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Enzyme-catalyzed synthesis of mannose ester and its enhancement of tanshinone and glycyrrhetinic acid lipid nanoparticles
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作者 Yue Li Jiexuan Wang +1 位作者 Xiuli Wang Xue Guo 《Journal of Traditional Chinese Medical Sciences》 2025年第3期390-401,共12页
Objective:To improve the efficiency of drug delivery,a mannose vinyl stearate mannose ligand(Man ligand)with active liver-targeting properties was synthesized.Methods:Non-aqueous enzymatic synthesis was used to modify... Objective:To improve the efficiency of drug delivery,a mannose vinyl stearate mannose ligand(Man ligand)with active liver-targeting properties was synthesized.Methods:Non-aqueous enzymatic synthesis was used to modify the structure of mannose.Glycyrrhetinic acid-tanshinone lipid nanoparticles(GT-LN)and liver-targeted glycyrrhetinic acid-tanshinone mannose-modified lipid nanoparticles(GT-MLN)were prepared.The physicochemical properties and release profiles of both formulations were evaluated,and their pharmacokinetic behavior and tissue distribution were investigated.Results:The average particle sizes of GT-LN and GT-MLN were 190.20±1.35 and 204.83±3.86 nm,respectively,with corresponding surface Zeta potentials of-28.0±1.68 and-30.24±2.10 mV.The drug release profile of GT-LN conformed to the Higuchi equation,whereas that of GT-MLN followed both the first-order kinetic and RitgerePeppas equations.Both formulations significantly enhanced the gastrointestinal stability of the drug.In vivo studies in mice demonstrated that hepatic GA and TSN concentrations in both groups were significantly higher than those in the original drug suspension group(P=.01).Notably,the concentrations in the GT-MLN group were significantly higher compared to the GTLN group(P=.01).Conclusion:Man ligand was formed via the linkage of vinyl stearate with the hydroxyl group at C-6 in mannose.The Manligand endowed these lipid nanoparticles with obvious active liver-targeting properties.Our results provide an efficient and stable route of drug delivery to the liver with improved drug availability. 展开更多
关键词 Non-aqueous enzyme catalysis mannose receptor Active liver targeting Lipid nanoparticles man ligand
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苏山猪MAN2A1基因克隆及其过表达对猪流感病毒复制的影响
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作者 戴超辉 崔乐康 +7 位作者 李碧侠 赵为民 李辉 付言峰 李伟宁 陈彦羽 包文斌 程金花 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期6007-6019,共13页
