针对玉米Zmbr2基因开展矮秆种质资源创制及其农艺性状分析

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作者 吕庆雪 桑建 +5 位作者 汤继超 麻明可 高婷婷 宋广树 徐长洪 孙蕾 《玉米科学》 北大核心 2025年第10期8-13,共6页

利用单倍体诱导系介导的基因组编辑技术,对玉米Zmbr2基因进行诱导编辑,获得基因编辑的矮秆玉米材料,对其株高、穗位高和百粒重等指标进行性状评价,结果表明,与野生型相比,突变植株的株高和穗位高显著低于对照植株,矮化表型非常明显;突... 利用单倍体诱导系介导的基因组编辑技术,对玉米Zmbr2基因进行诱导编辑,获得基因编辑的矮秆玉米材料,对其株高、穗位高和百粒重等指标进行性状评价,结果表明,与野生型相比,突变植株的株高和穗位高显著低于对照植株,矮化表型非常明显;突变植株的百粒重和对照植株的百粒重无显著差异。Zmbr2突变体相对野生型,节间显著缩短,节数减少,各节间长度缩短程度为8.8%~51.9%。 展开更多

关键词 玉米 Zmbr2基因 基因编辑 载体构建 矮秆突变体

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宁春4号小麦EMS突变体库的构建及表型变异分析

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作者 豆飞飞 任毓昭 +7 位作者 王石磊 刘春颖 王晓东 王昭懿 刘彩霞 刘凤楼 王掌军 李清峰 《生物技术通报》 北大核心 2025年第8期92-101,共10页

【目的】为加快盐碱地小麦优质种质资源的创制,丰富遗传多样性,构建宁春4号EMS突变体库。【方法】采用0.5%甲基磺酸乙酯(EMS)溶液处理10 000粒小麦品种宁春4号种子,构建M1代突变体库,对其表型性状突变率进行统计分析。此外,对M1代材料进... 【目的】为加快盐碱地小麦优质种质资源的创制,丰富遗传多样性,构建宁春4号EMS突变体库。【方法】采用0.5%甲基磺酸乙酯(EMS)溶液处理10 000粒小麦品种宁春4号种子,构建M1代突变体库,对其表型性状突变率进行统计分析。此外,对M1代材料进行250 mmol/L的NaCl溶液定向筛选,得到耐盐突变体,并对突变体进行表型鉴定,以及形态指标、物质积累、生理指标的测定。【结果】M1代成活3 709株,成株率37.09%,其中,有表型突变性状的1 226株,突变率为33.05%。1 226株突变类型丰富,包含叶部性状突变151株,穗部性状突变212株,分蘖突变161株,株高突变133株,育性和生育期突变130株,其他性状突变75株,突变率分别为13.89%、5.72%、4.34%、3.59%、3.50%和2.02%。经过盐胁迫处理后,宁春4号与突变体相比表现为,叶片黄化萎蔫,苗高、最大根长、初生根数、地上部鲜重、根鲜重、地上部干重、根冠比均表现显著差异,而根干重无显著变化;在生理指标方面,突变体的丙二醛(MDA)含量、细胞膜透性显著低于野生型,脯氨酸(Pro)含量、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于野生型,可溶性糖(SS)含量无显著差异。【结论】以宁春4号为野生型材料诱变产生的突变体类型丰富,为快速定位小麦优异性状基因并研究其功能提供丰富的种质资源。 展开更多

关键词 小麦 宁春4号 EMS诱变 突变体库构建 表型变异统计分析

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幼叶黄化油菜(Brassica napus L.)突变体Cr3529叶绿体超微结构观察 被引量：27

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作者 赵云 王茂林 +1 位作者 李江 张义正 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期974-977,共4页

