A型流感病毒中国分离株PB1-F2基因进化分析 被引量：4

1

作者 黄艳艳 胡北侠 +3 位作者 文心田 曹三杰 徐栋 张秀美 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期2156-2163,共8页

【目的】明确国内鸡源H9N2禽流感病毒(AIV)的PB1-F2基因分子进化特征,并进一步全面了解国内A型流感病毒(IAV)流行株的PB1-F2的流行情况。【方法】对分离自北方发病鸡群中的14株H9N2亚型AIV进行了PB1-F2基因的克隆和序列测定,并从GenBan... 【目的】明确国内鸡源H9N2禽流感病毒(AIV)的PB1-F2基因分子进化特征,并进一步全面了解国内A型流感病毒(IAV)流行株的PB1-F2的流行情况。【方法】对分离自北方发病鸡群中的14株H9N2亚型AIV进行了PB1-F2基因的克隆和序列测定,并从GenBank数据库下载了禽源、猪源和人源H5N1和H9N2亚型AIV、人源和猪源H1N1和H3N2IAV的PB1基因共计337个,系统的对国内不同宿主来源的IAV的PB1-F2基因进行了分子进化分析。【结果】上述IAV的PB1-F2基因形成了6个不同的进化分支。推导的PB1-F2蛋白表现出长度的多态性,因IAV的HA类型和宿主来源的不同,其表达功能性PB1-F2蛋白的比率也存在差异。【结论】本研究明确了国内IAV的PB1-F2基因的系统进化特征,为该基因功能的研究提供了分子流行病学资料。 展开更多

关键词 A型流感病毒 禽流感病毒 pb1-f2 进化分析

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新型甲型H7N9流感病毒PB1-F2蛋白基因进化和变异分析 被引量：5

2

作者 资海荣 李伟 +4 位作者 周丹 李婕 宣杨 郭艳 卫平民 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2014年第4期416-421,共6页

目的：对新型甲型H7N9流感病毒PB1-F2蛋白基因的进化和变异进行分析，为进一步研究致病性禽流感的致病机制和毒力因子奠定基础。方法：从IRD数据库中下载2013年2月19日至2013年10月31日的H7N9流感病毒PBl基因序列63条，运用MEGA5．2．1... 目的：对新型甲型H7N9流感病毒PB1-F2蛋白基因的进化和变异进行分析，为进一步研究致病性禽流感的致病机制和毒力因子奠定基础。方法：从IRD数据库中下载2013年2月19日至2013年10月31日的H7N9流感病毒PBl基因序列63条，运用MEGA5．2．1软件进行序列分析，用邻接法构建基因进化树；通过氨基酸序列分析PB1基因95～367片段的PB1-F2蛋白氨基酸位点变化；应用Excel表格对氨基酸构成进行计算；运用Predictive Analytics Software（PASW）18．0软件对氨基酸构成改变进行统计分析。结果：63株甲型H7N9毒株中有17株毒株的PB1-F2蛋白在其氨基酸序列第25位后发生断裂。新型甲型H7N9的进化主要分为两个系别，系别I主要由完整型PB1-F2蛋白毒株构成，系别Ⅱ主要由52aa截短型PB1-F2蛋白毒株构成。完整型PB1-F2蛋白与截短型PB1-F2蛋白各类氨基酸构成存在差异。结论：H7N9流感毒株中存在着截短型PB1-F2蛋白毒株，并且H7N9流感病毒毒株PB1-F2蛋白断裂位点均在25位氨基酸后，这将成为H7N9流感毒株进化过程中重要的特征。完整型PB1-F2蛋白与截短型PB1-F2蛋白氨基酸构成的差异对于甲型H7N9流感病毒致病性的影响有待进一步研究。 展开更多

关键词 甲型H7N9流感病毒 截短型pb1-f2 pb1-f2蛋白的变异 氨基酸构成

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甲型流感病毒PB1-F2蛋白功能的研究进展 被引量：5

3

作者 资海荣 李伟 +2 位作者 李婕 周丹 卫平民 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2013年第5期631-635,共5页

