简单、快速、准确,满足日常对中国牛蒡属植物的鉴定。结论该实验通过从牛蒡与毛头牛蒡的ITS1序列入手,利用PCR-RFLP技术首次完成了对两种植物的鉴别研究,建立了中国牛蒡属植物的PCR-RFLP鉴别方法。 展开更多
关键词 牛蒡 毛头牛蒡 鉴别 pcr-rflp
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基于DNA条形码和PCR-RFLP技术的进口紫草ITS2序列特征研究 被引量:2
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作者 刘杰 戴胜云 +6 位作者 谷海媛 乔菲 连超杰 过立农 郑健 马双成 米加 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期750-755,共6页
目的:基于DNA条形码和PCR-RFLP技术研究进口紫草ITS2序列的特征,为市场紫草药材和饮片的质量控制与真伪鉴别提供参考依据。方法:选用ITS2区域作为对进口紫草和紫草对照药材进行比较、鉴定的DNA条形码序列,并基于DNA条形码和PCR-RFLP技... 目的:基于DNA条形码和PCR-RFLP技术研究进口紫草ITS2序列的特征,为市场紫草药材和饮片的质量控制与真伪鉴别提供参考依据。方法:选用ITS2区域作为对进口紫草和紫草对照药材进行比较、鉴定的DNA条形码序列,并基于DNA条形码和PCR-RFLP技术比较不同来源进口紫草的ITS2序列与紫草对照药材的异同。结果:39份进口紫草样品经限制性内切酶AluI酶切后,其产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,仅DH3在500 bp左右有条带,而在100~300 bp无条带,其余样品均在100~300 bp有2条或3条明显条带;进口紫草样品与紫草对照药材的ITS2序列进行比对,其中样品DH3与紫草对照药材的碱基差异最多,有15个碱基差异,样品F2与紫草对照药材的ITS2序列一致,其他进口紫草样品与紫草对照药材的碱基差异为1~9个碱基;从聚类结果中可以看出进口紫草样品DH3与其他进口紫草样品和紫草对照药材均明显区分,独自为一枝,而与紫草对照药材共同聚为一枝且支持率≥50%的样品共有14个。结论:选用ITS2区域,基于DNA条形码和PCR-RFLP技术,比较了进口紫草与紫草对照药材ITS2序列的异同,为紫草药材及饮片的有效鉴定提供参考依据,为紫草药材的市场监管提供有力保障。 展开更多
关键词 进口紫草 内部转录间隔区2(ITS2) DNA条形码 限制性内切酶 限制性片段长度多态性聚合酶链反应
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千里香杂合度PCR-RFLP快速评估方法的建立
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作者 王博铖 陈梓媛 +3 位作者 华中一 田慧 谢文波 袁媛 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期29-34,共6页
目的:建立一种快速评估千里香种质材料杂合度的方法,为制定千里香的优异种质繁育策略和促进种质创新提供依据。方法:以65株千里香重测序数据为基础,检测并筛选单核苷酸多态性(SNPs),利用其中20个SNP位点,通过自编脚本将其转化为限制性... 目的:建立一种快速评估千里香种质材料杂合度的方法,为制定千里香的优异种质繁育策略和促进种质创新提供依据。方法:以65株千里香重测序数据为基础,检测并筛选单核苷酸多态性(SNPs),利用其中20个SNP位点,通过自编脚本将其转化为限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)标记;采用聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)法对12份千里香种质的20个RFLP标记进行检测,根据RFLP标记位点酶切片段数目计算千里香种质的杂合度;采用plink软件计算12份千里香种质的全基因组杂合度,并比较不同种质杂合度评估方法得到的结果。结果:PCR-RFLP法和基因组重测序法计算的杂合度间差异无统计学意义。利用PCR-RFLP法筛选获得了8份杂合度<30%的种质材料,利用基因组重测序法筛选获得9份杂合度<30%的种质材料,2种方法计算杂合度均<30%的种质材料共7份。结论:该文建立了千里香种质杂合度评估的PCR-RFLP法,其精确度为87.5%,准确率为77.8%,该法可为其他药用植物种质杂合度评估方法研究提供借鉴。 展开更多
关键词 千里香 聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性(pcr-rflp) 单核苷酸多态性(SNPs) 杂合度 全基因组重测序
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一种基于线粒体COI PCR-RFLP单酶切快速鉴定4种巨蛎属牡蛎的方法
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作者 崔中望 于诗奇 +1 位作者 缪雄平 阙华勇 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期68-73,共6页
本文报道了一种基于线粒体细胞色素氧化酶亚基I(mt COI)基因序列PCR-RFLP单酶切的牡蛎物种鉴定方法。本方法可快速鉴定福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)、香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和近江牡蛎... 本文报道了一种基于线粒体细胞色素氧化酶亚基I(mt COI)基因序列PCR-RFLP单酶切的牡蛎物种鉴定方法。本方法可快速鉴定福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)、香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)等中国沿海常见的4种巨蛎属(Crassostrea)牡蛎。该方法以甲基转移酶(Msp I)作为限制性内切酶,对4种巨蛎属牡蛎的线粒体DNA COI扩增序列进行酶切,以得到的特异性条带为依据进行物种鉴定。本方法的鉴定结果与COI测序方法的鉴定结果一致,并且筛选出的单一的限制性内切酶Msp I在4种牡蛎的COI序列中不存在酶切位点的突变,准确率达到100%,能够为巨蛎属牡蛎的物种鉴别提供简便可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 巨蛎属(Crassostrea)牡蛎 线粒体COI pcr-rflp
