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利用CRISPR/Cas9系统构建Lrtm1基因敲除的C2C12细胞系 被引量：4
1
作者 李浩可 何衍佶 +5 位作者 时迎旭 杨丹 尹凤 高彦飞 聂茂 邓忠良 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1127-1133,共7页
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除Lrtm1(leucine-rich repeats and transmenbrane domains 1)基因的C2C12细胞系,为研究Lrtm1基因的作用提供实验基础。方法:设计3对针对Lrtm1基因的向导RNA(sgRNA),将sgRNA插入载体pCRISPRLvSG06中... 目的:利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除Lrtm1(leucine-rich repeats and transmenbrane domains 1)基因的C2C12细胞系,为研究Lrtm1基因的作用提供实验基础。方法:设计3对针对Lrtm1基因的向导RNA(sgRNA),将sgRNA插入载体pCRISPRLvSG06中;利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒pCRISPR-LvSG06;将病毒感染C2C12细胞,并加入嘌呤霉素筛选,将筛选嘌呤霉素阳性的细胞提取RNA,逆转录成c DNA;设计Cas9引物,利用cDNA为模版,PCR验证C2C12细胞中Cas9的表达,确认慢病毒成功感染C2C12细胞;利用96孔板挑选单克隆细胞的方法筛选得到单克隆细胞;将扩增的单克隆细胞提取基因组DNA,测序Lrtm1基因相关序列并与野生型Lrtm1基因进行对比,确认敲除成功的克隆细胞株;诱导敲除Lrtm1稳定细胞株成肌分化,检测成肌分化标志因子Myosin的蛋白表达,RT-PCR检测转录因子PAX7的mRNA表达,Western blot检测H3K27me3蛋白水平。结果:测序结果显示向导RNA(sgRNA)成功插入载体质粒;将单克隆细胞DNA测序结果显示A和C克隆成功敲除Lrtm1基因;敲除Lrtm1基因后成肌分化标志因子Myosin蛋白表达降低,成肌转录因子PAX7 mRNA的表达降低,在分化72和96 h组,H3K27me3蛋白水平较野生型组增高。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功敲除Lrtm1基因,稳定敲除Lrtm1基因的C2C12细胞系构建成功;敲除Lrtm1后能抑制C2C12细胞成肌分化,并且抑制成肌转录因子PAX7的m RNA表达,PAX7mRNA表达降低的原因可能为H3K27me3水平增高。 展开更多
关键词 lrtm1 CRISPR/cas9 基因敲除 C2C12
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Lrtm1基因在成肌分化过程中的功能探索 被引量：1
2
作者 熊雷 李浩可 +1 位作者 聂茂 邓忠良 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1292-1298,共7页
目的:观察成肌分化过程中C2C12细胞Lrtm1表达;构建小鼠Lrtm1慢病毒过表达载体;筛选稳定表达外源Lrtm1细胞株诱导其分化后观察对成肌分化标志基因Myogenin、Myosin的影响;发现Lrtm1蛋白质表达水平受调控的机制。方法:诱导C2C12细胞分化用... 目的:观察成肌分化过程中C2C12细胞Lrtm1表达;构建小鼠Lrtm1慢病毒过表达载体;筛选稳定表达外源Lrtm1细胞株诱导其分化后观察对成肌分化标志基因Myogenin、Myosin的影响;发现Lrtm1蛋白质表达水平受调控的机制。方法:诱导C2C12细胞分化用Hoechst染色细胞核;将小鼠Lrtm1基因连接到慢病毒载体质粒pLJM1-GFP上并进行慢病毒包装;筛选稳定过表达Lrtm1基因的C2C12细胞系,诱导分化Lrtm1-DDK组、GFP组检测对成肌分化标志基因Myogenin、Myosin表达的影响;MG132处理C2C12-Lrtm1-DDK细胞系后,观察内源性Lrtm1蛋白质表达。结果:诱导分化过程中,肌管形成,Lrmt1、Myosin mRNA水平随分化的进行表达上升;成功构建重组pLJM1-Lrtm1-DDK表达载体;成功筛选稳定表达外源Lrtm1细胞株;诱导稳定细胞系分化后,real-time PCR在144 h时显示Lrtm1-DDK组(272.1±18.22)Myogenin mRNA水平较GFP组(332.41±41.21)减少(P<0.05);Lrtm1-DDK组(76.11±10.47)Myogenin mRNA水平较GFP组(145.51±10.02)减少(P<0.05);C2C12细胞中Lrtm1蛋白质被蛋白酶体降解。结论:Lrtm1基因在成肌分化过程中高表达;过表达Lrtm1基因部分抑制了Myogenin、Myosin基因的表达;Lrtm1蛋白质表达水平受蛋白酶体降解调控。 展开更多
关键词 lrtm1基因 成肌分化 慢病毒载体 肌减少症
原文传递
树脂基复合材料成型工艺研究进展 被引量：17
3
作者 乔东 胡红 《塑料工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第B06期11-13,17,共4页
主要综述了树脂基复合材料的几种成型工艺,包括RTM、VARTM、CRTM、LRTM、RFI、VARI、SCRIMP、SRIM、TERM,各自的发展现状、成型原理、特点等。
关键词 RTM VARTM CRTM lrtm RFI VARI SCRIMP SRIM TERM 现状
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成肌分化过程中相关因子的研究进展 被引量：2
4
作者 张栋 王欣 +1 位作者 史东林(综述) 熊雷(审校) 《现代医药卫生》 2022年第15期2588-2593,共6页
人体在进行非习惯性运动后容易造成肌肉损伤,肌肉损伤后在一定程度上可以修复。在分子水平方面,肌纤维由成肌细胞(卫星细胞)增殖分化,融合成肌管而形成。有相关研究报道,Lrtm1基因可能参与膈肌的形成,而膈肌是典型的骨骼肌。因此,该文推... 人体在进行非习惯性运动后容易造成肌肉损伤,肌肉损伤后在一定程度上可以修复。在分子水平方面,肌纤维由成肌细胞(卫星细胞)增殖分化,融合成肌管而形成。有相关研究报道,Lrtm1基因可能参与膈肌的形成,而膈肌是典型的骨骼肌。因此,该文推测Lrtm1基因可能与骨骼肌形成有关,并且对Lrtm1基因参与调控成肌分化可能的信号通路进行相关推测。在骨骼肌形成过程中涉及多种成肌分化因子的参与,除上述Lrtm1基因外,该文将对现阶段所研究出来的参与成肌转录的调控因子(MEF2、MyoD、Pax3/Pax7、Myogenin)进行简要综述。 展开更多
关键词 lrtm1 运动性损伤 成肌分化 综述
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