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EBV LMP2A对胃癌细胞生物学特性的影响 被引量:3
1
作者 蒋叶 冯国开 +3 位作者 陈健宁 张娜娜 曾木圣 邵春奎 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期28-35,共8页
【目的】探讨EBV LMP2A基因对人胃癌细胞生物学特性的影响。【方法】用包含LMP2A基因的逆转录病毒载体转染人胃癌细胞株(SGC7901),QRT-PCR检测LMP2A基因的表达,CCK8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕试验和transwell检测细... 【目的】探讨EBV LMP2A基因对人胃癌细胞生物学特性的影响。【方法】用包含LMP2A基因的逆转录病毒载体转染人胃癌细胞株(SGC7901),QRT-PCR检测LMP2A基因的表达,CCK8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕试验和transwell检测细胞迁移能力;克隆形成试验检测细胞成瘤能力。【结果】LMP2A基因转染的胃癌细胞生长速度增快、凋亡减少、迁移能力增强,在平板和软琼脂中集落形成能力增强。【结论】LMP2A基因能明显增强胃癌细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 EBV lmp2a 转染 胃癌 SGC7901 凋亡 生物学特性
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EB病毒潜伏期膜蛋白LMP2A对胃癌细胞增殖的影响 被引量:6
2
作者 高玉 纪静 +2 位作者 朱伟 王云 罗兵 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第2期108-113,共6页
目的:构建EBV潜伏期膜蛋白基因LMP2A的腺病毒表达载体,探讨LMP2A表达对胃癌细胞的作用.方法:RT-PCR扩增获取目的基因LMP2A,采用AdEasy系统构建携带目的基因的重组腺病毒载体pAd-2A,脂质体法将重组质粒pAd-2A转染HEK293细胞包装重组腺病... 目的:构建EBV潜伏期膜蛋白基因LMP2A的腺病毒表达载体,探讨LMP2A表达对胃癌细胞的作用.方法:RT-PCR扩增获取目的基因LMP2A,采用AdEasy系统构建携带目的基因的重组腺病毒载体pAd-2A,脂质体法将重组质粒pAd-2A转染HEK293细胞包装重组腺病毒.用重组腺病毒感染靶细胞SGC(胃癌细胞),通过MTT实验、流式细胞分析、激光共聚焦检测目的基因LMP2A表达对靶细胞增殖的影响.结果:限制性酶切、PCR及测序鉴定证实,目的基因LMP2A正确插入重组质粒,HEK293细胞成功包装出具有稳定感染性的重组腺病毒,命名为vAd-2A,经测定病毒滴度为3.16×10^(12)pfu/L.MTT实验、流式细胞分析以及激光共聚焦检测结果显示,感染腺病毒vAd-2A的SGC细胞增殖旺盛(感染vAd-2A细胞vs感染vAd细胞和未感染病毒细胞,P<0.01),S期细胞比例升高(24 h:35.2%±5.1%vs 14.0%±3.4%,13.2%±4.6%,P<0.01;48 h:25.6%±4.1%vs 12.9%±2.6%,12.5%±3.2%,P<0.01),LMP2A可诱导细胞周期调节蛋白cyclinE的表达.结论:成功构建了EBV潜伏期膜蛋白基因LMP2A的重组腺病毒表达载体,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒,同时证实LMP2A可通过诱导cyclinE的表达促进SGC细胞增殖. 展开更多
关键词 EB病毒 重组腺病毒 lmp2a 胃癌细胞
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EB病毒LMP2A和EB病毒BZLF1融合基因反转录病毒表达载体的构建 被引量:3
3
作者 朱伟 徐爱晶 罗兵 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第50期10109-10112,共4页
目的:将LMP2A和BZLF1基因进行融合同时可发挥LMP2A诱导特异性CTL和BZLF1基因诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用,协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞。实验拟构建含EB病毒潜伏膜蛋白2A编码基因和即刻早期基因融合基因的反转录病毒表达载体,并... 目的:将LMP2A和BZLF1基因进行融合同时可发挥LMP2A诱导特异性CTL和BZLF1基因诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用,协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞。实验拟构建含EB病毒潜伏膜蛋白2A编码基因和即刻早期基因融合基因的反转录病毒表达载体,并筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系。方法:实验于2006—08/2007—08在济宁医学院微生物教研室和青岛大学医学院微生物教研室进行。应用反转录-聚合酶链反应分别获得潜伏膜蛋白2A和即刻早期基因编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接.构建融合基因Z2A。将融合基因Z2A定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVpuro,形成重组质粒pMSCVpuro-Z2A,脂质体法将pMSCVpuro-Z2A转染反转录病毒包装细胞PT67。嘌呤霉素筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒进行滴度测定,RT-PCR检测产毒PT67细胞目的基因的转录表达。结果:限制性酶切、PCR及测序鉴定证实Z2A正确插入逆转录病毒表达载体,筛选获得了稳定产毒的嘌呤霉素抗性细胞克隆,收获病毒的滴度为7.8×10^6CFU/L,且重组逆转录病毒在PT67细胞能有效转录。结论:携带Z2A基因的重组反转录病毒表达载体pMSCVpuro-Z2A构建成功,转染PT67细胞后包装出重组反转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Z2A的产毒细胞系PT67-Z2A。 展开更多