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香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别 被引量:3
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作者 刁晓微 刘亚男 +3 位作者 金艳 蒋超 赵玉洋 袁媛 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期42-47,共6页
目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法快速鉴别香加皮与其混淆品五加皮、地骨皮,避免因基原混乱影响用药安全。方法:从CGIR数据库获取的香加皮DSS标记序列,对香加皮DSS序列进行酶切位点分析,筛选香加皮与五加皮、... 目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法快速鉴别香加皮与其混淆品五加皮、地骨皮,避免因基原混乱影响用药安全。方法:从CGIR数据库获取的香加皮DSS标记序列,对香加皮DSS序列进行酶切位点分析,筛选香加皮与五加皮、地骨皮间差异位点,选择香加皮的特异性酶切位点Cla I,设计PCR-RFLP反应引物,对影响PCR-RFLP反应的退火温度、循环数、Taq酶、不同型号PCR仪、酶切时间等条件进行考察。利用建立的PCR-RFLP鉴别方法对不同产地香加皮与五加皮、地骨皮进行适用性考察。结果:在退火温度59℃、循环数为40个时,香加皮与五加皮、地骨皮样品经过特异性引物进行PCR扩增后,可出现清晰明亮的片段,酶切时间30 min,香加皮药材及其基原物种均可产生约140 bp和290 bp的目的片段,而2种混淆品五加皮和地骨皮药材及其基原物种只在250~500 bp有一条约430 bp的目的片段。该方法能对香加皮及其混淆品五加皮、地骨皮进行准确鉴别。结论:建立了香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别方法,稳定性好、灵敏度高、适用性好,为香加皮与五加皮、地骨皮的质量控制提供参考。 展开更多
关键词 香加皮 五加皮 地骨皮 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 分子鉴定
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Characterization of Bulinus Snails in Sô-Ava and Azowlissè, Two Localities in Southern Benin, Using PCR-RFLP
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作者 Elokou Alabi Codjo Gaston Ouikoun +4 位作者 Halfane Lehmane Haziz Sina Michele Sezonlin Adolphe Adjanohoun Lamine Baba-Moussa 《Open Journal of Ecology》 2024年第12期938-949,共12页
Schistosomiasis is a public health concern in Benin. Freshwater snails of the genus Bulinus serve as intermediate hosts for schistosomes, trematode parasites responsible for bilharzia. The urinary form, caused by Schi... Schistosomiasis is a public health concern in Benin. Freshwater snails of the genus Bulinus serve as intermediate hosts for schistosomes, trematode parasites responsible for bilharzia. The urinary form, caused by Schistosoma haematobium, is the most widespread and is transmitted to humans by these mollusks, with Bulinus truncatus and Bulinus globosus being the most important species. Effective strategies to combat the transmission of these parasites require a prior understanding of the molecular characterization of Bulinus snails. For this purpose, 293 Bulinus snails were collected and morphologically identified from two localities in southern Benin, Sô-Ava and Azowlissè. The snails were preserved in absolute alcohol. To achieve the set objectives, DNA was extracted from the