对油菜Cr3529叶片细胞中的叶绿体数目及结构进行了显微及亚显微观察.结果显示,突变与野生型细胞中叶绿体的数目没有显著性的差异,但叶绿体的结构有较大的差异.较之正常油菜,Cr3529油菜叶绿体基粒类囊体数较少,基质类囊体数较多,而且,在... 对油菜Cr3529叶片细胞中的叶绿体数目及结构进行了显微及亚显微观察.结果显示,突变与野生型细胞中叶绿体的数目没有显著性的差异,但叶绿体的结构有较大的差异.较之正常油菜,Cr3529油菜叶绿体基粒类囊体数较少,基质类囊体数较多,而且,在基粒类囊体中基粒片层数也较少,大部分基粒只有几个片层,基粒的平均片层数为5.46,约为野生型的一半.作者认为,较少的基粒片层数可能是引起Cr3529油菜叶绿素含量减少,并最终导致植株显著减产的重要原因. 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 叶绿体 黄化突变 结构

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利用T载体克隆快速构建布鲁氏菌缺失突变株 被引量：15

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作者 白耀霞 杨毅 +7 位作者 王玉飞 王同坤 于爽 陈燕芬 付思美 黄留玉 田晋红 陈泽良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期62-67,共6页

目的:建立一种基于T载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法,提高布鲁氏菌突变株构建的效率。方法:采用融合PCR的方法,将待缺失基因上下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合起来,构建突变盒,然后将突变盒直接与T载体连接,构建突变载体,将... 目的:建立一种基于T载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法,提高布鲁氏菌突变株构建的效率。方法:采用融合PCR的方法,将待缺失基因上下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合起来,构建突变盒,然后将突变盒直接与T载体连接,构建突变载体,将载体转入布鲁氏菌感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得布鲁氏菌的缺失突变株。结果:结合融合PCR和T载体快速克隆,能够在48h之内构建好突变载体,与传统的酶切连接相比,效率高、周期短。结论:基于T载体快速克隆是一种非常高效的构建突变株的方法,为布鲁氏菌突变株的构建提供了一种新方法。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 T载体 突变株构建

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以克隆载体为自杀载体快速构建布鲁氏菌的无痕缺失突变株 被引量：12

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作者 王玉飞 陈泽良 +5 位作者 赵红庆 苑锡铜 黄留玉 张伶 刘京梅 宋宏彬 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期642-645,共4页

构建突变株是病原微生物致病机理研究的重要手段。以往研究中布鲁氏菌的无痕缺失突变株都采用传统的自杀载体来构建,效率低下。首先对布鲁氏菌的电击转化条件进行了优化,然后选择含有反向筛选基因sacB的pEX18Gm质粒作为自杀载体,构建了... 构建突变株是病原微生物致病机理研究的重要手段。以往研究中布鲁氏菌的无痕缺失突变株都采用传统的自杀载体来构建,效率低下。首先对布鲁氏菌的电击转化条件进行了优化,然后选择含有反向筛选基因sacB的pEX18Gm质粒作为自杀载体,构建了缺失Ⅳ型启动子区的布鲁氏菌无痕缺失突变株。这不仅为构建布鲁氏菌的突变株提供了一个快速有效的技术平台,也为深入研究Ⅳ型分泌系统的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 自杀载体 布鲁氏菌 突变株构建

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pUC19K质粒的构建及其在布鲁氏菌突变株构建中的应用 被引量：12

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作者 乔凤 陈泽良 +4 位作者 王玉飞 赵瑾 杜昕颖 于雅琴 黄留玉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1-5,共5页

突变株的构建是细菌基因功能研究的前提。构建了一个可用于布鲁氏菌突变株构建的自杀质粒。在pUC19质粒的多克隆位点插入卡那霉素抗性基因,在该基因两侧添加多个酶切位点,构建成为pUC19K。利用该质粒,构建了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因... 突变株的构建是细菌基因功能研究的前提。构建了一个可用于布鲁氏菌突变株构建的自杀质粒。在pUC19质粒的多克隆位点插入卡那霉素抗性基因,在该基因两侧添加多个酶切位点,构建成为pUC19K。利用该质粒,构建了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因的突变株。结果表明,利用该自杀质粒,通过一轮筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株。pUC19K质粒的构建及成功应用,为布鲁氏菌突变株的构建提供了一个快速有效的手段,也为布鲁氏菌的基因功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 自杀质粒 突变株构建