【目的】对苏山猪甘露糖苷酶α2A类成员1(mannosidase alpha class 2A member 1,MAN2A1)基因进行克隆和生物信息学分析,并揭示MAN2A1基因过表达对猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)复制的调控作用。【方法】本研究以苏山猪肺脏cDN... 【目的】对苏山猪甘露糖苷酶α2A类成员1(mannosidase alpha class 2A member 1,MAN2A1)基因进行克隆和生物信息学分析,并揭示MAN2A1基因过表达对猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)复制的调控作用。【方法】本研究以苏山猪肺脏cDNA为模板扩增MAN2A1基因编码区序列(CDS),并将目的片段通过T4 DNA连接酶克隆到pMD19-T载体上。将序列与其他物种及不同品种猪进行相似性比对并构建系统发育树;利用生物信息学软件对苏山猪MAN2A1蛋白序列特征进行分析;使用实时荧光定量PCR检测MAN2A1基因在苏山猪中的组织表达谱及MAN2A1基因过表达前后SIV M和NP基因的表达水平;使用AutoDock软件对MAN2A1蛋白与SIV M和NP蛋白进行分子对接预测。【结果】本研究成功克隆了苏山猪MAN2A1基因CDS区序列,其长度为3435 bp。与NCBI数据库公开的猪的MAN2A1基因序列(XM_003123823.6)相比,苏山猪MAN2A1基因CDS区存在6个单核苷酸多态位点(single nucleotide polymorphism sites,SNPs),包含2个错义突变和4个同义突变。不同物种MAN2A1基因系统进化树显示,猪MAN2A1基因与牛和羊亲缘关系最近,与灵长类关系次之,与家禽和斑马鱼亲缘关系最远;不同品种猪MAN2A1基因系统进化树显示,苏山猪MAN2A1基因与中国五指山猪亲缘关系最近,与杜洛克亲缘关系最远。生物信息学分析结果显示,苏山猪MAN2A1蛋白含1144个氨基酸,分子质量为131.42 ku,理论等电点为7.85;二级结构中α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲占比分别为33.65%、15.73%和50.61%;三级结构全局模型质量评估GMQE评分为0.9,质量较好;苏山猪MAN2A1蛋白含有3个结构域(第168-498、289-503和649-1140位氨基酸),主要定位在细胞质内的高尔基体中,可能与MAN1A1、FUT8和COPB2等蛋白存在相互作用。组织表达谱检测结果表明,苏山猪MAN2A1基因在肝脏和脾脏中的表达水平显著高于其他组织(P<0.05),在心脏和肌肉中的表达水平显著低于其他组织(P<0.05)。本研究成功构建了MAN2A1基因的过表达载体,与对照组相比,过表达组3D4/21细胞中MAN2A1基因水平显著上调(P<0.05);感染H1N1亚型SIV时,过表达MAN2A1基因导致病毒M和NP基因表达水平显著上调(P<0.05)。分子对接预测结果显示,MAN2A1蛋白与H1N1亚型SIV NP、M1和M2蛋白均可能存在相互作用关系(iptm+ptm>0.9),表明MAN2A1蛋白可能直接作用于NP和M蛋白进而调控H1N1亚型SIV的复制。【结论】本研究成功克隆了苏山猪MAN2A1基因CDS区序列,并发现苏山猪MAN2A1基因过表达促进了H1N1亚型SIV在3D4/21细胞中的复制,上述研究结果为进一步研究MAN2A1基因的功能和分子机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 man2A1基因 克隆 表达 猪流感病毒(SIV)
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ERAD信号通路中EDEM1和MAN1A1基因多态性与公猪精液品质性状的关联分析
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作者 李亚赛 冯越 +8 位作者 周佳伟 吴俊静 乔木 万绪玲 吴梦华 彭先文 梅书棋 杜志强 张宇 《中国畜牧杂志》 北大核心 2025年第8期178-183,共6页
在前期基因组研究的基础上,本研究从ERAD信号通路中筛选出2个可能影响公猪精液品质性状的候选基因:内质网降解增强α-甘露糖苷酶样蛋白1(ER Degradation Enhancingα-mannosidase-like Protein 1,EDEM1)与α-1,2-甘露糖苷酶(Alpha-Manno... 在前期基因组研究的基础上,本研究从ERAD信号通路中筛选出2个可能影响公猪精液品质性状的候选基因:内质网降解增强α-甘露糖苷酶样蛋白1(ER Degradation Enhancingα-mannosidase-like Protein 1,EDEM1)与α-1,2-甘露糖苷酶(Alpha-Mannosidase,MAN1A1)。通过一代测序发现候选基因EDEM1上存在g.61729627A>T位点,候选基因MAN1A1上存在g.42772917 G>A位点。在大白猪群体中进行关联分析,发现2个多态位点均能显著影响公猪精液品质。其中,EDEM1基因的g.61729627 A>T位点在多个精液性状中表现出显著关联,包括精子密度、有效精子密度、直线运动能力、精子活力、畸形率以及有效精子数;而MAN1A1基因的g.42772917 G>A位点则与精液量、精子密度、有效精子密度、精子活力、畸形率和有效精子数等性状密切相关,且EDEM1基因g.61729627A>T位点和MAN1A1基因g.42772917 G>A位点间存在互作。本文从公猪精液品质角度筛选出一些相关的候选基因和分子标记,为公猪精液品质性状改良提供了分子标记。 展开更多
关键词 SNP 精液品质性状 EDEM1基因 man1A1基因 关联分析
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山羊星状病毒Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 于皓同 马勇杰 +3 位作者 王凯茸 张琪 张淑霞 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期7-11,共5页
为建立快速检测山羊星状病毒(Caprine astrovirus)的方法,根据GenBank上收录的山羊星状病毒ORF1ab基因序列(OR652457)设计特异性探针和引物,构建重组质粒。以重组质粒为标准品进行反应条件优化及临床样品检测初步应用,旨在建立一种检测... 为建立快速检测山羊星状病毒(Caprine astrovirus)的方法,根据GenBank上收录的山羊星状病毒ORF1ab基因序列(OR652457)设计特异性探针和引物,构建重组质粒。以重组质粒为标准品进行反应条件优化及临床样品检测初步应用,旨在建立一种检测山羊星状病毒的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,该方法建立的标准曲线具有良好的线性关系;对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒、山羊贝氏柯克斯体、山羊支原体等均无交叉反应;对山羊星状病毒重组质粒标准品最低检测限为2.16×10^(1)copies/μL;批内和批间试验结果稳定,变异系数均小于2%;用建立的方法对收集的陕西省部分山羊场的115份腹泻粪便样品进行检测,结果显示山羊星状病毒阳性率为29.57%,与常规RT-PCR的检测结果符合率为94.78%。该方法为山羊星状病毒快速检测提供了技术支持。 展开更多
