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pEGFP-N1-Spc24载体的构建及对肝细胞再生的影响
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作者 邢雪琨 武红艳 陈红丽 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第1期1-6,共6页
Ndc80复合体属于有丝分裂中纺锤体检验点成分,位于动粒的外层,由Ndc80、Nuf2、Spc24和Spc25组成,与染色体的稳定性紧密相关。本文构建了p EGFP-N1-Spc24表达载体,研究Spc24对肝再生细胞增殖的影响。提取大鼠肝脏总RNA进行反转录,PCR扩... Ndc80复合体属于有丝分裂中纺锤体检验点成分,位于动粒的外层,由Ndc80、Nuf2、Spc24和Spc25组成,与染色体的稳定性紧密相关。本文构建了p EGFP-N1-Spc24表达载体,研究Spc24对肝再生细胞增殖的影响。提取大鼠肝脏总RNA进行反转录,PCR扩增获得Spc24基因,连接p GEM-T载体,双酶切p GEM-T克隆载体及p EGFP-N1表达载体,连接转化感受态细胞JM109。阳性克隆命名为p EGFP-N1-Spc24。荧光显微镜下检测Spc24的表达水平,并用液压转基因将质粒转入大鼠肝脏内,采用Real-time PCR方法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况,并计算肝系数的变化。PCR扩增、酶切鉴定和测序结果表明,成功了构建p EGFP-N1-Spc24表达载体。荧光显微镜观察说明该载体能稳定表达大鼠Spc24基因。转基因后PCNA的表达量高于对照,并且肝系数也高于对照组,表明Spc24是肝再生相关基因,促进肝再生中细胞增殖。 展开更多
关键词 Spc24 Ndc80复合体 肝再生 有丝分裂
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