PB1-F2蛋白是甲型流感病毒表达的第11类蛋白，含有87～90个氨基酸残基，主要定位在线粒体中，可以诱导宿主细胞线粒体途径的细胞凋亡。部分流感病毒毒株的PB1-F2蛋白可以提高流感病毒聚合酶活性，从而促进病毒在宿主细胞中复制。同时完... PB1-F2蛋白是甲型流感病毒表达的第11类蛋白，含有87～90个氨基酸残基，主要定位在线粒体中，可以诱导宿主细胞线粒体途径的细胞凋亡。部分流感病毒毒株的PB1-F2蛋白可以提高流感病毒聚合酶活性，从而促进病毒在宿主细胞中复制。同时完整的PB1-F2蛋白上存在特异的抗原表位，能诱导宿主体内免疫T细胞的表达，引起其免疫水平的改变，这与二次细菌感染引发的肺损伤具有显著关联。甲型流感病毒有多种亚型，而且存在地区间差异。国内、外在关于PB1-F2蛋白的作用机制与功能方面的研究大多针对一个地区的一种亚型的流感病毒毒株，且很多都是建立在假设的基础上，因此，对于PB1-F2蛋白的作用机制及其对宿主的影响有待于开展进一步的研究。作者就甲型流感病毒PB1-F2蛋白的功能学研究进展作一综述。 展开更多

关键词 甲型流感病毒 pb1-f2蛋白 功能 文献综述

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GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用 被引量：2

4

作者 侯佩莉 关振宏 +2 位作者 张茂林 李影 段铭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期202-207,共6页

为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建... 为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PB1-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2融合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用。成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用。 展开更多

关键词 GST pull-down 流感病毒pb1-f2蛋白 热休克蛋白40 蛋白质相互作用

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流感病毒PB1-F2蛋白通过激活ERK1/2激酶刺激AP-1转录因子的活化 被引量：1

5

作者 金新 于洪敏 +3 位作者 张茂林 段铭 李影 关振宏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期681-685,共5页

为探索A型流感病毒PB1-F2蛋白对转录因子AP-1信号通路的调控机制,本研究通过荧光素酶报告基因试验检测PB1-F2蛋白的表达对AP-1转录活性的调控,利用荧光定量PCR和免疫印迹方法检测PB1-F2对c-Fos/AP-1的m RNA转录和ERK1/2磷酸化水平的影响... 为探索A型流感病毒PB1-F2蛋白对转录因子AP-1信号通路的调控机制,本研究通过荧光素酶报告基因试验检测PB1-F2蛋白的表达对AP-1转录活性的调控,利用荧光定量PCR和免疫印迹方法检测PB1-F2对c-Fos/AP-1的m RNA转录和ERK1/2磷酸化水平的影响,并以ERK通路特异性抑制剂U0126抑制ERK1/2的活性后,以验证PB1-F2调控AP-1是否通过ERK1/2激酶介导。结果显示:A549和293T细胞中表达PB1-F2蛋白后,AP-1的转录活性均显著升高,并且c-Fos/AP-1的m RNA转录水平呈现显著上调;过表达PB1-F2蛋白同样能够显著上调磷酸化ERK1/2水平;以U0126抑制ERK1/2激活后,PB1-F2上调AP-1转录活性的作用显著下降。本研究表明,流感病毒PB1-F2蛋白能够通过激活ERK1/2激酶诱导AP-1转录因子的活化,为进一步研究PB1-F2蛋白参与调控炎症反应的机制提供了实验依据。 展开更多

关键词 A型流感病毒 pb1-f2蛋白 ERK1/2信号通路 AP-1转录因子

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野禽源AIV PB1-F2基因的遗传进化及部分氨基酸位点组成分析 被引量：1

6

作者 张进 李雁冰 +2 位作者 柴洪亮 张兰兰 华育平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期674-680,共7页