关键词 山羊星状病毒 Taq man荧光定量PCR 检测方法
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猪A群轮状病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立与运用
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作者 林青 康龙滨 +5 位作者 吴瑞森 赵文娟 陈秋勇 王隆柏 周伦江 俞道进 《福建农业学报》 北大核心 2025年第4期370-376,共7页
【目的】建立一种猪A群轮状病毒(porcine rotavirus group A, PoRV A)快速检测方法,用于PoRV检测和流行病学调查。【方法】参考GenBank中猪A群轮状病毒(PoRVA)VP6基因序列(登录号MT025937.1、OP978242.1、PP566178.1)设计特异性引物和探... 【目的】建立一种猪A群轮状病毒(porcine rotavirus group A, PoRV A)快速检测方法,用于PoRV检测和流行病学调查。【方法】参考GenBank中猪A群轮状病毒(PoRVA)VP6基因序列(登录号MT025937.1、OP978242.1、PP566178.1)设计特异性引物和探针,优化反应体系中引物和探针的浓度,建立Taq Man RT-qPCR检测方法,并通过特异性、灵敏性和重复性的结果以及临床应用对该方法进行评价。【结果】该方法可特异性扩增PoRV核酸,最低检出限度为27.0 copies·μL^(-1),灵敏度高于普通RT-PCR 100倍;与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(porcinedeltacoronavirus,PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis of swine, TGEV)核酸均无交叉反应;组内和组间变异系数均小于1.10%,重复性好。151份疑似PoRV的临床样品使用RT-qPCR进行检测,结果显示检出率为42.38%(64/151),优于常规RT-PCR的检出率(33.11%,50/151)。【结论】本研究基于猪A群轮状病毒VP6基因,建立了适用于PoRV A检测及其流行病学调查的Taq Man实时荧光定量PCR检测方法,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优势,为猪轮状病毒检测和流行病学调查提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 Taq man探针 荧光定量RT-PCR
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酰胺直接转化方法在(–)-Sedacryptine和(–)-Geissman-Waiss内酯合成中的应用
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作者 徐业鹏 阮义 +1 位作者 郑剑峰 黄培强 《有机化学》 北大核心 2025年第3期988-995,共8页
酰胺是一类价廉易得的合成原料, 也是全合成重要的合成中间体. 由于酰胺在温和条件下的化学选择性直接转化有较高的步骤经济性, 因此具有重要的合成意义. 黄培强课题组于2010年报道了酰胺直接还原(脱氧官能化)反应, 随后又发展了一系列... 酰胺是一类价廉易得的合成原料, 也是全合成重要的合成中间体. 由于酰胺在温和条件下的化学选择性直接转化有较高的步骤经济性, 因此具有重要的合成意义. 黄培强课题组于2010年报道了酰胺直接还原(脱氧官能化)反应, 随后又发展了一系列高化学选择性的酰胺还原与转化方法, 所发展的方法被国内外同行广泛地应用于多类生物碱和含氮药物的合成中. 此研究以该课题组发展的基于酰胺的脑文格(Knoevenagel-type)缩合反应及酰胺的化学选择性还原方法为关键步骤, 以简洁的合成路线(7步和4步)分别完成了生物碱(–)-Sedacryptine (1)的形式全合成和(–)-Geissman- Waiss内酯衍生物(3aS,6aS)-4-(4-甲氧基苄基)六氢-2H-呋喃[3,2-b]吡咯-2-酮(9)及其同系物(3aS,7aS)-4-(4-甲氧基苄基)六氢呋喃[3,2-b]吡啶-2(3H)-酮(10)的合成. 展开更多
关键词 酰胺 脑文格反应 铱-硼共催化还原 (–)-Sedacryptine (–)-Geissman-Waiss内酯
原文传递
基于TaqMan探针多重实时荧光PCR快速检测大豆检疫性病原菌
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作者 李辉 付海滨 +4 位作者 李雪梅 薛腾 张学梅 薛春生 李鑫 《植物保护》 北大核心 2025年第6期245-254,共10页
