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靶向食蟹猴NTCP基因的CRISPR/Cas9系统gRNA筛选
被引量：
1
1
作者
徐桂利
高新
+2 位作者
刘铮铸
巩元芳
宋海峰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第10期2572-2577,共6页
本研究旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法及细胞水平上的PCR扩增测序筛选出靶向食蟹猴NTCP基因具有高敲除活性的gRNA。首先通过比对食蟹猴与人类NTCP氨基酸序列,选择差异位点,即第84—87位和第157—165位氨基酸作为基因靶点序列区;利用gRN...
本研究旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法及细胞水平上的PCR扩增测序筛选出靶向食蟹猴NTCP基因具有高敲除活性的gRNA。首先通过比对食蟹猴与人类NTCP氨基酸序列,选择差异位点,即第84—87位和第157—165位氨基酸作为基因靶点序列区;利用gRNA软件设计针对上述基因靶点序列的gRNA,每个靶点设计3～4条候选gRNA序列;然后利用gRNA体外检测试剂盒,筛选出靶向NTCP基因的体外敲除活性较高的两条gRNA序列：gRNA1.2和gRNA2.1。将gRNA1.2和gRNA2.1分别插入pLV hUbC-Cas9-T2A-GFP载体中,转染食蟹猴原代肝细胞。提取转染后细胞基因组DNA,通过PCR扩增NTCP基因并将其克隆到T载体中进行测序分析。结果表明,gRNA1.2和gRNA2.1均可使NTCP基因产生移码突变,但gRNA2.1比gRNA1.2具有更高的敲除活性。本研究为下一步编辑食蟹猴NTCP基因及研究其在乙型肝炎病毒（HBV）感染中的功能奠定了基础。
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关键词
CRISPR/Cas9
gRNA
食蟹猴
NTCP基因
基因敲除
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职称材料
题名
靶向食蟹猴NTCP基因的CRISPR/Cas9系统gRNA筛选
被引量：
1
1
作者
徐桂利
高新
刘铮铸
巩元芳
宋海峰
机构
河北科技师范学院动物科技学院
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第10期2572-2577,共6页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项:生物类似药非临床与临床研究的药代动力学
药效动力学以及免疫原性评价的关键技术(2015ZX09501008-006)
文摘
本研究旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法及细胞水平上的PCR扩增测序筛选出靶向食蟹猴NTCP基因具有高敲除活性的gRNA。首先通过比对食蟹猴与人类NTCP氨基酸序列,选择差异位点,即第84—87位和第157—165位氨基酸作为基因靶点序列区;利用gRNA软件设计针对上述基因靶点序列的gRNA,每个靶点设计3～4条候选gRNA序列;然后利用gRNA体外检测试剂盒,筛选出靶向NTCP基因的体外敲除活性较高的两条gRNA序列：gRNA1.2和gRNA2.1。将gRNA1.2和gRNA2.1分别插入pLV hUbC-Cas9-T2A-GFP载体中,转染食蟹猴原代肝细胞。提取转染后细胞基因组DNA,通过PCR扩增NTCP基因并将其克隆到T载体中进行测序分析。结果表明,gRNA1.2和gRNA2.1均可使NTCP基因产生移码突变,但gRNA2.1比gRNA1.2具有更高的敲除活性。本研究为下一步编辑食蟹猴NTCP基因及研究其在乙型肝炎病毒（HBV）感染中的功能奠定了基础。
关键词
CRISPR/Cas9
gRNA
食蟹猴
NTCP基因
基因敲除
Keywords
CRISPR/Cas9
gRNA
Macaca fascicularis
ntcpgene
gene knockout
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
靶向食蟹猴NTCP基因的CRISPR/Cas9系统gRNA筛选
徐桂利
高新
刘铮铸
巩元芳
宋海峰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
1
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