关键词 lmp2a BZLF1 融合基因 逆转录病毒 表达载体
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含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测 被引量:1
4
作者 陈云 姚堃 +4 位作者 孙华 彭光勇 丁传林 谢芳艺 周峰 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期297-300,共4页
目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体,并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法:用EcoR I和Not I将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后,克隆到毕氏酵母载体PICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-LMP2A。pICZαA-LMP2A经Sac I酶切... 目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体,并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法:用EcoR I和Not I将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后,克隆到毕氏酵母载体PICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-LMP2A。pICZαA-LMP2A经Sac I酶切线性化,采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GS115,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株,用PCR鉴定阳性酵母转化子,并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳和western-blotting分析。结果:重组质粒pPICZαA-LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性。SDS-PAGE电泳和western-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54 Kda,与预计值相同。结论:构建了LMP2A毕氏酵母表达载体,并在酵母细胞中成功表达。 展开更多
关键词 EB病毒 lmp2a基因 毕氏酵母 氯化锂 酵母细胞 肿瘤免疫疗法
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LMP2A、YAP及P27蛋白在鼻咽癌中的表达及与临床病理特征、预后的关系 被引量:2
5
作者 王莹 兰艳丽 +1 位作者 兰小娇 赵维 《解放军医药杂志》 CAS 2021年第11期36-40,共5页
目的分析外源性表达潜伏膜蛋白2A(LMP2A)、Yes相关蛋白(YAP)及P27蛋白在鼻咽癌(NPC)中的表达及与临床病理特征、预后的关系。方法收集2016年1月—2018年1月我院行手术收治的NPC 81例活检术石蜡标本作为NPC组,46例鼻炎黏膜慢性炎组织标... 目的分析外源性表达潜伏膜蛋白2A(LMP2A)、Yes相关蛋白(YAP)及P27蛋白在鼻咽癌(NPC)中的表达及与临床病理特征、预后的关系。方法收集2016年1月—2018年1月我院行手术收治的NPC 81例活检术石蜡标本作为NPC组,46例鼻炎黏膜慢性炎组织标本作为对照组。收集2组患者临床资料,比较LMP2A、YAP及P27蛋白表达情况;分析LMP2A、YAP及P27蛋白与NPC患者病理参数间的相关性,采用多因素Logistic回归分析探讨影响NPC患者预后生存的因素,绘制Kaplan-Meier生存曲线研究LMP2A、YAP及P27蛋白对NPC患者预后生存的影响。结果NPC组LMP2A、YAP高表达率、P27蛋白低表达率高于对照组(P<0.01)。组织高分化、淋巴结无转移、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、无远处转移、非角化性未分化型NPC患者LMP2A、YAP高表达率及P27蛋白低表达率较组织中低分化、存在淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、远处转移、非角化性分化型NPC患者低(P<0.05,P<0.01)。组织分化程度、病理分型、TNM分期、淋巴结转移及LMP2A、YAP、P27蛋白表达情况为NPC患者预后生存的独立危险因素(P<0.05,P<0.01)。LMP2A、YAP低表达组平均生存时间长于高表达组(P<0.01),P27蛋白高表达组平均生存时间长于低表达组(P<0.01)。结论LMP2A、YAP在NPC患者中表达升高,P27蛋白表达降低;LMP2A、YAP高表达及P27蛋白低表达与NPC发生、病情进展及预后有密切联系,可作为预测NPC患者预后的分子标志物和潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 lmp2a YAP P27蛋白 临床病理 预后
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LMP2A、AnnexinA2、Rad52、Gli1在鼻咽癌中的表达及其与肿瘤恶性程度的相关性 被引量:1
