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DHAV-3弱毒活疫苗株(HB80株)与野毒株鉴别检测的RT-PCR-RFLP方法的建立
1
作者 傅秋玲 万春和 +13 位作者 焦文龙 韩相敏 程龙飞 陈珍 赖志 陈红梅 梁齐章 江南松 刘荣昌 施少华 陈翠腾 苏敬良 黄瑜 傅光华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期691-696,共6页
为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒... 为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒株与HB80株的反转录聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RTPCR-RFLP)方法。利用该方法检测DHAV-3野毒株和疫苗株,以及DHAV-1、鸭3型星状病毒、H9亚型禽流感病毒、禽坦布苏病毒、鸭瘟病毒、鸭3型腺病毒、鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒,结果显示该方法仅能特异性扩增DHAV-3(包括野毒株和疫苗株)的682 bp片段,且仅DHAV-3野毒株的RT-PCR产物(682 bp片段)能够被Apa I酶切为444 bp和238 bp两个片段。将DHAV-3的RNA 10倍倍比稀释(1.7×10^(6)拷贝/μL~1.7×10^(1)拷贝/μL)后作为模板,利用该方法检测,结果显示该方法能够检出DHAV-3 RNA的最低浓度为170拷贝/μL。重复性结果显示,该方法对3个不同浓度DHAV-3野毒株和HB80株RNA的检测结果均一致。利用该方法和常规RT-PCR方法同时对疑似临床鸭肝炎组织、实验感染DHAV-3野毒株(HB株)和免疫DHAV-3活疫苗株鸭组织等10^(1)份样品检测,结果显示两者检测结果的符合率为100%。本研究首次建立了能特异性鉴别检测DHAV-3野毒株与我国弱毒活疫苗株的RT-PCR-RFLP方法,为我国鸭DHAV-3感染的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭3型甲肝病毒 野毒株 弱毒疫苗株 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法 鉴别
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改良型PCR-RFLP法快速检测降糖药物基因多态性组合
2
作者 翟振谦 饶梓雯 +3 位作者 孙良平 李力 龙玉舟 欧阳东成 《实验室检测》 2025年第22期13-15,共3页
目的建立一种聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的改良方法,实现与降糖药物疗效及不良反应相关的基因多态性快速检测。方法以2型糖尿病(type 2 diabe... 目的建立一种聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的改良方法,实现与降糖药物疗效及不良反应相关的基因多态性快速检测。方法以2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者及健康对照的外周血DNA为研究对象,设计覆盖SLC22A1(rs628031、rs12208357)、SLC47A1(rs2289669)、KCNJ11[rs5219(E23K)]、ABCC8、CYP2C9(^(*)2、^(*)3)和TCF7L2(rs7903146)等位点的多重引物体系,引入错配引物并结合顺序/并联酶切,优化扩增与条带判读。结果建立的体系最低DNA投料量5~10 ng,特异性>98%,批内/批间RSD<5%,与Sanger测序一致率达99%以上。单个96孔板可完成约80例检测,单样本成本低于测序的20%。初步临床分析提示部分基因型与二甲双胍或磺脲类疗效存在差异。结论改良型多重PCR-RFLP体系可在单管或分池流程下实现多位点联合判型,方法学性能稳定、成本可控;可作为测序技术的筛查性补充工具,用于降糖药物相关基因多态性检测。 展开更多
关键词 改良型pcr-rflp 降糖药物 基因多态性 个体化用药 2型糖尿病
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非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型PCR-RFLP鉴别方法的建立
3
作者 孙仁杰 徐慧玲 +6 位作者 孙思琪 柴娟 虞一聪 谢荣辉 李肖梁 赵灵燕 张传亮 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第5期1017-1028,共12页
本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常... 本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常见的9种猪病病毒均无交叉反应。通过该引物扩增获得覆盖B646L基因全长的DNA片段作为检测靶标,结合BmgBⅠ酶切进行RFLP图谱分析,即可实现对B646L基因全序列的快速检测,有效区分ASFV基因Ⅰ型和Ⅱ型,最低检测DNA质量浓度可达到5 pg·mL^(-1)。模拟临床样本的研究结果表明,本方法还能够有效应对实际检测中基因Ⅰ型和Ⅱ型的混合感染。综上,本方法操作简便、准确性高、特异性强、灵敏度高、成本较低,具有良好的应用前景,为基层兽医技术人员开展非洲猪瘟疫情的监测和流行病学研究提供了一种新方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 基因Ⅰ型 基因Ⅱ型