在完成14株野禽源AIV PB1-F2基因克隆、测序的基础上,对其进行了同源性、遗传进化关系及氨基酸编码特征的比较分析。结果发现,H5N1亚型高致病性毒株A/lesser_kestrel/Harbin/194/2007(H5N1)PB1-F2的第37,48,50位氨基酸分别为精氨酸、脯... 在完成14株野禽源AIV PB1-F2基因克隆、测序的基础上,对其进行了同源性、遗传进化关系及氨基酸编码特征的比较分析。结果发现,H5N1亚型高致病性毒株A/lesser_kestrel/Harbin/194/2007(H5N1)PB1-F2的第37,48,50位氨基酸分别为精氨酸、脯氨酸、甘氨酸,与其他13个低致病性毒株均不相同(其分别为谷氨酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸)。为探讨这一现象,从NCBI Influenza Virus Resource中选取1 061个AIV毒株的PB1-F2基因序列进一步展开分析,结果表明:在第37,48,50位氨基酸位点上,97香港H5N1、其他H5N1及其他亚型AIV在此3个位点上氨基酸的构成存在着较为明显的差异,而且还呈现出了一定的规律和特点;并且研究还发现在此3个位点上,H9N2亚型毒株也表现出了较强的时间和空间分布特征。针对PB1-F2基因的遗传进化关系分析表明,H5N1及香港系毒株较其他AIV存在较远的遗传距离。随机的突变和重组似乎不足以解释这种差异及遗传距离形成的原因,其生物学意义有待于进一步探讨。 展开更多

关键词 野禽源禽流感病毒 pb1-f2基因 遗传进化 氨基酸组成

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甲型H3N2流感病毒截短型PB1-F2蛋白与宿主蛋白的相互作用的初步研究 被引量：1

7

作者 冯发深 何霞 +4 位作者 王铸 徐霖 张定梅 关琳琳 曹开源 《热带医学杂志》 CAS 2012年第6期657-660,F0004,共5页

目的利用酵母双杂交技术研究甲型H3N2流感病毒截短型PB1-F2蛋白与人类宿主蛋白的相互作用,为该病毒蛋白的功能研究和致病机制提供理论依据。方法以本实验室分离和鉴定的甲型H3N2流感病毒A/Guangdong/7028/2010为模版,构建pGBKT7-PB1-F2... 目的利用酵母双杂交技术研究甲型H3N2流感病毒截短型PB1-F2蛋白与人类宿主蛋白的相互作用,为该病毒蛋白的功能研究和致病机制提供理论依据。方法以本实验室分离和鉴定的甲型H3N2流感病毒A/Guangdong/7028/2010为模版,构建pGBKT7-PB1-F2重组载体,利用Y2HGold酵母双杂交系统,从人类通用cDNA文库中筛选与其相互作用的蛋白。结果成功构建含诱饵蛋白基因的pGBKT7-PB1-F2重组载体,转化酵母自激活和毒性实验显示为阴性;酵母双杂交实验显示Y2HGold和Y187酵母的结合率为5.22%,符合实验要求;经筛选和验证后,得到3个与截短型PB1-F2蛋白有相互作用的阳性克隆,分别为钾/钠ATP酶β1亚基、热休克蛋白40和白介素-2受体γ亚基。结论初步推断截短型H3N2流感病毒PB1-F2蛋白可能影响流感病毒在宿主细胞中的复制功能和凋亡调控。 展开更多

关键词 甲型H3N2流感病毒 截短型pb1-f2蛋白 酵母双杂交 相互作用

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A型流感病毒新蛋白PB1-F2的研究进展 被引量：2

8

作者 王晓杜 马志永 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第2期107-109,共3页

A型流感病毒主要引起人、禽、猪等的流感,PB1-F2蛋白是一种新发现的流感病毒蛋白,是由病毒基因片段2编码的非结构蛋白,可促进线粒体途径引起的细胞凋亡,其对A型流感病毒的复制和毒力等有重要影响。

关键词 A型流感病毒 pb1-f2 生物学功能 毒力

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广州地区新型H1N1流感病毒PB1-F2基因进化和变异分析

9

作者 冯发深 何霞 +5 位作者 王铸 徐霖 张定梅 关琳琳 邓瑜 曹开源 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期317-323,共7页

