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鱼类DNA聚合酶δP12亚基cDNA克隆与序列分析
被引量：
1
1
作者
殷志新
黄仙德
何建国
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期466-470,共5页
从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)白细胞cDNA文库随机挑选克隆,测定表达序列标签(ESTs),利用BLASTX程序与GenBank中的序列进行比较,得到了1个cDNA,其编码蛋白质与人类DNA聚合酶δ(polδ)的P12亚基有47.7%的同源性,推测它为斜带石斑鱼...
从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)白细胞cDNA文库随机挑选克隆,测定表达序列标签(ESTs),利用BLASTX程序与GenBank中的序列进行比较,得到了1个cDNA,其编码蛋白质与人类DNA聚合酶δ(polδ)的P12亚基有47.7%的同源性,推测它为斜带石斑鱼polδ的12 kD小亚基的cDNA,所编码的蛋白质命名为P12。该cDNA全长619 bp,含1个330 bp的开放阅读框,编码109个氨基酸残基的蛋白质。序列对比表明,斜带石斑鱼的氨基酸序列与人、大鼠、小鼠、拟南芥和裂殖酵母的polδ小亚基有同源性,同时与斑马鱼EST CK680540的编码序列有66.6%的同源性。用RT-PCR检测该基因在石斑鱼各组织的表达情况,发现在腮、肝、脾、全血、胃和后肾有表达,而在肠、心脏、脑和头肾未检测到。
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关键词
DNA聚合酶δ(polδ)
p12
亚基
斜带石斑鱼
RT-PCR
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职称材料
人源DNA聚合酶Pol δ小亚基p12的抗体制备及应用
2
作者
李骁
刘留
+1 位作者
张磊
周亚竟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期12-18,共7页
人源DNA聚合酶δ(Polδ)是由p125、p50、p68和p12四个亚基组成的异源四聚体,小亚基p12在Polδ参与DNA复制与损伤修复过程中起着至关重要的作用。为了获得具有高度特异性和灵敏性的抗p12抗体,利用PCR技术成功扩增p12基因,通过酶切、连接...
人源DNA聚合酶δ(Polδ)是由p125、p50、p68和p12四个亚基组成的异源四聚体,小亚基p12在Polδ参与DNA复制与损伤修复过程中起着至关重要的作用。为了获得具有高度特异性和灵敏性的抗p12抗体,利用PCR技术成功扩增p12基因,通过酶切、连接、转化等常规分子克隆方法构建重组原核表达质粒pGEX-5X-3-p12,经转化大肠杆菌BL21,诱导表达的可溶性融合蛋白经Glutathione Sepharose 4B柱和FPLC Mono Q柱纯化、Factor-Xa酶切,获得不带GST标签的p12蛋白作为抗原;免疫新西兰大白兔制备抗血清并用Protein A/G亲和层析柱纯化多克隆抗体。经Western blot和细胞免疫荧光分析测试,所获得的抗体不但能够特异性识别细胞内源p12,而且观察到p12能够与PCNA共定位到DNA复制叉,首次在亚细胞水平上证明了p12与PCNA的粘连互作反应。高度特异和灵敏的抗p12抗体的获得为深入研究小亚基p12如何调控Polδ的酶学功能、为从人类癌症发病的起因上阐明由于Polδ功能改变而引起遗传基因组不稳定进而导致肿瘤发生的机制提供了重要的手段。
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关键词
DNA聚合酶Δ
小亚基
p12
蛋白纯化
多克隆抗体
PCNA
原文传递
题名
鱼类DNA聚合酶δP12亚基cDNA克隆与序列分析
被引量：
1
1
作者
殷志新
黄仙德
何建国
机构
中山大学生命科学学院
出处
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期466-470,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30300266)
国家"863"高技术研究发展计划项目(2001AA601010)
广东省科技计划重点引导项目(2004B20301008)
文摘
从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)白细胞cDNA文库随机挑选克隆,测定表达序列标签(ESTs),利用BLASTX程序与GenBank中的序列进行比较,得到了1个cDNA,其编码蛋白质与人类DNA聚合酶δ(polδ)的P12亚基有47.7%的同源性,推测它为斜带石斑鱼polδ的12 kD小亚基的cDNA,所编码的蛋白质命名为P12。该cDNA全长619 bp,含1个330 bp的开放阅读框,编码109个氨基酸残基的蛋白质。序列对比表明,斜带石斑鱼的氨基酸序列与人、大鼠、小鼠、拟南芥和裂殖酵母的polδ小亚基有同源性,同时与斑马鱼EST CK680540的编码序列有66.6%的同源性。用RT-PCR检测该基因在石斑鱼各组织的表达情况,发现在腮、肝、脾、全血、胃和后肾有表达,而在肠、心脏、脑和头肾未检测到。
关键词
DNA聚合酶δ(polδ)
p12
亚基
斜带石斑鱼
RT-PCR
Keywords
DNA polymerase （pol）δ
p12 subunit
orange-spotted grouper
RT-PCR
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
人源DNA聚合酶Pol δ小亚基p12的抗体制备及应用
2
作者
李骁
刘留
张磊
周亚竟
机构
江苏大学生命科学研究院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期12-18,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(30970612)
文摘
人源DNA聚合酶δ(Polδ)是由p125、p50、p68和p12四个亚基组成的异源四聚体,小亚基p12在Polδ参与DNA复制与损伤修复过程中起着至关重要的作用。为了获得具有高度特异性和灵敏性的抗p12抗体,利用PCR技术成功扩增p12基因,通过酶切、连接、转化等常规分子克隆方法构建重组原核表达质粒pGEX-5X-3-p12,经转化大肠杆菌BL21,诱导表达的可溶性融合蛋白经Glutathione Sepharose 4B柱和FPLC Mono Q柱纯化、Factor-Xa酶切,获得不带GST标签的p12蛋白作为抗原;免疫新西兰大白兔制备抗血清并用Protein A/G亲和层析柱纯化多克隆抗体。经Western blot和细胞免疫荧光分析测试,所获得的抗体不但能够特异性识别细胞内源p12,而且观察到p12能够与PCNA共定位到DNA复制叉,首次在亚细胞水平上证明了p12与PCNA的粘连互作反应。高度特异和灵敏的抗p12抗体的获得为深入研究小亚基p12如何调控Polδ的酶学功能、为从人类癌症发病的起因上阐明由于Polδ功能改变而引起遗传基因组不稳定进而导致肿瘤发生的机制提供了重要的手段。
关键词
DNA聚合酶Δ
小亚基
p12
蛋白纯化
多克隆抗体
PCNA
Keywords
DNA Polymerase δ Smallest
subunit
p12
Protein purification Polyclonal antibody PCNA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鱼类DNA聚合酶δP12亚基cDNA克隆与序列分析
殷志新
黄仙德
何建国
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人源DNA聚合酶Pol δ小亚基p12的抗体制备及应用
李骁
刘留
张磊
周亚竟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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