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一种鉴别山豆根的PCR-RFLP方法研究
4
作者 肖阳央 林锦锋 +3 位作者 张金聚 黄国凯 陆佳 刘潇潇 《中国药事》 2025年第9期1027-1037,共11页
目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化... 目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化PCR-RFLP反应体系和程序,进行退火温度、反应循环数、仪器品牌、样品DNA模板量、酶切反应体系的方法学考察。结果:山豆根和混伪品苦参的ITS2序列具有明显差异,山豆根序列有1个关键差异性位点可被限制性内切酶BamHI识别和酶切。经PCR-RFLP反应后,山豆根在200~300 bp附近有2条条带,混伪品苦参无条带。其中,最适退火温度为58℃,最适循环次数为35次。结论:建立了有效区分山豆根和混伪品苦参的PCR-RFLP方法。 展开更多
关键词 山豆根 苦参 ITS2 BamHI 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析
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IGF2基因PCR-RFLP多态性与脂肪沉积相关性状的关联分析 被引量：52
5
作者 刘桂兰 蒋思文 +2 位作者 熊远著 郑嵘 屈彦纯 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1107-1112,共6页
胰岛素样生长因子 2在胎儿生长发育、肿瘤细胞增殖、肌肉生长等方面具有重要的调控作用 ,是影响猪瘦肉量的主要候选基因。采用PCR RFLP技术 ,分析了IGF2基因第 8内含子部分片段在猪资源家系群体中的NciⅠ酶切片段多态性分布。IGF2基因... 胰岛素样生长因子 2在胎儿生长发育、肿瘤细胞增殖、肌肉生长等方面具有重要的调控作用 ,是影响猪瘦肉量的主要候选基因。采用PCR RFLP技术 ,分析了IGF2基因第 8内含子部分片段在猪资源家系群体中的NciⅠ酶切片段多态性分布。IGF2基因该片段具有两个NciⅠ酶切位点 (切点位于第 8内含子 ,分别记录为位点A和位点B) ,两位点在资源家系中均具有多态性。IGF2基因B位点酶切未突变个体均比酶切突变的个体背膘薄 18 2 8% (P<0 0 1) ,肥肉率低 2 2 4 3% (P <0 0 1) ,瘦肉率高 8 71% (P <0 0 1) ,位点A具有相同的影响趋势。在该研究群体中 ,IGF2基因发挥作用的方式主要为加性效应 。 展开更多
关键词 IGF2基因 pcr-rflp 背膘厚 猪
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小梅山、中梅山及大约克猪的SLA-DQB基因外显子2 PCR-RFLP多态性分析 被引量：46
6
作者 方美英 胡晓湘 +1 位作者 李宁 吴常信 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第8期685-687,共3页
采用限制性内切核酸酶RsaⅠ对中国地方猪种小梅山、中梅山及国外猪种大约克SLA DQB基因外显子 2的2 73bp扩增产物进行多态性分析。小梅山猪酶切后出现两种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB) ;中梅山猪中出现 4种基... 采用限制性内切核酸酶RsaⅠ对中国地方猪种小梅山、中梅山及国外猪种大约克SLA DQB基因外显子 2的2 73bp扩增产物进行多态性分析。小梅山猪酶切后出现两种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB) ;中梅山猪中出现 4种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB)、132bp 114bp 2 7bp(CC)、2 4 6bp 132bp 84bp 30bp 2 7bp(AB) ;大约克猪中出现 5种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB)、132bp 114bp 2 7bp(CC)、2 4 6bp 132bp 84bp 30bp 2 7bp(AB)、2 73bp 2 4 6bp 2 7bp(AD)。分析发现 ,SLA DQB基因外显子 2的 11、94和 12 4位碱基表现出多态性并在 3个猪种中检测到A、B、C和D 4个等位基因 ;χ2 适合性检验结果表明 ,小梅山、中梅山及大约克SLA DQB基因外显子 2在RsaⅠ酶切位点已经达到了Hardy 展开更多
关键词 小梅山 中梅山 大约克猪 SLA-DQB基因 外显子2 pcr-rflp多态性分析 中国地方猪种