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结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株的构建 被引量：9

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作者 李瑞山 雷英 +11 位作者 吴芳 张辉 张春军 章乐 曹旭东 吴江东 朱彬 张玉清 邬博 何丽 王钊 张万江 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第1期9-16,共8页

目的利用SOE-PCR技术和T载体技术,快速构建结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株,为进一步研究结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统的功能奠定基础。方法基于同源重组原理,利用... 目的利用SOE-PCR技术和T载体技术,快速构建结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株,为进一步研究结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统的功能奠定基础。方法基于同源重组原理,利用SOE-PCR技术和T载体技术分别将各待缺失基因的上下游同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建各基因缺失突变盒;将各基因缺失突变盒与T-Vector pMD 19(Simple)相连接,构建各基因缺失突变自杀载体;利用电穿孔技术将各载体转入H37Rv菌株,通过筛选阳性克隆、菌落PCR鉴定、DNA测序及遗传稳定性检测,获得各目的基因的缺失突变株。结果成功构建了带有1 601bp的特异性置换片段Pup-N-K和1 591bp的特异性置换片段K-Pup-C的Pup基因缺失突变株H37Rv△Pup,带有1 604bp的特异性置换片段Mpa-N-K和1 602bp的特异性置换片段K-Mpa-C的Mpa基因缺失突变株H37Rv△Mpa,带有1 515bp的特异性置换片段Dop-N-K和1509bp的特异性置换片段K-Dop-C的Dop基因缺失突变株H37Rv△Dop及带有1 590bp的特异性置换片段PafA-N-K和1 584bp的特异性置换片段K-PafA-C的PafA基因缺失突变株H37Rv△PafA,且各突变株均具有良好的遗传稳定性。结论利用SOE-PCR技术和T载体技术可以快速构建结核分枝杆菌基因缺失突变株,依据此方法成功构建了H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株,为进一步研究结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Pup-蛋白酶体系统 缺失突变株 构建

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金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 Δnuc1的构建 被引量：6

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作者 唐俊妮 周锐 +2 位作者 史贤明 康名松 陈焕春 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期43-47,共5页

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一... 金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2Δnuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220Δnuc1。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 nucl nuc2 同源重组 突变株构建

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羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株VirB12基因缺失株的构建及鉴定 被引量：5

9

作者 马晓菁 易新萍 +5 位作者 付湘芸 叶锋 谷文喜 刘帅 马俊杰 钟旗 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期794-798,共5页

为获得毒力较弱且能够区分疫苗免疫与自然感染的羊种布鲁氏菌候选疫苗株,本研究构建羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株VirB12基因缺失突变株。分别扩增Rev.1疫苗株VirB12基因上下游同源臂序列以及卡那霉素抗性基因,采用融合PCR方法将3个基因片段... 为获得毒力较弱且能够区分疫苗免疫与自然感染的羊种布鲁氏菌候选疫苗株,本研究构建羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株VirB12基因缺失突变株。分别扩增Rev.1疫苗株VirB12基因上下游同源臂序列以及卡那霉素抗性基因,采用融合PCR方法将3个基因片段连接构建突变盒,连接至pMD19-T载体,电转化入布鲁氏菌Rev.1感受态细胞筛选阳性克隆,获得Rev.1-ΔVirB12突变株。Rev.1-ΔVirB12连续传代15代未发生回复突变。羊种布鲁氏菌疫苗株Rev.1-ΔVirB12的构建为羊种布鲁氏菌疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 羊种布鲁氏菌 Rev.1 突变株 构建

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革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用 被引量：11

10

作者 王景 穆媛嫒 +3 位作者 黎庶 陈志瑾 熊坤 丛延广 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第23期2299-2301,共3页