collected biological material, and SSU gene fragments were amplified. Using PCR-RFLP, the amplified fragments were digested with the restriction endonucleases HaeIII, HinfI, and DdeI to perform molecular characterization. In this study, 80 individuals of B. globosus and 10 of B. truncatus were subjected to molecular analysis. The PCR-RFLP profiles showed bands of different sizes for the Bulinus species when analyzed with the three endonucleases using the SSU molecular marker. PCR-RFLP analysis revealed that the snails belonged to the freshwater genus Bulinus, including Bulinus globosus and B. truncatus, based on reference profiles from studies conducted in Nigeria, which enabled precise identification of these gastropods. This study provided initial insights, although still incomplete, into the molecular diversity of these species. 展开更多
关键词 Bulinus globosus Truncatus Molecular Diversity pcr-rflp BENIN
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青海省2例锡兰钩虫的PCR-RFLP鉴定
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作者 王珍珍 吴玛莉 +4 位作者 朵红 彭必露 铁成 俄日姐 冯凯 《医学动物防制》 2024年第10期937-940,945,共5页
目的为了解青海省犬科动物流行的钩虫种类,为青藏高原地区钩虫的流行分布及种群进化研究提供依据。方法2014—2016年在青海省达日县和兴海县分别收集犬科动物粪便样本,洗脱获取粪便表面动物细胞,通过PCR扩增和测序对粪便标本溯源,以饱... 目的为了解青海省犬科动物流行的钩虫种类,为青藏高原地区钩虫的流行分布及种群进化研究提供依据。方法2014—2016年在青海省达日县和兴海县分别收集犬科动物粪便样本,洗脱获取粪便表面动物细胞,通过PCR扩增和测序对粪便标本溯源,以饱和蔗糖水漂浮法进行粪便虫卵检查,收集虫卵提取DNA,以聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法进行虫种鉴定。结果通过动物粪便溯源试验,获得动物线粒体D-loop区域长度为372bp的基因片段,运用基本局部比对搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)分析显示达日县和兴海县动物粪便标本来源分别为家犬和红狐;虫卵内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)的PCR扩增,获得长度约为544bp的特异性电泳条带,PCR产物经限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ的酶切反应显示特异性的酶切、电泳条带,两个钩虫样本均被鉴定为锡兰钩虫。结论锡兰钩虫首次在青藏高原地区报道,并在野生红狐体内被发现,有一定的生物学意义。 展开更多
关键词 锡兰钩虫 鉴定 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 青海省 犬科动物
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IGF2基因PCR-RFLP多态性与脂肪沉积相关性状的关联分析 被引量:52
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作者 刘桂兰 蒋思文 +2 位作者 熊远著 郑嵘 屈彦纯 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1107-1112,共6页
胰岛素样生长因子 2在胎儿生长发育、肿瘤细胞增殖、肌肉生长等方面具有重要的调控作用 ,是影响猪瘦肉量的主要候选基因。采用PCR RFLP技术 ,分析了IGF2基因第 8内含子部分片段在猪资源家系群体中的NciⅠ酶切片段多态性分布。IGF2基因... 胰岛素样生长因子 2在胎儿生长发育、肿瘤细胞增殖、肌肉生长等方面具有重要的调控作用 ,是影响猪瘦肉量的主要候选基因。采用PCR RFLP技术 ,分析了IGF2基因第 8内含子部分片段在猪资源家系群体中的NciⅠ酶切片段多态性分布。IGF2基因该片段具有两个NciⅠ酶切位点 (切点位于第 8内含子 ,分别记录为位点A和位点B) ,两位点在资源家系中均具有多态性。IGF2基因B位点酶切未突变个体均比酶切突变的个体背膘薄 18 2 8% (P<0 0 1) ,肥肉率低 2 2 4 3% (P <0 0 1) ,瘦肉率高 8 71% (P <0 0 1) ,位点A具有相同的影响趋势。在该研究群体中 ,IGF2基因发挥作用的方式主要为加性效应 。 展开更多
关键词 IGF2基因 pcr-rflp 背膘厚
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小梅山、中梅山及大约克猪的SLA-DQB基因外显子2 PCR-RFLP多态性分析 被引量:46