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我国南方常见的6种寡毛实蝇PCR-RFLP快速鉴定研究 被引量：24
7
作者 吴佳教 梁帆 +2 位作者 胡学难 赵菊鹏 梁广勤 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第5期770-773,共4页
　应用PCR-RFLP技术,对我国南方发生和诱捕到的6种寡毛实蝇开展了快速鉴定方法研究,结果表明,设计出的2组引物对6种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片断大小分别约为350bp和450bp。用限制性内切酶MSEI和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,... 　应用PCR-RFLP技术,对我国南方发生和诱捕到的6种寡毛实蝇开展了快速鉴定方法研究,结果表明,设计出的2组引物对6种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片断大小分别约为350bp和450bp。用限制性内切酶MSEI和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,得到的酶切位点可将供试的6种实蝇区分开来。该方法不受供试实蝇食物源的影响,对各种虫态(卵、幼虫、蛹)和不同性别的成虫均适用,可用于实蝇的快速鉴定。 展开更多
关键词 实蝇 寡毛实蝇 pcr-rflp 快速鉴定 南方地区 农业害虫
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药用植物束花石斛、流苏石斛及其形态相似种的PCR-RFLP鉴别研究 被引量：44
8
作者 张婷 徐珞珊 +3 位作者 王峥涛 周开亚 张宁 史永峰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期728-733,共6页
目的建立简易的采用rDNAITS区作为分子标记对中药石斛的基源植物进行分子鉴定的技术。方法用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法获得ITS片段的限制性图谱。束花石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用ClaI和ApaLI酶切,流苏石... 目的建立简易的采用rDNAITS区作为分子标记对中药石斛的基源植物进行分子鉴定的技术。方法用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法获得ITS片段的限制性图谱。束花石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用ClaI和ApaLI酶切,流苏石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用SphI酶切。结果根据预测的PCRRFLP图谱,可以鉴别药用植物束花石斛、流苏石斛及它们的形态相似种。用这种方法鉴定了市场上收集的25件商品束花石斛、流苏石斛新鲜药材的原植物。结论rDNAITS的PCRRFLP可用于鉴定石斛药材的原植物,具有简便、费用低的优点。 展开更多
关键词 石斛 束花石斛 流苏石斛 ITS区 pcr-rflp
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细胞色素B基因PCR-RFLP鉴定阿胶原料 被引量：18
9
作者 汪小龙 潘洁 +6 位作者 王师 万俊芬 包振民 解锡军 尤金花 解福生 师秀梅 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期645-648,共4页
用细胞色素B基因PCR-RFLP方法对阿胶原料进行鉴定。提取马、牛、驴3种动物干皮DNA,PCR扩增细胞色素B基因保守区域的359 bp片段,用限制性内切酶HinfⅠ和HaeⅢ酶切,采用琼脂糖凝胶电泳获得了DNA指纹图谱,根据获得的DNA指纹图谱判定样品所... 用细胞色素B基因PCR-RFLP方法对阿胶原料进行鉴定。提取马、牛、驴3种动物干皮DNA,PCR扩增细胞色素B基因保守区域的359 bp片段,用限制性内切酶HinfⅠ和HaeⅢ酶切,采用琼脂糖凝胶电泳获得了DNA指纹图谱,根据获得的DNA指纹图谱判定样品所属物种。该方法不仅简便,还可以100%准确鉴定阿胶原料皮样所属物种来源,适合作为常规技术应用于阿胶原料鉴定。 展开更多
关键词 物种鉴定 阿胶 驴 CYT B pcr-rflp
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我国主要地方绵羊品种mtDNA D-loop区PCR-RFLP研究 被引量：25
10
作者 李祥龙 张增利 +3 位作者 巩元芳 刘铮铸 贾青 王立泽 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期165-170,共6页