6
作者 许斌 蔡莹 宋启斌 《海南医学院学报》 CAS 2017年第14期1945-1948,共4页
目的:鼻咽癌中LMP2A、AnnexinA2、Rad52、Gli1的表达及其与肿瘤恶性程度的相关性。方法:选择在本院经纤维鼻咽镜下活组织证实为鼻咽癌以及轻度慢性鼻炎黏膜炎症的组织,抽提组织中的RNA后采用荧光定量PCR试剂盒检测LMP2A、AnnexinA2、Ra... 目的:鼻咽癌中LMP2A、AnnexinA2、Rad52、Gli1的表达及其与肿瘤恶性程度的相关性。方法:选择在本院经纤维鼻咽镜下活组织证实为鼻咽癌以及轻度慢性鼻炎黏膜炎症的组织,抽提组织中的RNA后采用荧光定量PCR试剂盒检测LMP2A、AnnexinA2、Rad52、Gli1以及上皮间质转化基因、细胞周期基因的表达量。结果:鼻咽癌病灶中LMP2A、AnnexinA2、Rad52、Gli1的mRNA表达量显著高于鼻炎黏膜炎症病灶且临床分期越晚,鼻咽癌病灶中LMP2A、AnnexinA2、Rad52、Gli1的mRNA表达量越高;鼻咽癌病灶中E-cadherin的mRNA表达量显著低于鼻炎黏膜炎症病灶且与与LMP2A、Gli1呈负相关,N-cadherin、Vimentin、ZEB2的mRNA表达量显著高于鼻炎黏膜炎症病灶且与与LMP2A、Gli1呈正相关;鼻咽癌病灶中CyclinD1、CyclinE、PCNA的mRNA表达量显著高于鼻炎黏膜炎症病灶且与AnnexinA2、Rad52呈正相关。结论:鼻咽癌中LMP2A、AnnexinA2、Rad52、Gli1的高表达能够促进癌细胞的上皮间质转化及细胞周期的进程。 展开更多
关键词 鼻咽癌 lmp2a AnnexinA2 Rad52 GLI1 细胞周期
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表达EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型的建立
7
作者 孙华 姚堃 +3 位作者 丁传林 陈云 徐江英 彭光勇 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期301-304,F003,共5页
目的:建立表达EB病毒LMP2A小鼠移植瘤模型,为树突状细胞治疗EB病毒相关肿瘤的动物试验奠定基础。方法:将EB病毒LMP2A基因克隆至逆转录质粒pLXSN中,重组质粒用脂质体Clonfectin转入BALB/c小鼠来源的骨髓瘤细胞SP2/0,经G418筛选获得阳性克... 目的:建立表达EB病毒LMP2A小鼠移植瘤模型,为树突状细胞治疗EB病毒相关肿瘤的动物试验奠定基础。方法:将EB病毒LMP2A基因克隆至逆转录质粒pLXSN中,重组质粒用脂质体Clonfectin转入BALB/c小鼠来源的骨髓瘤细胞SP2/0,经G418筛选获得阳性克隆,亚克隆得到EB病毒LMP2A表达株并经PCR、RT-PCR、IFA、流式细胞仪鉴定。腹股沟皮下接种该细胞入BALB/c小鼠得到移植瘤模型,两周后切除肿瘤组织并作苏木精-伊红(H-E)染色切片。结果:构建出含EB病毒LMP2A基因的重组逆转录质粒,获得表达EB病毒LMP2A的SP2/0细胞,该细胞在BALB/c小鼠可生长成肿块。结论:成功地构建表达EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型。 展开更多
关键词 lmp2a 重组质粒 肿瘤 动物模型
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YAP、p-STAT3、LMP2A在鼻咽癌中的表达及临床意义 被引量:3
8
作者 王赟 王芹 徐亮 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第8期1435-1439,共5页
目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、外源性表达潜伏膜蛋白2A(LMP2A)在鼻咽癌(NPC)中的表达及临床意义。方法收集2020年12月至2021年12月于临沂市人民医院接受治疗的202例NPC患者的活检术石蜡标本作为... 目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、外源性表达潜伏膜蛋白2A(LMP2A)在鼻咽癌(NPC)中的表达及临床意义。方法收集2020年12月至2021年12月于临沂市人民医院接受治疗的202例NPC患者的活检术石蜡标本作为观察组,同时收集本院98例鼻咽黏膜慢性炎组织标本作为对照组。分析两组YAP、p-STAT3及LMP2A的表达,并分析YAP、p-STAT3及LMP2A三指标与NPC患者的临床病理参数、预后关系。结果观察组YAP、p-STAT3、LMP2A蛋白高表达率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、组织分化以及有无远处转移NPC患者之间YAP表达比较差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期和有无淋巴结、远处转移NPC患者之间p-STAT3表达比较差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、组织分化以及有无淋巴结转移NPC患者之间LMP2A表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。经随访后发现,预后良好组181例,预后不良组21例;两组年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同预后患者TNM分期、淋巴结及远处转移情况、YAP、p-STAT3、LMP2A高表达率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。经Logistic回归分析可知,TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结及远处转移、YAP、p-STAT3及LMP2A高表达是影响NPC患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论NPC患者中YAP、p-STAT3、LMP2A呈上升表达,且三指标高表达与NPC病情的发生发展以及预后之间存在密切联系,对预测患者预后不良具有重要意义。 展开更多