为实现进口大豆中检疫性病原菌的精准、快速检测,减少外来有害生物入侵风险,本研究以大豆南方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.meridionalis、大豆北方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.caulivora和大豆茎褐腐病菌Cadophora gr... 为实现进口大豆中检疫性病原菌的精准、快速检测,减少外来有害生物入侵风险,本研究以大豆南方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.meridionalis、大豆北方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.caulivora和大豆茎褐腐病菌Cadophora gregata 3种常见检疫性病原菌为研究对象,以翻译延长因子1α基因(TEF1α)和β-微管蛋白基因(TUB2)为靶标设计特异性引物与TaqMan探针,构建可快速检测3种病菌的TaqMan探针多重qPCR检测体系。研究结果表明,3种病原菌DNA样品等浓度混合时,TaqMan探针多重qPCR体系内各组引物探针对目标菌株均能特异性扩增,未出现交叉反应,最低检测浓度为10.0 pg/μL,在检测范围内R2均大于0.99,且重复性较好,3种病原菌的TaqMan探针多重与单重qPCR检测体系定量线性范围几乎一致。本研究构建的检测方法能够高效、精准地完成进口大豆中3种常见检疫性病原菌的检疫鉴定与疫情监测工作,可为口岸外来有害生物防控工作开展、我国生态安全保障提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 TAQman探针 多重实时荧光PCR 检测 大豆 检疫性病原菌
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1种牛轮状病毒Taq-Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 王秀明 陈君彦 +1 位作者 础鲁 刘艳霞 《现代畜牧兽医》 2025年第3期11-15,共5页
试验旨在建立一种可简便、快速地检测牛轮状病毒(BRV)的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法,试验通过分析比对NCBI下载的BRV VP7基因序列,在VP7基因的保守区设计两对特异性引物及Taq-Man探针,经反应条件优化,建立BRV的Taq-Man荧光定量RT-PCR方... 试验旨在建立一种可简便、快速地检测牛轮状病毒(BRV)的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法,试验通过分析比对NCBI下载的BRV VP7基因序列,在VP7基因的保守区设计两对特异性引物及Taq-Man探针,经反应条件优化,建立BRV的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法。利用建立的检测方法检测标准品,绘制标准曲线,检测方法的特异性、灵敏性和稳定性,并对临床样品及疫苗半成品进行检验。结果显示,建立的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法的最低检测限为10 copies/μL,组内和组间重复变异系数(CV)均小于3.50%。检测临床样品和疫苗半成品,疫苗半成品均检测阳性,临床样品检测阳性率69%。研究表明,BRV Taq-Man荧光定量RTPCR检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,对BRV的诊断检测及疫苗生产具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(BRV) Taq-man探针 荧光定量RT-PCR VP7基因
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A study of the landforms and megafaunal characteristics of the Caiwei Guyot area by manned submersible image datadriven technology
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作者 Zhongjun Ding Xingyu Wang +2 位作者 Chen Liu Guangyang Ma Chanjuan Cao 《Acta Oceanologica Sinica》 2025年第1期147-164,共18页
Scientific and precise evaluations of the megafaunal and landform characteristics of seamounts are important guides for their protection and study.A series of manned and unmanned submersibles have provided invaluable ... Scientific and precise evaluations of the megafaunal and landform characteristics of seamounts are important guides for their protection and study.A series of manned and unmanned submersibles have provided invaluable observational imaging data for the ecological study of seamounts.However,traditional methods of artificial observation of seamount imaging data cannot accurately and efficiently determine the characteristics of megafauna and landforms.This research harnesses data-driven technology to systematically investigate the distributional traits and morphological features of megafaunal organisms,as well as the topographical characteristics,in the Caiwei Guyot region of the western Pacific’s Magellan Seamounts.To construct the landform and megafauna dataset of the Caiwei Guyot region,we used a data preprocessing technology based on image enhancement to provide high-quality