目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ... 目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-SacⅡ-BglⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段。载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性。结果成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株。结论本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的基因的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用。 展开更多

关键词 敲除 载体构建 突变株 基因功能

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人突变型IκBα真核表达质粒的构建和鉴定 被引量：5

11

作者 秦涛 郑启昌 +2 位作者 王继亮 卢欣 张勇 《医学研究生学报》 CAS 2005年第10期872-874,i0008,共4页

目的:构建人突变型IκBα真核表达质粒。方法:应用RT-PCR及重叠延伸PCR技术,得到点突变的人IκBαM,并定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体,酶切和DNA序列测定鉴定。结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒PcDNA3.0-IκBαM构建正确。结... 目的:构建人突变型IκBα真核表达质粒。方法:应用RT-PCR及重叠延伸PCR技术,得到点突变的人IκBαM,并定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体,酶切和DNA序列测定鉴定。结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒PcDNA3.0-IκBαM构建正确。结论:真核表达质粒PcDNA3.0-IκBαM构建成功,为进一步研究其生物功能打下基础。 展开更多

关键词 突变型 IκBα基因 构建

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人尿激酶原cDNA序列缺失突变体的构建及表达 被引量：1

12

作者 韩素文 俞炜源 +1 位作者 程度胜 胡宝成 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期127-131,共5页

采用ＰＣＲ重叠延伸法和基因重组技术构建了人尿激酶原ｃＤＮＡ序列中缺失１５０～１５６位氨基酸的突变体，以ＣＯＳ７细胞中获得暂时性表达以及在ＣＨＯ细胞中稳定高效表达，其表达水平为４５０～５００ＩＵ／１０６ｃｅｌ／２４ｈ... 采用ＰＣＲ重叠延伸法和基因重组技术构建了人尿激酶原ｃＤＮＡ序列中缺失１５０～１５６位氨基酸的突变体，以ＣＯＳ７细胞中获得暂时性表达以及在ＣＨＯ细胞中稳定高效表达，其表达水平为４５０～５００ＩＵ／１０６ｃｅｌ／２４ｈ，表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ电转溶实验和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，细胞分泌的ＰｒｏＵＫ突变体与天然ＰｒｏＵＫ以及完整全长ＤＮＡ序列表达ＰｒｏＵＫ的分子量相同，为５４ｋＤａ，绝大多数为单链，比完整ｃＤＮＡ序列表达产物的单链比例明显增高。 展开更多

关键词 尿激酶原 CDNA 突变体 构建 表达 基因工程

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植物突变体库的作用及构建研究进展 被引量：13

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作者 高志勇 谢恒星 +1 位作者 王志平 刘史力 《作物杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期16-19,共4页

发生突变的个体叫作突变体。突变体往往具有与野生型不同的表型,这样就为缺失组分的功能研究提供了有益的信息。主要介绍了植物突变体库的作用及构建方法,重点论述了自发突变体库、理化诱变突变体库及T-DNA插入突变体库的构建原理与特征... 发生突变的个体叫作突变体。突变体往往具有与野生型不同的表型,这样就为缺失组分的功能研究提供了有益的信息。主要介绍了植物突变体库的作用及构建方法,重点论述了自发突变体库、理化诱变突变体库及T-DNA插入突变体库的构建原理与特征,并对植物突变体库的研究前景进行了展望。 展开更多

关键词 植物 突变体库 功能基因组 构建

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利用融合PCR技术和T载体克隆技术构建结核分枝杆菌PhoPR双组份系统缺失突变载体 被引量：2

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作者 王君 吴芳 +6 位作者 柳小玲 梁粟 张培培 章乐 吴江东 曹旭东 张万江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期276-280,共5页