利用5种限制性内切酶(HinfⅠ,MspⅠ,Sau3AⅠ,XspⅠ,TaqⅠ),采用PCRRFLP技术研究了我国9个地方绵羊品种以及2个引入品种共计83只绵羊个体线粒体DNADloop区的多态性。结果表明,我国主要地方绵羊品种线粒体DNADloop区存在两种基本单体型,... 利用5种限制性内切酶(HinfⅠ,MspⅠ,Sau3AⅠ,XspⅠ,TaqⅠ),采用PCRRFLP技术研究了我国9个地方绵羊品种以及2个引入品种共计83只绵羊个体线粒体DNADloop区的多态性。结果表明,我国主要地方绵羊品种线粒体DNADloop区存在两种基本单体型,提示我国主要地方绵羊品种起源于两个母系祖先。线粒体DNADloop区多态度为0.0421%,说明我国地方绵羊品种线粒体DNA多态度较为贫乏。 展开更多
关键词 地方绵羊品种 线粒体DNA D-LOOP pcr-rflp
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猪MyoG基因的PCR-RFLP多态性分析 被引量：19
11
作者 林万华 高军 +5 位作者 陈克飞 丁能水 艾华水 郭源梅 李琳 黄路生 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期22-26,共5页
以杜洛克、长白、大约克、南昌白、二花脸、梅山猪、玉山黑猪、乐平花猪、金华两头乌及上高两头乌等中外10个猪种共计561头猪为研究材料,采用3对引物(PCR1、PCR2、PCR3)分别扩增猪肌细胞生成素(MyoG)基因的不同区域,扩增产物经限制性核... 以杜洛克、长白、大约克、南昌白、二花脸、梅山猪、玉山黑猪、乐平花猪、金华两头乌及上高两头乌等中外10个猪种共计561头猪为研究材料,采用3对引物(PCR1、PCR2、PCR3)分别扩增猪肌细胞生成素(MyoG)基因的不同区域,扩增产物经限制性核酸内切酶MspⅠ酶切后发现:(1)在PCR1MspⅠ-RFLP位点上,外来品种杜洛克、长白、大约克及培育品种南昌白中极大多数个体表现为AA型,个别为BB型;而6个中国地方猪种除乐平花猪外均以BB型居多。(2)在PCR2MspⅠ-RFLP位点上,6个中国地方猪种除一头玉山黑猪表现为MN型外,其余均为MM型;而外来品种以NN型占大多数,培育品种南昌白更趋向于外来品种。(3)在PCR3MspⅠ-RFLP位点上,所有猪种均可得到扩增产物,但无MspⅠ酶切位点。(4)在梅山猪及与其亲缘关系较近的二花脸猪中,没有发现Soumillion等(1997)报道的梅山猪特异性MspⅠ多态性酶切位点。 展开更多
关键词 猪 MYOG基因 pcr-rflp多态性 遗传多态性 肌细胞生成素基因
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应用RAPD标记和细胞质基因组PCR-RFLP技术研究大花蕙兰的遗传多样性 被引量：16
12
作者 甘娜 谭向红 +2 位作者 陈其兵 魏育明 郑有良 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期349-355,共7页
利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503～0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,R... 利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503～0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,RAPD标记能将所有材料区分开。在7个叶绿体基因组(cpDNA)的PCRRFLP分析中,6个标记(87.5%)可扩增出1至多条清晰的谱带;扩增产物经7种限制性内切酶消化后,6个标记的19种引物/酶组合共检测到53条DNA片段,其中多态性片段有37条,占69.8%;材料间遗传相似系数变化范围为0.571～0.949,平均值为0.766。在8个线粒体基因组(mtDNA)的PCRRFLP标记分析中,只有3个(37.5%)标记能得到1条清晰的谱带;利用7种限制性内切酶对3个标记的扩增产物消化后,在10种标记/酶组合中,共检测到33条酶切片段,其中21条(63.6%)具有多态性;遗传相似系数为0.634～1.000,平均0.829。这些结果表明,RAPD标记揭示的大花蕙兰遗传多样性最高,其次为cpDNAPCRRFLP标记,而mtDNAPCRRFLP标记揭示的遗传多样性最低。 展开更多
关键词 大花蕙兰 RAPD pcr-rflp CPDNA MTDNA
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西安荷斯坦奶牛群5个基因座位遗传多态性的PCR-RFLP分析 被引量：12
13
作者 张润锋 陈宏 +4 位作者 蓝贤勇 田燚 潘传英 胡沈荣 苏利红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期545-549,共5页
应用PCR RFLP方法对西安荷斯坦牛的κcn、βlg、βlg 5′侧翼区、CSN1S2、IGFBP 3 共5 个基因座位进行了多态性分析。结果表明,在西安荷斯坦牛群中,没有发现携带CSN1S2F 等位基因的个体,其多态信息含量为0。κcn基因座位呈现低度多态(PI... 应用PCR RFLP方法对西安荷斯坦牛的κcn、βlg、βlg 5′侧翼区、CSN1S2、IGFBP 3 共5 个基因座位进行了多态性分析。结果表明,在西安荷斯坦牛群中,没有发现携带CSN1S2F 等位基因的个体,其多态信息含量为0。κcn基因座位呈现低度多态(PIC=0 236 6),βlg、βlg 5′侧翼区、IGFBP 3 基因座位的多态信息含量分别为0 316 8、0 368 9、0 443 9,均呈现中度多态。κcn、βlg、βlg 5′侧翼区、IGFBP 3、CSN1S2 基因座位的杂合度和DNA多态度分别为0 274 2、0 394 7、0 487 9、0 489 1、0和0 025 5、0 011 6、0 033 3、0 011 2、0。而且,在西安荷斯坦牛群中,κcn、βlg、βlg 5′侧翼区、IGFBP 3 共4 个基因座位均处于Hardy Weinberg平衡状态,CSN1S2 基因座位处于纯合状态。 展开更多