imaging data for data-driven technologies.A megafaunal identification and counting algorithm based on YOLOv5(You Only Look Once Version 5)was developed to efficiently assess the abundance,variety,and dominant species of megafauna.Simultaneously,a landform three-dimensional(3D)reconstruction algorithm based on PatchmatchNet was developed to reconstruct the 3D form of the terrain accurately.This study pioneers the application of data-driven technology to deep-sea imaging within the Caiwei Guyot region,offering an innovative approach to accurately and efficiently characterize the region’s unique megafauna and landforms. 展开更多
关键词 manned submersible imaging DATA-DRIVEN Caiwei Guyot LANDFORMS MEGAFAUNA
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MAN主机CPP控制板用PLC替代的实施方案
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作者 李志刚 李振江 +1 位作者 吕红宾 寇忠祥 《天津航海》 2025年第2期20-22,共3页
文章探讨了使用可编程逻辑控制器(PLC)替代MAN主机CPP控制板(ASP12)的可行性和实施方案,结合实际项目,详细地说明了PLC选型、编程设计、系统集成等内容,并研发了ASP12-PLC控制板,旨在为中油海工船舶设备实现升级换代,以提升系统可靠性... 文章探讨了使用可编程逻辑控制器(PLC)替代MAN主机CPP控制板(ASP12)的可行性和实施方案,结合实际项目,详细地说明了PLC选型、编程设计、系统集成等内容,并研发了ASP12-PLC控制板,旨在为中油海工船舶设备实现升级换代,以提升系统可靠性、灵活性、可维护性及经济性。 展开更多
关键词 man主机 CPP控制板 ASP12 PLC替代
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A Spider-Man themed park
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作者 陈萍萍 《疯狂英语(新读写)》 2025年第9期9-11,75,共4页
Shanghai Disney Resort broke ground on a new Spider⁃Man⁃themed land,a major expansion that represents a rising global investment interest in Chinas theme park sector.Located close to Zootopia,the new land includes the... Shanghai Disney Resort broke ground on a new Spider⁃Man⁃themed land,a major expansion that represents a rising global investment interest in Chinas theme park sector.Located close to Zootopia,the new land includes the parks first major Marvel⁃themed attraction-a high⁃energy thrill roller coaster featuring Spider⁃Man,one of the most popular Marvel superheroes,according to the company. 展开更多
关键词 global investment theme park shanghai disney resort marvel roller coaster spider man theme park sector
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The Literary Effects of Metaphors and Symbolism:A Case Study on Invisible Man by Ralph Ellison
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作者 XIONG Zi-yan WANG Peng-fei 《Journal of Literature and Art Studies》 2025年第5期391-397,共7页
Invisible Man is a novel written by Ralph Ellison,talking about how the protagonist struggled in society as an African-American,sought his own identity and sense of belonging,and finally accepted the reality of being... Invisible Man is a novel written by Ralph Ellison,talking about how the protagonist struggled in society as an African-American,sought his own identity and sense of belonging,and finally accepted the reality of being“invisible”to live underground.The metaphors and symbols as key writing techniques in Invisible Man were analyzed in the paper with certain typical examples to reveal their research values for explorations of race issues in the book.The paper particularly highlights the tension embedded in the metaphors and the sarcasm conveyed through the symbols. 展开更多