比较和分析2009～2011年广州地区分离到的甲型H1N1流感病毒PB1-F2基因和世界各地甲型H1N1流感病毒PB1-F2基因的变异情况,为该蛋白的功能和作用机制奠定基础。对分离自中国广州地区2009～2011年人类感染的17株新型H1N1和1株季节性H1N1流... 比较和分析2009～2011年广州地区分离到的甲型H1N1流感病毒PB1-F2基因和世界各地甲型H1N1流感病毒PB1-F2基因的变异情况,为该蛋白的功能和作用机制奠定基础。对分离自中国广州地区2009～2011年人类感染的17株新型H1N1和1株季节性H1N1流感病毒进行了PB1-F2基因克隆和序列测定,通过与GenBank数据库中68株人类新型H1N1和季节性H1N1流感病毒参考株的PB1-F2基因进行比对。结果表明,甲型流感病毒的PB1-F2基因进化树形成了2个不同的进化分支。全部2009～2011年新型H1N1流感病毒为一分支。广州地区PB1-F2基因与其它地区分离到的新型H1N1流感病毒具有高度的同源性,均为截短型变异。本实验室分离的1株季节性H1N1流感病毒也发生了第12位氨基酸截短突变。广州地区新型H1N1流感病毒PB1-F2截短蛋白与其它地区病毒相比未发生氨基酸变异,季节性H1N1流感病毒发现类似新型H1N1流感病毒PB1-F2的截短变异,提示新型H1N1流感病毒和季节性H1N1流感病毒PB1-F2可能发生早期重组。 展开更多

关键词 新型H1N1流感病毒 pb1-f2 进化分析

原文传递

酵母双杂交筛选人白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的蛋白 被引量：3

10

作者 崔雨明 侯佩莉 +3 位作者 张茂林 李鸿梅 黄飞 关振宏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期1-5,共5页

利用酵母双杂交技术筛选白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的宿主蛋白,为研究PB1-F2蛋白的功能提供依据。构建pGBKT7-PB1-F2诱饵重组载体,在证实诱饵蛋白不具有自激活作用的前提下,以酵母双杂交系统筛选人白细胞文库中与PB1-F2... 利用酵母双杂交技术筛选白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的宿主蛋白,为研究PB1-F2蛋白的功能提供依据。构建pGBKT7-PB1-F2诱饵重组载体,在证实诱饵蛋白不具有自激活作用的前提下,以酵母双杂交系统筛选人白细胞文库中与PB1-F2相互作用的细胞蛋白。对阳性克隆进行测序和生物信息学分析,并在酵母细胞内验证蛋白的相互作用。Western blot结果表明,酵母表达载体pGBKT7-PB1-F2在酵母中成功表达PB1-F2融合蛋白。酵母双杂交筛选并验证,获得了8个与流感病毒PB1-F2蛋白相互作用的宿主蛋白。本研究有助于在分子水平上探索PB1-F2蛋白的新功能,为揭示流感病毒的致病机理奠定基础。 展开更多

关键词 酵母双杂交 A型流感病毒 pb1-f2蛋白 蛋白质相互作用

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H5N1禽流感病毒PB1-F2特异性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

11

作者 徐国双 刘恩华 +2 位作者 张茂林 段铭 关振宏 《动物医学进展》 北大核心 2020年第7期1-6,共6页

以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧... 以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧光和酶联免疫吸附试验筛选鉴定阳性细胞株,并对单克隆抗体特异性进行鉴定。结果显示,纯化的重组cPB1-F2蛋白具有良好的免疫原性,筛选获得了3株稳定分泌抗cPB1-F2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为6F4、2C5和4D3,经鉴定抗体均为IgG1亚类,且3株单克隆抗体均能特异性识别重组PB1-F2蛋白。结果表明成功制备了cPB1-F2特异性单克隆抗体,为研制针对流感病毒的抗体药物奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5N1 pb1-f2 单克隆抗体

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PB1-F2长度改变对H3N2犬流感病毒影响的研究 被引量：3

12

作者 原耀贤 李舜 +4 位作者 何威 李康健 马春全 李守军 马骏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期243-249,共7页