关键词 pcr-rflp分析 基因座位 遗传多态性 西安 奶牛群 多态信息含量 多态性分析 DNA多态 荷斯坦牛 等位基因 平衡状态 杂合度 纯合
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16种商品海参16S rRNA的PCR-RFLP鉴定方法 被引量：18
14
作者 文菁 胡超群 +1 位作者 张吕平 范嗣刚 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期451-457,共7页
基于570bp左右的线粒体16SrRNA基因片段,利用3种核酸内切酶(DdeI,Hae Ⅲ和Sty Ⅰ)对16种海参PCR产物进行酶切,分别产生10种、5种和5种单倍型,通过单倍型的组合,即能有效区分16种海参的种类。运用此方法对19种商品海参(包括冻品和干品)... 基于570bp左右的线粒体16SrRNA基因片段,利用3种核酸内切酶(DdeI,Hae Ⅲ和Sty Ⅰ)对16种海参PCR产物进行酶切,分别产生10种、5种和5种单倍型,通过单倍型的组合,即能有效区分16种海参的种类。运用此方法对19种商品海参(包括冻品和干品)进行鉴定,结果表明,9种产品属于错误贴标。本研究建立的PCR-RFLP方法方便、有效,可靠,可为海参产品评估、进出口种类鉴定提供实用高效的方法。本研究旨在为市场海参产品贴标情况的评估提供技术支撑。 展开更多
关键词 海参 16S RRNA基因 pcr-rflp 鉴定方法
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三大不同品种马mtDNA Cytb基因PCR-RFLP分析 被引量：16
15
作者 李金莲 石有斐 +1 位作者 布仁其其格 芒来 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期933-938,共6页
用BamHⅠ、TaqⅠ、HaeⅢ、RsaⅠ和HincⅡ5种限制性内切酶通过PCR-RFLP技术检测了包括引入品种、培育品种和地方品种的6个类型(纯血马、三河马、乌珠穆沁马、锡尼河马、乌审马和矮马)共256匹马的mtDNACytb基因部分序列多态性。用8%非变... 用BamHⅠ、TaqⅠ、HaeⅢ、RsaⅠ和HincⅡ5种限制性内切酶通过PCR-RFLP技术检测了包括引入品种、培育品种和地方品种的6个类型(纯血马、三河马、乌珠穆沁马、锡尼河马、乌审马和矮马)共256匹马的mtDNACytb基因部分序列多态性。用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将酶切产物分离,并用银染法显色。结果BamHⅠ和TaqⅠ表现出多态,5种酶共检测到7种态型,归纳为3种单倍型,以单倍型Ⅰ和Ⅲ为主体单倍型,但通过一个特殊的酶型BamHⅠ-B分析推测所研究的马可能起源于一个母系祖先。 展开更多
关键词 限制性内切酶 pcr-rflp 马mtDNA CYTB基因 多态性
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二种大实蝇的PCR-RFLP快速鉴定方法 被引量：14
16
作者 林丽莉 吴佳教 +3 位作者 曾玲 梁广文 胡学难 莫仁浩 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期588-592,共5页
应用PCR-RFLP技术,对我国部分地区发生分布的蜜柑大实蝇和橘大实蝇开展了分子生物学鉴定方法研究。结果表明,利用4组引物对目标实蝇的COⅡ和ITS1基因进行PCR扩增,并借助MnlⅠ,MseⅠ,AseⅠ,DraⅠ和SspⅠ等5种限制性内切酶对扩增产物进行... 应用PCR-RFLP技术,对我国部分地区发生分布的蜜柑大实蝇和橘大实蝇开展了分子生物学鉴定方法研究。结果表明,利用4组引物对目标实蝇的COⅡ和ITS1基因进行PCR扩增,并借助MnlⅠ,MseⅠ,AseⅠ,DraⅠ和SspⅠ等5种限制性内切酶对扩增产物进行酶切,能从多个途径把2种大实蝇区分开。所建立的方法不受目标实蝇食物源、地理来源和标本保存条件的影响,对不同虫态和不同性别的个体均适用,可在生产和检疫实践中对蜜柑大实蝇和橘大实蝇进行快速鉴定。 展开更多
关键词 蜜柑大实蝇 橘大实蝇 pcr-rflp COⅡ ITS1
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PCR-RFLP鉴定隐孢子虫种类研究 被引量：23
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作者 张龙现 蒋金书 +3 位作者 刘群 宁长申 赵金凤 刘红英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期555-559,共5页