关键词 Invisible man metaphorical tension symbolic sarcasm
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Unveiling Modern Saudi Society and Culture in Aziz Mohammed’s The Critical Case of a Man Called K
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作者 Shahad Alfaqih 《Cultural and Religious Studies》 2025年第2期58-64,共7页
Since modern Saudi novel vividly captures the essence of cultural and social life in Saudi Arabia,this paper aims to unveil the manifestation of historical events that generated new issues and discourses shaping moder... Since modern Saudi novel vividly captures the essence of cultural and social life in Saudi Arabia,this paper aims to unveil the manifestation of historical events that generated new issues and discourses shaping modern Saudi culture and society as depicted in Aziz Mohammed’s The Critical Case of a Man Called K(2021).The examination of its cultural and social context,thus,serves as an evaluation of a historical record that depicts the episteme of modern Saudi society.However,as ample as previous works on Saudi literature may be,most of them disregard the use of New Historicism in examining modern Saudi novels.This paper,therefore,utilizes New Historicism to unveil the nature of modern Saudi episteme as depicted by the young author Aziz Mohammed in The Critical Case of a Man Called K(2021)and to gain insight into modern Saudi discourses and issues shaped by historical and economic events.The study finds that the novel depicts a dystopian reality due to the implications of both late capitalism and globalization in modern Saudi Arabia.Furthermore,the novel highlights how far the discourse of Saudi Vision 2030,with its various aims,penetrates both society and culture,shaping a great part of modern Saudi episteme.The paper concludes by affirming Mohammed’s novel assertion of New Historicism’s main assumption that the text cannot be divorced from its historical,cultural,and social context and that it serves as a record indicative of a specific and unique episteme. 展开更多
关键词 Aziz Mohammed GLOBALIZATION late capitalism modern Saudi literature New Historicism Saudi Vision 2030 The Critical Case of a man Called K
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MAN B&W ME-B电喷主机ME-V阀故障
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作者 沈万东 《中国船检》 2025年第4期87-90,共4页