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作者 方美英 胡晓湘 +1 位作者 李宁 吴常信 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第8期685-687,共3页
采用限制性内切核酸酶RsaⅠ对中国地方猪种小梅山、中梅山及国外猪种大约克SLA DQB基因外显子 2的2 73bp扩增产物进行多态性分析。小梅山猪酶切后出现两种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB) ;中梅山猪中出现 4种基... 采用限制性内切核酸酶RsaⅠ对中国地方猪种小梅山、中梅山及国外猪种大约克SLA DQB基因外显子 2的2 73bp扩增产物进行多态性分析。小梅山猪酶切后出现两种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB) ;中梅山猪中出现 4种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB)、132bp 114bp 2 7bp(CC)、2 4 6bp 132bp 84bp 30bp 2 7bp(AB) ;大约克猪中出现 5种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB)、132bp 114bp 2 7bp(CC)、2 4 6bp 132bp 84bp 30bp 2 7bp(AB)、2 73bp 2 4 6bp 2 7bp(AD)。分析发现 ,SLA DQB基因外显子 2的 11、94和 12 4位碱基表现出多态性并在 3个猪种中检测到A、B、C和D 4个等位基因 ;χ2 适合性检验结果表明 ,小梅山、中梅山及大约克SLA DQB基因外显子 2在RsaⅠ酶切位点已经达到了Hardy 展开更多
关键词 小梅山 中梅山 大约克猪 SLA-DQB基因 外显子2 pcr-rflp多态性分析 中国地方猪种
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我国南方常见的6种寡毛实蝇PCR-RFLP快速鉴定研究 被引量:24
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作者 吴佳教 梁帆 +2 位作者 胡学难 赵菊鹏 梁广勤 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第5期770-773,共4页
 应用PCR-RFLP技术,对我国南方发生和诱捕到的6种寡毛实蝇开展了快速鉴定方法研究,结果表明,设计出的2组引物对6种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片断大小分别约为350bp和450bp。用限制性内切酶MSEI和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,...  应用PCR-RFLP技术,对我国南方发生和诱捕到的6种寡毛实蝇开展了快速鉴定方法研究,结果表明,设计出的2组引物对6种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片断大小分别约为350bp和450bp。用限制性内切酶MSEI和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,得到的酶切位点可将供试的6种实蝇区分开来。该方法不受供试实蝇食物源的影响,对各种虫态(卵、幼虫、蛹)和不同性别的成虫均适用,可用于实蝇的快速鉴定。 展开更多
关键词 实蝇 寡毛实蝇 pcr-rflp 快速鉴定 南方地区 农业害虫
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药用植物束花石斛、流苏石斛及其形态相似种的PCR-RFLP鉴别研究 被引量:44
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作者 张婷 徐珞珊 +3 位作者 王峥涛 周开亚 张宁 史永峰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期728-733,共6页
目的建立简易的采用rDNAITS区作为分子标记对中药石斛的基源植物进行分子鉴定的技术。方法用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法获得ITS片段的限制性图谱。束花石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用ClaI和ApaLI酶切,流苏石... 目的建立简易的采用rDNAITS区作为分子标记对中药石斛的基源植物进行分子鉴定的技术。方法用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法获得ITS片段的限制性图谱。束花石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用ClaI和ApaLI酶切,流苏石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用SphI酶切。结果根据预测的PCRRFLP图谱,可以鉴别药用植物束花石斛、流苏石斛及它们的形态相似种。用这种方法鉴定了市场上收集的25件商品束花石斛、流苏石斛新鲜药材的原植物。结论rDNAITS的PCRRFLP可用于鉴定石斛药材的原植物,具有简便、费用低的优点。 展开更多
关键词 石斛 束花石斛 流苏石斛 ITS区 pcr-rflp
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细胞色素B基因PCR-RFLP鉴定阿胶原料 被引量:18
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作者 汪小龙 潘洁 +6 位作者 王师 万俊芬 包振民 解锡军 尤金花 解福生 师秀梅 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期645-648,共4页