H3N2犬流感病毒(H3N2 CIV)是流感病毒在进化过程中新形成的一个分支,在我国多地的犬中广泛流行。PB1-F2蛋白是甲型流感病毒的毒力因子,并可能与流感病毒的跨宿主传播相关。为探究PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,本研究分别构建了包含... H3N2犬流感病毒(H3N2 CIV)是流感病毒在进化过程中新形成的一个分支,在我国多地的犬中广泛流行。PB1-F2蛋白是甲型流感病毒的毒力因子,并可能与流感病毒的跨宿主传播相关。为探究PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,本研究分别构建了包含H3N2 CIV各基因节段的重组质粒及携带M1R(PB1-F2的aa1由M突变为R)及S^(11)Stop(PB1-F2 aa11由S突变为终止氨基酸序列)突变的重组质粒pHW-PB1-F2-M1R和pHW-PB1-F2-S^(11)Stop,并均经测序鉴定。通过反向遗传操作技术,分别拯救了如下3株重组病毒:表达90个氨基酸PB1-F2的重组亲本病毒rH3N2;不表达PB1-F2的重组病毒rH3N2-M1R;仅表达11个氨基酸PB1-F2的重组病毒rH3N2-S^(11)Stop。将这3株重组病毒利用MDCK细胞传代后分别对其8个基因节段经PCR扩增及测序以鉴定其遗传稳定性。测序鉴定结果显示,3株重组病毒均正确构建,且不同代次之间各重组病毒的基因序列及各突变位点均相同,表明本研究构建的重组病毒具有较好的遗传稳定性。将表达PB1、PB1-F2-M1R及PB1-F2-S^(11)Stop的重组质粒分别与重组质粒PB2、PA和荧光素酶报告质粒pPolI-Luci-NP及海肾荧光素酶表达质粒共转染293T细胞,48 h后利用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性并比较3株重组病毒的聚合酶活性;测定3株重组病毒感染MDCK细胞后不同时间的TCID50以绘制病毒的生长曲线;将3株重组病毒均以106TCID50/50μL经鼻腔感染小鼠,分析各重组病毒对小鼠的致病性。用以评价PB1-F2长度改变对H3N2 CIV的影响。结果显示,rH3N2-S^(11)Stop的聚合酶活性与rH3N2相比无明显变化,而rH3N2-M1R的聚合酶活性则显著高于rH3N2(P<0.05);rH3N2-M1R和rH3N2-S^(11)Stop在MDCK细胞中的复制效率显著高于rH3N2(P<0.05),且rH3N2-M1R的复制效率要高于rH3N2-S^(11)Stop。小鼠的致病性试验结果显示,感染重组病毒后的小鼠表现被毛粗乱、精神不振、食欲减退等症状;3株重组病毒均对小鼠体质量有轻微影响,并对小鼠肺脏均造成了轻微病理损伤,但三者对小鼠体质量及肺脏的影响差别不明显。本实验结果首次证实,PB1-F2的不表达能够提高H3N2 CIV的转录效果,且PB1-F2长度的改变能够提高H3N2 CIV在细胞中的复制效率,但对病毒在小鼠中致病性的影响较小。本研究初步探究了PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,为该病毒致病机制及其感染防控技术的研究与制定提供了参考依据。 展开更多

关键词 犬流感病毒 反向遗传 定点突变 pb1-f2

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A型流感病毒PB1-F2蛋白的结构与功能研究进展 被引量：1

13

作者 王清艳 王靖飞 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期82-84,共3页

PB1-F2蛋白是一种流感病毒蛋白,蛋白通过诱导巨噬细胞凋亡降低宿主的免疫反应。PB1-F2蛋白介导的细胞杀伤作用通过阻碍专职抗原递呈细胞对后天免疫的调节而增加继发细菌感染的可能性,从而使病毒的致病性增加。现就PB1-F2蛋白结构与功能... PB1-F2蛋白是一种流感病毒蛋白,蛋白通过诱导巨噬细胞凋亡降低宿主的免疫反应。PB1-F2蛋白介导的细胞杀伤作用通过阻碍专职抗原递呈细胞对后天免疫的调节而增加继发细菌感染的可能性,从而使病毒的致病性增加。现就PB1-F2蛋白结构与功能方面的研究进展做一综述。 展开更多