为快速、准确鉴别人畜隐孢子虫种类,建立了巢式PCR扩增隐孢子虫18SrRNA基因的特殊区域,扩增片段测序结果表明:安徽牛源分离株(Cryptosporidiummuris)781bp;北京鸡源分离株(C.baileyi)776bp;北京牛源分离株(C.muris)781bp;河南牛源分离株... 为快速、准确鉴别人畜隐孢子虫种类,建立了巢式PCR扩增隐孢子虫18SrRNA基因的特殊区域,扩增片段测序结果表明:安徽牛源分离株(Cryptosporidiummuris)781bp;北京鸡源分离株(C.baileyi)776bp;北京牛源分离株(C.muris)781bp;河南牛源分离株(C.muris)725bp;长春牛源分离株(C.muris)776bp;宁夏鸡源分离株(C.baileyi)725bp,该片段位于18SrRNA全序列271～1103bp之间。使用Ssp 限制性内切酶消化发现C.muris产生418～420bp和305～363bp两个片段,C.baileyi产生544～545bp和185～231bp两个片段。所检测的6个分离株可以显著区分为C.muris和C.baileyi两个种,所建立的PCR-RFLP可以有效鉴别隐孢子虫种类。 展开更多
关键词 隐孢子虫 种类鉴定 pcr-rflp 人兽共患病
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不同猪种IGF2基因PCR-RFLP多态性与部分生长性状相关性分析 被引量：14
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作者 刘鑫 施启顺 +2 位作者 柳小春 黄生强 蒋隽 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期63-66,共4页
以IGF2基因作为控制猪生长性状主基因的候选基因,采用PCR-RFLP方法对7个品种/群体共528头猪进行了NciⅠ酶切位点基因型检测,计算了该位点的基因频率与基因型频率,并对品种间基因型频率进行了x2差异性检验.结合生长性能记录,运用SAS软件... 以IGF2基因作为控制猪生长性状主基因的候选基因,采用PCR-RFLP方法对7个品种/群体共528头猪进行了NciⅠ酶切位点基因型检测,计算了该位点的基因频率与基因型频率,并对品种间基因型频率进行了x2差异性检验.结合生长性能记录,运用SAS软件分析了IGF2不同基因型对生长性状的遗传效应.结果表明:在杜洛克、长白、大白中,AA基因型比BB基因型生长速率快,生长性能指数高4.06%～8.31%,等位基因A对猪的生长具有正效应. 展开更多
关键词 IGF2基因 pcr-rflp 生长性状 相关性分析
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PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究 被引量：8
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作者 陈中义 吴限 +3 位作者 张杰 宋福平 管宇 黄大昉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期398-402,共5页
Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6... Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 苏云金芽孢杆菌 微生物杀虫剂 DNA文库 CRY基因 基因克隆 pcr-rflp 农业害虫 杀虫活性 基因分离
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奶牛乳铁蛋白基因启动子区PCR-RFLP分析与乳房炎的相关性 被引量：12
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作者 张利军 蔡亚非 +3 位作者 刘庆华 宋维龙 李莲 王根林 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第1期87-91,共5页
采用CMT方法检测奶牛的乳房炎发病情况.筛选 90头分别设为对照组(健康奶牛)、隐性乳房炎组 (试验组Ⅰ )和临床乳房炎组(试验组Ⅱ),每组 30头.检测每头奶牛的NAGase活性,并用限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术,检测乳铁蛋白(Lf)基因... 采用CMT方法检测奶牛的乳房炎发病情况.筛选 90头分别设为对照组(健康奶牛)、隐性乳房炎组 (试验组Ⅰ )和临床乳房炎组(试验组Ⅱ),每组 30头.检测每头奶牛的NAGase活性,并用限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术,检测乳铁蛋白(Lf)基因启动子区域的RFLP多态性.结果表明:不同组别的奶牛之间NAGase活性差异显著 (P<0. 01),且Lf基因启动子区域存在RFLP多态性,说明该多态性与乳房炎存在一定关系,可能是奶牛乳房炎的一个分子标记. 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 隐性乳房炎 F基因 pcr-rflp分析 分子标记 多态性 乳铁蛋白 NAG 基因启动子区 相关性
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