关键词 YAP P-STAT3 lmp2a 鼻咽癌
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抗EB病毒LMP2A单克隆抗体的制备及免疫学特性分析
9
作者 徐鑫 唐小军 +9 位作者 熊林 王欢 李文杰 高畅 熊四平 仇镇宁 Tan Min Han Vo Jess Honganh 冯振卿 陈仁杰 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期875-882,共8页
目的:利用杂交瘤技术制备抗EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)单克隆抗体并分析其免疫学特性。方法:以LMP第2和第5胞外区表位串联制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,制备抗LMP2A的单克隆抗体。通过ELISA、Wester... 目的:利用杂交瘤技术制备抗EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)单克隆抗体并分析其免疫学特性。方法:以LMP第2和第5胞外区表位串联制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,制备抗LMP2A的单克隆抗体。通过ELISA、Western blot、免疫荧光、免疫组化、流式细胞术等方法鉴定单抗的免疫学特性。结果:获得1株稳定并持续分泌抗LMP2A单克隆抗体的稳定杂交瘤细胞株,所分泌的单克隆抗体5C12-C4-A6能够特异性识别鼻咽癌细胞膜表面的LMP2A蛋白。结论:本文制备了能够特异性识别鼻咽癌细胞膜表面LMP2A蛋白的单克隆抗体,为进一步进行鼻咽癌临床早期诊断和分子靶向治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 EB病毒 lmp2a 单克隆抗体 免疫学特性
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EB病毒LMP2A特异性CTL的体外诱导及分析 被引量:1
10
作者 姚堃 许继军 +2 位作者 丁传林 周锋 谢芳艺 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期194-197,共4页
用EBV LMP2A重组痘苗病毒 (rVV LMP2A )转染人树突状细胞 (DC ) ,转染后的DC分别在第 1、 7、 14天刺激相同MHC背景的T细胞 ,在IL 2作用下诱导LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS )检测CTL诱导分化过程中CD... 用EBV LMP2A重组痘苗病毒 (rVV LMP2A )转染人树突状细胞 (DC ) ,转染后的DC分别在第 1、 7、 14天刺激相同MHC背景的T细胞 ,在IL 2作用下诱导LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS )检测CTL诱导分化过程中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 等细胞的分群变化 ;RT PCR检测细胞分化过程中FasLmRNA表达 ;生物活性法检测功能性细胞因子IFN γ的分泌。结果显示本法诱导的CTL对靶细胞有特异性杀伤活性 ,第 2次和第 3次DC刺激后杀伤活性有所上升 ;在CTL诱导分化的第 7、 14、 2 1天细胞分群以CD4 + 、CD8+ 细胞为主 ;RT PCR证实所诱导的细胞内有FasLmRNA的表达 ;随细胞培养天数的增加IFN γ分泌增加 ,在第 14天达到较高水平。研究表明重组痘苗病毒载体rVV LMP2A转染的DC刺激T细胞可诱导出EBV LMP2A特异性CTL。 展开更多
关键词 痘苗病毒载体 树突状细胞 EB病毒 潜伏期膜蛋白2A 细胞毒性T细胞
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EBV-LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌中的表达关系及意义 被引量:1
11
作者 赵利容 饶洁 +2 位作者 王艳 罗泊涛 陈小毅 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1107-1112,共6页
目的探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)和β-连环素(β-catenin)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达关系及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测LMP2A和β-catenin蛋白在32例鼻咽黏膜慢性... 目的探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)和β-连环素(β-catenin)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达关系及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测LMP2A和β-catenin蛋白在32例鼻咽黏膜慢性炎、56例NPC和18例NPC淋巴结转移灶中的表达,采用Western blot法和免疫荧光细胞化学染色法观察LMP2A和β-catenin蛋白在CNE2-LMP2A细胞及其对照组CNE2-Vector和CNE2细胞中的表达。