关键词 A型流感病毒 pb1-f2蛋白 结构与功能

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A型流感病毒PB1-F2蛋白与蛋白激酶R相互作用研究

14

作者 于洪敏 金新 +2 位作者 张茂林 段铭 关振宏 《动物医学进展》 北大核心 2017年第5期1-5,共5页

为研究A型流感病毒的重要毒力因子PB1-F2对蛋白激酶R(PKR)的调控机制,通过纯化GST-PB1-F2融合蛋白,利用GST pull-down试验证实了PB1-F2与PKR发生相互作用;采用免疫荧光试验进一步验证了二者的相互关系;实时荧光定量PCR表明PB1-F2能负调... 为研究A型流感病毒的重要毒力因子PB1-F2对蛋白激酶R(PKR)的调控机制,通过纯化GST-PB1-F2融合蛋白,利用GST pull-down试验证实了PB1-F2与PKR发生相互作用;采用免疫荧光试验进一步验证了二者的相互关系;实时荧光定量PCR表明PB1-F2能负调控PKR及IL-6的mRNA水平;采用siRNA干扰PKR基因的表达后,PB1-F2抑制IL-6的mRNA转录作用更显著。进一步运用蛋白免疫印迹方法检测了PB1-F2对PKR及其底物eIF-2α蛋白磷酸化水平的影响,显示过表达PB1-F2后,PKR及eIF-2α的磷酸化表达水平明显下调。本研究表明PB1-F2与PKR相互作用而抑制PKR磷酸化活化,并通过PKR调控IL-6的表达,为探索PB1-F2的未知生物学功能提供了重要信息。 展开更多

关键词 A型流感病毒 pb1-f2 蛋白激酶R 蛋白磷酸化

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A型流感病毒PB1-F2蛋白的原核表达、纯化及鉴定

15

作者 李俊杰 侯佩莉 关振宏 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第4期788-790,797,共4页

对A型流感病毒PB1-F2蛋白进行了原核表达及纯化,获得了谷胱甘肽硫转移酶(GST)-PB1-F2融合蛋白,以用于研究流感病毒PB1-F2蛋白的功能及分子作用机制。以RT-PCR方法扩增PB1-F2基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上。重组质粒pGEX-6P-1-... 对A型流感病毒PB1-F2蛋白进行了原核表达及纯化,获得了谷胱甘肽硫转移酶(GST)-PB1-F2融合蛋白,以用于研究流感病毒PB1-F2蛋白的功能及分子作用机制。以RT-PCR方法扩增PB1-F2基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上。重组质粒pGEX-6P-1-PB1-F2转化大肠杆菌(Es-cherichia coli)菌株BL21,并诱导表达,利用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot试验鉴定。结果显示,大肠杆菌细胞经诱导,表达出了相对分子量约为36kDa的蛋白,与GST-PB1-F2融合蛋白大小相符;Western blot鉴定显示,该融合蛋白能够被抗GST的抗体特异性识别。试验在大肠杆菌表达系统中成功表达纯化了GST-PB1-F2融合蛋白,为深入研究PB1-F2蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 流感病毒 谷胱甘肽硫转移酶-A型流感病毒pb1-f2蛋白融合蛋白 原核表达 纯化

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甲型流感病毒蛋白PB1-F2通过Tom40转位到线粒体及其损害先天免疫的研究

16

作者 Yoshizumi T 董晓云 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期131-131,共1页