某5万吨级油轮配备的MAN B&W 6S50ME-B 9.3T2主机在航行期间,因ME-V阀反馈失败导致多次自动降速。经排查,发现NO.1缸ME-V阀驱动活塞与本体磨损卡阻,加之低温环境加剧液压油粘度变化,最终触发故障。更换ME-V阀总成后,故障得以解决。... 某5万吨级油轮配备的MAN B&W 6S50ME-B 9.3T2主机在航行期间,因ME-V阀反馈失败导致多次自动降速。经排查,发现NO.1缸ME-V阀驱动活塞与本体磨损卡阻,加之低温环境加剧液压油粘度变化,最终触发故障。更换ME-V阀总成后,故障得以解决。案例以故障现象为切入点,详细呈现排查逻辑与解决路径,并提出的预防性策略,有效降低电喷主机因局部故障导致系统性风险的概率。 展开更多
关键词 man BW ME-B电喷主机
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牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 蒲鹏 李晨露 +2 位作者 张琪 吴发兴 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期7-10,共4页
为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan... 为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,建立的牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性、敏感性和重复性均良好。该方法BCoV重组质粒标准品在5.75×10^(7)~5.75×10^(3)copies/μL时与Ct值呈现良好线性关系,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型均无交叉反应,特异性良好;该方法对BCoV重组质粒标准品最低检测限为5.75×10^(1)copies/μL;批内和批间重复性试验结果稳定,变异系数均小于2%。利用所建立的TaqMan荧光定量PCR方法对收集的132份样品进行检测,与常规PCR相比,两者符合率为96.21%,可为BCoV的临床检测和流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 Taqman荧光定量PCR 检测方法
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Reading man皮瓣修复术治疗皮肤缺损的疗效观察
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作者 王鸣 严炜 +3 位作者 汤由之 朱喆辰 史京萍 马秀云 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期557-561,共5页
目的:探讨Reading man皮瓣修复术在全身不同部位皮肤缺损及其预防瘢痕增生的临床疗效。方法:回顾性分析2021年1月—2023年10月该科应用Reading man皮瓣修复术治疗全身不同部位皮肤软组织缺损的20例患者临床资料。结果:所有患者皮瓣均成... 目的:探讨Reading man皮瓣修复术在全身不同部位皮肤缺损及其预防瘢痕增生的临床疗效。方法:回顾性分析2021年1月—2023年10月该科应用Reading man皮瓣修复术治疗全身不同部位皮肤软组织缺损的20例患者临床资料。结果:所有患者皮瓣均成活。术后随访时间为3~24个月,所有皮瓣血运良好,色泽红润,质地柔软,外观适宜,局部皮肤张力较低,手术切口瘢痕增生不明显,切口周围软组织无明显形变,周围关节活动度正常。所有患者均恢复良好,疗效满意。结论:Reading man皮瓣特有的设计可以很好地解决全身多部位较大的皮肤软组织缺损,尤其在术中可以最大限度地减少正常皮肤的切除,术后外观、功能及皮肤瘢痕增生均有较满意的表现,且不存在自体皮移植带来的供皮区损伤。 展开更多
关键词 Reading man皮瓣 皮瓣血运 张力 瘢痕增生
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大口黑鲈弹状病毒Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:3
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作者 孔明慧 梁红茹 +5 位作者 李宁求 林强 牛银杰 罗霞 马宝福 付小哲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期379-384,共6页
为建立快速、敏感的大口黑鲈弹状病毒(MSRV)流行株Taq Man荧光定量PCR (qPCR)方法,本研究采用NCBI分析MSRV流行株N基因的保守序列,设计特异性引物和Taq Man探针,以构建的并经PCR和测序鉴定正确的重组质粒标准品p MD18-MSRV-N为模板,通... 为建立快速、敏感的大口黑鲈弹状病毒(MSRV)流行株Taq Man荧光定量PCR (qPCR)方法,本研究采用NCBI分析MSRV流行株N基因的保守序列,设计特异性引物和Taq Man探针,以构建的并经PCR和测序鉴定正确的重组质粒标准品p MD18-MSRV-N为模板,通过优化各反应条件初步建立MSRV的Taq Man q PCR检测方法。结果显示,建立的Taq Man q PCR方法标准曲线的R2为0.9906,质粒标准品在6.79×10^(8)拷贝/μL~6.79×10^(2)拷贝/μL范围内与Ct值均存在较好的线性关系。采用该方法检测MSRV及相关病毒,评估该方法的特异性,结果显示,该方法可以特异性检测MSRV,而草鱼出血病病毒、神经坏死病毒、鲤春病毒血症病毒、大口黑鲈双RNA病毒、鳜蛙虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、石斑鱼虹彩病毒、大口黑鲈蛙虹彩病毒等8种常见鱼类病毒检测结果均为阴性;采用建立的方法检测不同浓度的质粒标准品(6.79×10^(8)拷贝/μL~6.79×10^(1)拷贝/μL),评估该方法的敏感性,结果显示,该方法的检测限为6.79×10^(2)拷贝/μL,比文献中的常规PCR方法敏感1 000倍;以不同批次或同一批次提取的不同浓度的质粒标准品作为模板,分别利用该方法检测,评估该方法的重复性,结果显示,该方法批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。采用该方法和文献中的常规PCR同时检测71份临床发病的大口黑鲈、鳜鱼、鲮鱼组织样品,结果显示阳性率为16.9%(12/71),阴性率为83.1%(59/71),且阳性样品均是从发病大口黑鲈的组织样品中检测到,而发病的鳜鱼、鲮鱼组织样品中均未检测到该病毒;常规PCR方法的阳性率为9.9%(7/71),阴性率为90.1%(64/71),二者的总符合率为93.0%。本研究建立的MSRV Taq Man q PCR方法特异性强、敏感性高、重复性和准确性均较好,可用于大口黑鲈临床样品的检测,为MSRV的快速检测提供了可行的技术手段。 展开更多