用细胞色素B基因PCR-RFLP方法对阿胶原料进行鉴定。提取马、牛、驴3种动物干皮DNA,PCR扩增细胞色素B基因保守区域的359 bp片段,用限制性内切酶HinfⅠ和HaeⅢ酶切,采用琼脂糖凝胶电泳获得了DNA指纹图谱,根据获得的DNA指纹图谱判定样品所... 用细胞色素B基因PCR-RFLP方法对阿胶原料进行鉴定。提取马、牛、驴3种动物干皮DNA,PCR扩增细胞色素B基因保守区域的359 bp片段,用限制性内切酶HinfⅠ和HaeⅢ酶切,采用琼脂糖凝胶电泳获得了DNA指纹图谱,根据获得的DNA指纹图谱判定样品所属物种。该方法不仅简便,还可以100%准确鉴定阿胶原料皮样所属物种来源,适合作为常规技术应用于阿胶原料鉴定。 展开更多
关键词 物种鉴定 阿胶 CYT B pcr-rflp
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我国主要地方绵羊品种mtDNA D-loop区PCR-RFLP研究 被引量:25
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作者 李祥龙 张增利 +3 位作者 巩元芳 刘铮铸 贾青 王立泽 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期165-170,共6页
利用5种限制性内切酶(HinfⅠ,MspⅠ,Sau3AⅠ,XspⅠ,TaqⅠ),采用PCRRFLP技术研究了我国9个地方绵羊品种以及2个引入品种共计83只绵羊个体线粒体DNADloop区的多态性。结果表明,我国主要地方绵羊品种线粒体DNADloop区存在两种基本单体型,... 利用5种限制性内切酶(HinfⅠ,MspⅠ,Sau3AⅠ,XspⅠ,TaqⅠ),采用PCRRFLP技术研究了我国9个地方绵羊品种以及2个引入品种共计83只绵羊个体线粒体DNADloop区的多态性。结果表明,我国主要地方绵羊品种线粒体DNADloop区存在两种基本单体型,提示我国主要地方绵羊品种起源于两个母系祖先。线粒体DNADloop区多态度为0.0421%,说明我国地方绵羊品种线粒体DNA多态度较为贫乏。 展开更多
关键词 地方绵羊品种 线粒体DNA D-LOOP pcr-rflp
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猪MyoG基因的PCR-RFLP多态性分析 被引量:19
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作者 林万华 高军 +5 位作者 陈克飞 丁能水 艾华水 郭源梅 李琳 黄路生 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期22-26,共5页
以杜洛克、长白、大约克、南昌白、二花脸、梅山猪、玉山黑猪、乐平花猪、金华两头乌及上高两头乌等中外10个猪种共计561头猪为研究材料,采用3对引物(PCR1、PCR2、PCR3)分别扩增猪肌细胞生成素(MyoG)基因的不同区域,扩增产物经限制性核... 以杜洛克、长白、大约克、南昌白、二花脸、梅山猪、玉山黑猪、乐平花猪、金华两头乌及上高两头乌等中外10个猪种共计561头猪为研究材料,采用3对引物(PCR1、PCR2、PCR3)分别扩增猪肌细胞生成素(MyoG)基因的不同区域,扩增产物经限制性核酸内切酶MspⅠ酶切后发现:(1)在PCR1MspⅠ-RFLP位点上,外来品种杜洛克、长白、大约克及培育品种南昌白中极大多数个体表现为AA型,个别为BB型;而6个中国地方猪种除乐平花猪外均以BB型居多。(2)在PCR2MspⅠ-RFLP位点上,6个中国地方猪种除一头玉山黑猪表现为MN型外,其余均为MM型;而外来品种以NN型占大多数,培育品种南昌白更趋向于外来品种。(3)在PCR3MspⅠ-RFLP位点上,所有猪种均可得到扩增产物,但无MspⅠ酶切位点。(4)在梅山猪及与其亲缘关系较近的二花脸猪中,没有发现Soumillion等(1997)报道的梅山猪特异性MspⅠ多态性酶切位点。 展开更多
关键词 MYOG基因 pcr-rflp多态性 遗传多态性 肌细胞生成素基因
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应用RAPD标记和细胞质基因组PCR-RFLP技术研究大花蕙兰的遗传多样性 被引量:16
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作者 甘娜 谭向红 +2 位作者 陈其兵 魏育明 郑有良 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期349-355,共7页
利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503~0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,R... 利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503~0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,RAPD标记能将所有材料区分开。在7个叶绿体基因组(cpDNA)的PCRRFLP分析中,6个标记(87.5%)可扩增出1至多条清晰的谱带;扩增产物经7种限制性内切酶消化后,6个标记的19种引物/酶组合共检测到53条DNA片段,其中多态性片段有37条,占69.8%;材料间遗传相似系数变化范围为0.571~0.949,平均值为0.766。在8个线粒体基因组(mtDNA)的PCRRFLP标记分析中,只有3个(37.5%)标记能得到1条清晰的谱带;利用7种限制性内切酶对3个标记的扩增产物消化后,在10种标记/酶组合中,共检测到33条酶切片段,其中21条(63.6%)具有多态性;遗传相似系数为0.634~1.000,平均0.829。这些结果表明,RAPD标记揭示的大花蕙兰遗传多样性最高,其次为cpDNAPCRRFLP标记,而mtDNAPCRRFLP标记揭示的遗传多样性最低。 展开更多
关键词 大花蕙兰 RAPD pcr-rflp CPDNA MTDNA
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