线粒体可增强RNA病毒侵染引起的细胞先天免疫。线粒体介导的先天免疫通过信号分子调节聚集到线粒体膜,并依赖于线粒体内膜电位(Δψm)。本试验主要研究线粒体膜电位的生理学相关性及先天免疫中与线粒体相关的甲型流感病毒蛋白PB1-F2。... 线粒体可增强RNA病毒侵染引起的细胞先天免疫。线粒体介导的先天免疫通过信号分子调节聚集到线粒体膜,并依赖于线粒体内膜电位(Δψm)。本试验主要研究线粒体膜电位的生理学相关性及先天免疫中与线粒体相关的甲型流感病毒蛋白PB1-F2。当在宿主细胞中表达时,PB1-F2经由Tom40渠道完全转位到线粒体内膜空间,它的积累促进了因线粒体膜电位降低而导致的线粒体碎片的生成。相比之下,在低致病亚型病毒中发现的缺乏C-末端多肽的PB1-F2变体却不影响线粒体功能。PB1-F2介导的线粒体膜电位的降低抑制RIG-I信号通路及NLRP3炎症因子的激活。结果表明PB1-F2转位到线粒体与受损细胞先天免疫密切相关,使这种易位成为一个潜在的治疗靶点。 展开更多

关键词 pb1-f2 线粒体膜电位 先天免疫

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1968-2014年中国甲型H3N2流感病毒PB1基因进化分析 被引量：4

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作者 郭艳 颜文娟 +5 位作者 邓斐 余慧燕 王慎骄 汤奋扬 祁贤 卫平民 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期593-600,共8页

【目的】分析季节性H3N2流感病毒PB1基因序列的变异情况,揭示H3N2流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势。【方法】对1968-2014年中国地区82株人H3N2毒株、2012-2014年江苏省分离的81株甲型H3N2流感病毒、6株SIV和4株AIV H3N2亚型PB1、PB... 【目的】分析季节性H3N2流感病毒PB1基因序列的变异情况,揭示H3N2流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势。【方法】对1968-2014年中国地区82株人H3N2毒株、2012-2014年江苏省分离的81株甲型H3N2流感病毒、6株SIV和4株AIV H3N2亚型PB1、PB1-F2基因进行分子进化分析。【结果】1968-2014年中国H3N2流感毒株PB1核苷酸和氨基酸相似性分别为90.91%-100%和96.91%-100%。系统进化树分析,1968-2014年共173株H3N2流感病毒总体上分为4个分支,2002-2014年分离毒株位于第IV分支上,1968-1994年分离毒株位于第II和III分支;猪源H3N2亚型分布于第I、II、IV分支上;分子特征显示PB1氨基酸52、113、179、216、576、586、619、621、709位在2002年以后发生适应性改变,替换了原来的氨基酸;PB1-F2基因编码截断型蛋白长度有52、34、25、24、11 aa(猪源),PB1-F2蛋白毒力关键位点上未出现高致病性特征突变。【结论】自1968年起H3N2亚型PB1基因变异逐步趋于稳定,且PB1-F2截断型毒株正逐渐成为一类新的进化特征,但PB1基因与其他亚型之间发生重配以及关键毒力位点的变异仍应是监测的重点。 展开更多

关键词 H3N2流感病 pb1基因 pb1-f2蛋白 进化分析

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2013-2014年杭州地区季节性A(H3N2)流感病毒PB1基因及其编码蛋白的遗传进化特征研究 被引量：1

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作者 岑斌 汪皓秋 +4 位作者 于新芬 寇宇 周银燕 钱昕 李钧 《中国预防医学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期161-167,共7页

目的分析2013-2014年杭州市季节性A(H3N2)流感病毒PB1基因及其编码蛋白的变异情况,揭示其分子特征与遗传进化趋势。方法对分离得到的78株流感病毒PB1基因进行扩增和测序,采用序列多重比对、突变位点比较分析和构建进化树等方法进行遗传... 目的分析2013-2014年杭州市季节性A(H3N2)流感病毒PB1基因及其编码蛋白的变异情况,揭示其分子特征与遗传进化趋势。方法对分离得到的78株流感病毒PB1基因进行扩增和测序,采用序列多重比对、突变位点比较分析和构建进化树等方法进行遗传进化分析。结果 78株流感病毒PB1基因的核苷酸序列和编码蛋白序列一致性分别为97.89%~100.00%和99.08%~100.00%,PB1-F2蛋白短肽的序列一致性为44.44%~100.00%;PB1蛋白氨基酸序列与参考株A/Texas/50/2012相比,在十多个位点均发生了氨基酸突变,其中V212M、R215K、E331D、A374S氨基酸突变频率较高;PB1-F2蛋白长度分析发现了5种不同的PB1-F2蛋白,其中3种为全长蛋白(90、87、79)aa,2种为截断型PB1-F2蛋白(52,24)aa;构建系统进化树发现78株H3N2毒株PB1基因及其编码蛋白均在同一个支系上,与同期流行季的疫苗株进化关系较近,第三个流行高峰(2014年6~10月)进化关系相对更集中。结论 2013-2014年季节性A(H3N2)流感病毒PB1蛋白氨基酸位点发生了部分重要突变,病毒PB1基因及其编码蛋白的遗传进化以及截断型PB1-F2蛋白的集中出现,可能促使病毒的复制能力和毒力发生变化,并最终导致其流行传播趋势的改变。 展开更多