关键词 大口黑鲈弹状病毒 Taq man荧光定量PCR N基因
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鸡毒支原体 Taq Man实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 孙宇 苗立中 +6 位作者 程立坤 赵家磊 赵修报 沈志强 王敬茹 李书光 余燕 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期64-68,共5页
为快速检测鸡毒支原体,根据鸡毒支原体的保守基因设计特异性引物和Taq Man探针,建立鸡毒支原体Taq Man实时荧光定量PCR方法并分析鸡毒支原体培养过程中颜色单位改变法(color change unit,CCU)和荧光定量PCR检测的相关性。结果显示,标准... 为快速检测鸡毒支原体,根据鸡毒支原体的保守基因设计特异性引物和Taq Man探针,建立鸡毒支原体Taq Man实时荧光定量PCR方法并分析鸡毒支原体培养过程中颜色单位改变法(color change unit,CCU)和荧光定量PCR检测的相关性。结果显示,标准曲线y=-3.646x+44.208,相关系数R^(2)=0.998,最低检测限度为1 copy/μL;与其他菌株等均无交叉反应;组内和组间变异系数均小于3%,表明该方法具有良好的稳定性和可重复性。用建立的实时荧光定量PCR检测方法对26份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法检出率更高。建立的荧光定量PCR与CCU显示鸡毒支原体在对数生长期时,两者具有一定的对应关系。表明建立了鸡毒支原体Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,可实现对鸡毒支原体的快速检测,为鸡毒支原体感染的防控提供技术基础。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 Taq man探针 荧光定量PCR
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TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒 被引量:6
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作者 孙爱青 王丽花 +3 位作者 张艺萍 杨秀梅 许凤 苏艳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期219-227,239,共10页
为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标... 为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法。该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10^(-3)fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10^(-2)fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好。利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV)。综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 TAQman探针 RT-QPCR 兰花
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羊贝氏柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 张锐铮 于皓同 +3 位作者 王凯茸 张琪 张淑霞 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期6-10,共5页
为建立检测贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)实时荧光定量PCR方法,根据GenBank上收录的C.burnetii RSA439株com1基因序列(CP040059.1)保守区设计特异性引物和探针,并构建重组质粒及优化反应条件,以期建立一种检测贝氏柯克斯体的Taq Man... 为建立检测贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)实时荧光定量PCR方法,根据GenBank上收录的C.burnetii RSA439株com1基因序列(CP040059.1)保守区设计特异性引物和探针,并构建重组质粒及优化反应条件,以期建立一种检测贝氏柯克斯体的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,该方法所建立标准曲线线性关系良好;敏感性试验结果显示,最低检出限为2.45×10^(2) copies/μL,与PCR最低检出限为2.45×10^(4) copies/μL相比较,灵敏度提高了100倍;对羊支原体、羊流产衣原体、羊布鲁氏菌等均无交叉反应,批内和批间重复性试验结果稳定,变异系数均小于3%,说明特异性、重复性好;利用该方法对收集的126份样品进行检测,结果显示样品阳性率为9.52%,常规PCR检测阳性率为7.14%,符合率为90.47%。该方法可为贝氏柯克斯体临床上快速检测及防控提供技术支持。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯 Taq man荧光定量PCR 检测方法
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