目的基于融合PCR技术(SOE-PCR)、T载体克隆技术,构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)双组份系统缺失突变载体的方法。方法利用SOE-PCR技术,将PhoP、PhoR和PhoPR基因上、下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建PhoP、Pho... 目的基于融合PCR技术(SOE-PCR)、T载体克隆技术,构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)双组份系统缺失突变载体的方法。方法利用SOE-PCR技术,将PhoP、PhoR和PhoPR基因上、下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建PhoP、PhoR和PhoPR突变片段,然后将突变片段直接与T载体连接,将其转入E.coli DH5α感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得MTB PhoP、PhoR和PhoPR缺失突变载体。结果成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,与传统方法相比,效率高、周期短。结论基于融合PCR技术和T载体克隆技术成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,为下一步构建MTB突变株以及相关研究奠定基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 PhoPR双组份系统 缺失突变株 构建

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干扰烟草GA 20-氧化酶siRNA植物表达载体的构建及矮化烟草的产生 被引量：18

15

作者 谈心 杨宏 +1 位作者 乔定君 马欣荣 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期48-52,共5页

根据烟草(Nicotiana tabacum)GA 20-氧化酶基因序列,设计2对分别含有特定酶切位点的特异引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增目的基因(约250bp)片段.将正、反向目的片段分别插入中间载体的内含子两侧,再经BamHI和SacI双酶切回收约700bp的... 根据烟草(Nicotiana tabacum)GA 20-氧化酶基因序列,设计2对分别含有特定酶切位点的特异引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增目的基因(约250bp)片段.将正、反向目的片段分别插入中间载体的内含子两侧,再经BamHI和SacI双酶切回收约700bp的目的片段,插入到双元载体质粒p2355中,成功构建了含GA20-氧化酶基因片段的反向重复序列植物表达载体p23700,其转录产物能形成发夹RNA(hpRNA),产生小分子干扰RNA,干扰目的基因的表达.将p23700质粒导入根癌农杆菌EHA105中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得表型矮化的转基因烟草. 展开更多

关键词 烟草 赤霉素 GA 20-氧化酶 RNA干扰 重组载体构建 矮化突变体

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小鼠Fyn及其多种突变体的载体构建和蛋白生物活性预测分析 被引量：1

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作者 安磊 黄映雪 +4 位作者 胡新德 张伟 闫宇华 陈树林 赵善廷 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期635-641,共7页

旨在构建小鼠Fyn及其多种突变体真核表达载体,预测突变后的蛋白质二级结构和功能改变。克隆小鼠大脑皮质的Fyn基因,构建克隆质粒pMD18-T-Fynwt,经测序验证后,以pMD18-T-Fynwt为模板,针对不同突变位点设计引物,构建不同突变体克隆质粒并... 旨在构建小鼠Fyn及其多种突变体真核表达载体,预测突变后的蛋白质二级结构和功能改变。克隆小鼠大脑皮质的Fyn基因,构建克隆质粒pMD18-T-Fynwt,经测序验证后,以pMD18-T-Fynwt为模板,针对不同突变位点设计引物,构建不同突变体克隆质粒并验证,将Fyn不同的突变体克隆至真核表达载体pCAG-MCS,构建真核表达载体pCAG-MCS-Fyn**,将表达载体转染细胞进行检测,并对其进行生物信息学分析。测序结果显示pMD18-T-Fynwt核苷酸序列正确率100%,突变体完全达到预期设计;pCAG-MCS-Fyn**转染细胞后Fyn**表达量明显升高(P<0.01)。结果表明,Fyn突变体蛋白质的二级结构与野型相比有很大改变,可能影响其生物活性。 展开更多

关键词 FYN 载体构建 突变体 生物活性

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黑线仓鼠白化突变系抑制差减文库的构建及初步分析 被引量：2

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作者 李爱学 曾林 +3 位作者 尚世臣 王鹏 姚晓兰 孙兆增 《实验动物与比较医学》 CAS 2013年第1期19-22,共4页