关键词 A(H3N2)流感病毒 pb1 pb1-f2 遗传进化

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深圳H7N9流感病毒PB1-F2基因分子特征 被引量：1

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作者 董方圆 王昕 +5 位作者 彭博 武伟华 刘慧 丁小满 郑青 房师松 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期493-497,共5页

目的了解深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因的分子特征。方法使用DNAstar、MEGA等生物软件对深圳地区H7N9流感病毒PB1-F2进行核苷酸、氨基酸序列同源性和系统进化分析。结果2014年底到2015年H7N9流感病毒爆发主要集中在广东省，以深圳居... 目的了解深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因的分子特征。方法使用DNAstar、MEGA等生物软件对深圳地区H7N9流感病毒PB1-F2进行核苷酸、氨基酸序列同源性和系统进化分析。结果2014年底到2015年H7N9流感病毒爆发主要集中在广东省，以深圳居首。深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因主要分为三个亚系。3株的PB1-F2基因的N端缺失编码52个氨基酸；1株PB1-F2基因的c端缺失编码57个氨基酸；1株PB1-F2基因的c端缺编码76个氨基酸；其余株PB1-F2基因编码90个氮基酸。各深圳株与A／Anhui／1-DEWH730／2013株相比核苷酸和氨基酸的同源性分别为96．0％-100％和89．O％～100％。各深圳株之间的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为94．9％～100％和85．7％～100％。结论深圳H7N9流感病毒PB1-F2基因具有独特的分子特征。 展开更多

关键词 甲型流感病毒H7N9 pb1-f2基因 进化分析

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A型流感病毒PB1-F2蛋白与MOAP-1的相互作用

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作者 崔雨明 侯佩莉 +2 位作者 张茂林 段铭 关振宏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1122-1128,共7页

【目的】探讨A型流感病毒PB1-F2蛋白和人类凋亡调节因子1(MOAP-1)之间的相互作用。【方法】构建pACT2-MOAP-1重组质粒,与pGBKT7-PB1-F2质粒共转化酵母AH109,检测转化菌在四缺培养基的生长情况及β半乳糖苷酶报告基因的活性;利用GST pull... 【目的】探讨A型流感病毒PB1-F2蛋白和人类凋亡调节因子1(MOAP-1)之间的相互作用。【方法】构建pACT2-MOAP-1重组质粒,与pGBKT7-PB1-F2质粒共转化酵母AH109,检测转化菌在四缺培养基的生长情况及β半乳糖苷酶报告基因的活性;利用GST pull-down和免疫共沉淀(Co-IP)技术进一步验证PB1-F2与宿主细胞蛋白MOAP-1的相互作用;通过过表达PB1-F2和MOAP-1,检测PB1-F2对MOAP-1蛋白表达水平的影响。【结果】酵母双杂交结果表明,PB1-F2和MOAP-1可以在酵母细胞内特异性结合。GST pull-down和Co-IP实验也进一步证实了这两种蛋白的相互作用,而且PB1-F2可上调外源MOAP-1的蛋白水平。【结论】流感病毒PB1-F2与MOAP-1存在相互作用,PB1-F2可能通过与MOAP-1的相互作用参与调控细胞生长及凋亡过程。 展开更多

关键词 A型流感病毒 pb1-f2 MOAP-1 蛋白相互作用

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