结果 (1)LMP2A在NPC及其淋巴结转移灶中的阳性率分别为89.3%(50/56)和77.8%(14/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(37.5%,12/32)(P均<0.01);β-catenin在NPC及其淋巴结转移灶中的异常表达率分别为62.5%(35/56)和83.3%(15/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(3.1%,1/32)(P均<0.01);LMP2A与β-catenin正常表达呈负相关(rs=-0.391,P<0.01);LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌T分期、N分期和临床分期组间表达率的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)CNE2-LMP2A细胞中β-catenin蛋白表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2细胞;CNE2-LMP2A细胞中β-catenin胞质和胞核的表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2(P均<0.01)。结论 LMP2A高表达和β-catenin异常表达与鼻咽癌临床生物学行为进展密切相关,其机制可能与LMP2A上调β-catenin蛋白水平并促进其核转位有关。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 潜伏膜蛋白2A Β-连环素
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EBV-LMP2A肽诱导的特异性CTL对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用 被引量:1
12
作者 杜娟 苏舒 +4 位作者 孟凡岩 邵洁 徐秋萍 邹征云 刘宝瑞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期938-943,共6页
目的:探讨HLA限制性EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)表位肽EBV-潜伏膜蛋白2A(EBV-latent membrane protein2A,EBV-LMP2A)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用。方法:选用南京大学医学院附属肿瘤医院肿瘤中心HL... 目的:探讨HLA限制性EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)表位肽EBV-潜伏膜蛋白2A(EBV-latent membrane protein2A,EBV-LMP2A)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用。方法:选用南京大学医学院附属肿瘤医院肿瘤中心HLA-A2阳性胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)、人胃腺癌细胞株(AGS)和人EBV阳性胃腺癌细胞株(AGSEBV),通过改良的体外细胞培养技术用HLA-A2限制性的EBV-LMP2A抗原肽从人PBMC中诱导扩增出特异性CTL,采用四聚体技术和流式细胞术检测抗原肽诱导产生的特异性CTL的含量,通过FITC-PI标记流式术检测EBV-CTL对EBV阳性和EBV阴性的胃癌细胞的体外杀伤作用。结果:经改良的细胞培养技术和抗原肽双重刺激后EBV-LMP2A抗原肽可以诱导产生出高比例的抗原特异性CTL[EBV-LMP2A-356特异性T细胞占CD8+T细胞的(47.1±5.2)%];EBV-CTL对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用较EBV阴性的胃癌细胞明显增强[(45.1±9.3)%vs(19.4±2.5)%,P<0.05]。结论:通过改良的细胞培养技术使用EBV-LMP2A抗原肽能诱导产生高比例的EBV特异性CTL,其对EBV阳性胃癌细胞有较强的特异性杀伤作用。 展开更多
关键词 EB病毒-潜伏膜蛋白2A 细胞毒性T淋巴细胞 EB病毒阳性胃癌 细胞毒作用
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EBV LMP2A和BZLF1融合基因重组腺病毒表达载体的构建 被引量:2
13
作者 朱伟 王云 罗兵 《青岛大学医学院学报》 CAS 2007年第5期390-393,396,共5页
目的构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸(SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的... 目的构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸(SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接,构建融合基因Z2A。将融合基因Z2A定向亚克隆到pAdTrack-CMV质粒上,在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,构建融合基因Z2A真核表达载体pAd-Z2A。经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒vAd-Z2A。结果重组腺病毒载体经限制性核酸内切酶酶切,电泳后可观察到长31 kb和4.5 kb两条DNA条带,测序鉴定结果表明序列正确;从感染重组腺病毒vAd-Z2A的293细胞中检测到融合基因Z2A的表达。结论本研究成功地构建了EBV LMP2A和BZLF1融合基因Z2A重组腺病毒表达载体,为进一步研究Z2A的功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 疱疹病毒4型 潜伏膜蛋白2A 基因 BZLF1 基因融合 表达载体