目的构建黑线仓鼠白化突变系的抑制差减文库，分离获得黑线仓鼠发生被毛突变的相关基因片段，并进行初步分析。方法以黑线仓鼠作为实验组（tester），以其白化突变系作为驱动组（driver），采用抑制差减杂交技术构建差减文库（SSH）。... 目的构建黑线仓鼠白化突变系的抑制差减文库，分离获得黑线仓鼠发生被毛突变的相关基因片段，并进行初步分析。方法以黑线仓鼠作为实验组（tester），以其白化突变系作为驱动组（driver），采用抑制差减杂交技术构建差减文库（SSH）。对阳性克隆进行测序并分析。结果共获得126个有生物学意义的表达序列标签（ESTs），包括21个骨架蛋白，42个转录因子，24个代谢酶基因，25个转运分子及其调节蛋白和4个未知基因。差异基因中没有发现常见的白化疾病相关基因，发现多种与溶酶体的形成及内吞作用相关的基因，推测黑线仓鼠白化突变性状的产生可能与黑色素的运输障碍有关。结论成功构建了黑线仓鼠白化突变的抑制差减文库，获得126个白化突变的相关基因，为进一步寻找白化突变相关基因，揭示其分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 黑线仓鼠 白化突变 差减杂交 筛选

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金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达 被引量：11

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作者 张晓钰 李伟 +2 位作者 张竞 何笃修 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期888-892,共5页

金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高... 金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量，首先用ＰＣＲ 的方法设计引物，在基因翻译起始密码子ＡＴＧ 附近加入植物偏爱的碱基组合ＡＡＣＡＡＴＧ．另外，将该突变体基因插入具有双３５ Ｓ（ＣａＭＶ３５Ｓ）强启动子的植物双元表达载体ｐＧＰＴＶｄ３５Ｓ－ＢＡＲ中，获得了带有αα突变体的植物双元表达载体．通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草ＮＣ８９，获得了抗除草剂的转基因植株．经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和蛋白Ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测，证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达．抗重金属实验证明转基因烟草可以在Ｃｄ４００（４００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长． 展开更多

关键词 突变体 烟草转基因 抗性育种 MT 重金属

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集成干扰素突变体Ⅱ的分子构建、表达及提纯 被引量：4

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作者 牛晓霞 刘金毅 +1 位作者 杨轶 吴晓东 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1-5,共5页

目的:通过定点突变,构建集成干扰素突变体Ⅱ(IFN-Con-m2),以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇(PEG)修饰的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素突变体Ⅰ(IFN-Con-m1)基因的第86位密码子由TAC突变为TGC。将扩增... 目的:通过定点突变,构建集成干扰素突变体Ⅱ(IFN-Con-m2),以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇(PEG)修饰的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素突变体Ⅰ(IFN-Con-m1)基因的第86位密码子由TAC突变为TGC。将扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导后,表达的IFN-Con-m2经包涵体变复性、疏水层析、DEAE层析和凝胶过滤层析等纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。结果:IFN-Con-m2以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFN-Con-m2的纯度大于95%,比活性大于5.0×108IU/mg。结论:构建了IFN-Con-m2的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFN-Con-m2,建立了IFN-Con-m2的纯化工艺。 展开更多

关键词 集成干扰素突变体 定点突变 构建 表达 纯化

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构建微生物突变体的方法综述 被引量：4

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作者 张念章 逯忠新 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期68-71,共4页

生物学范畴内的突变是指细胞中的遗传物质发生可遗传的改变,包括DNA碱基对的置换、增添或缺失等结构的变化。人们利用突变生物体进行科学研究和培育新产品。综述了人工构建突变体的几种常用方法及原理,着重介绍了应用基因工程技术进行... 生物学范畴内的突变是指细胞中的遗传物质发生可遗传的改变,包括DNA碱基对的置换、增添或缺失等结构的变化。人们利用突变生物体进行科学研究和培育新产品。综述了人工构建突变体的几种常用方法及原理,着重介绍了应用基因工程技术进行微生物改造的方法,为科研工作和生产实践拓展思路。 展开更多

关键词 构建突变体 微生物 方法 原理 基因工程

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