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携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞
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作者 鄢雪敏 撖子建 +2 位作者 蔡琰 余展鹏 黄元姣 《中国癌症防治杂志》 CAS 2016年第4期207-211,共5页
目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs... 目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染p IRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果双酶切及测序鉴定证实真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论成功构建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 EBV潜伏膜蛋白2A 序列克隆 pIRES2-Zs-Green1载体 pIRES2-Zs-Green1-lmp2a真核表达载体 基因转染 基因表达
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EBV-LMP2A重组腺病毒体外转染树突状细胞激发特异性CTL的研究
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作者 姚堃 彭光勇 +2 位作者 丁传林 周锋 谢芳艺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期816-820,共5页
目的 :用EBV潜伏膜蛋白 2A(EBV LMP2A)重组腺病毒转染树突状细胞 (DC)激发特异性细胞毒性T细胞(CTL) ,分析CTL的特性。方法 :用Ad5 LMP2A重组腺病毒转染EBV健康携带者及鼻咽癌患者的DC ,与自体来源的外周血单个核细胞 (PBMC)混合培养 ... 目的 :用EBV潜伏膜蛋白 2A(EBV LMP2A)重组腺病毒转染树突状细胞 (DC)激发特异性细胞毒性T细胞(CTL) ,分析CTL的特性。方法 :用Ad5 LMP2A重组腺病毒转染EBV健康携带者及鼻咽癌患者的DC ,与自体来源的外周血单个核细胞 (PBMC)混合培养 ,激发LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS)检测培养细胞群体中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 细胞的组成 ;生物活性法检测细胞培养上清中IFN γ含量 ;RT PCR分析CTL的FasLmRNA表达。结果 :EBV健康携带者及鼻咽癌患者的PBMC ,经Ad5 LMP2A转染的自体DC两次刺激后 ,都能诱导出显著的EBV LMP2A特异的CTL。EBV健康携带者CTL的杀伤活性 ,随DC刺激次数的增加而逐渐增强 ,诱导的CTL细胞群体以CD4 +和CD8+ 细胞组成为主 ,且CD4 + 细胞比例高于CD8+ 细胞 ,另含少量CD5 6 + 细胞 ;在不同时段所诱导的CTL上清中 ,均含一定量的IFN γ ,并随刺激次数和诱导时间的延长呈上升趋势 ;RT PCR研究表明 ,所诱导的CTL有FasLmRNA的表达。结论 :以腺病毒载体介导EBV LMP2A基因转染的成熟DC ,在体外能激发较强的LMP2A特异的功能性CTL ,可用于EBV相关NPC的免疫治疗。 展开更多
关键词 腺病毒载体 树突状细胞 EB病毒 潜伏期膜蛋白2A 细胞毒性T细胞
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LMP2A, AnnexinA2, Rad52 and Gli1 expression in nasopharyngeal carcinoma and their correlation with tumor malignancy
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作者 Bin Xu Ying Cai Qi-Bin Song 《Journal of Hainan Medical University》 2017年第14期70-73,共4页
Objective:To study the LMP2A, AnnexinA2, Rad52 and Gli1 expression in nasopharyngeal carcinoma and their correlation with tumor malignancy.Methods:Nasopharyngeal cancer tissue confirmed by fibreoptic nasopharyngoscopi... Objective:To study the LMP2A, AnnexinA2, Rad52 and Gli1 expression in nasopharyngeal carcinoma and their correlation with tumor malignancy.Methods:Nasopharyngeal cancer tissue confirmed by fibreoptic nasopharyngoscopic biopsy and mild chronic rhinitis mucosa inflammation tissue in Renmin Hospital of Wuhan University between May 2014 and February 2017 were selected to extract the RNA, and then fluorescence quantitative PCR kits were used to determine the expression of LMP2A, AnnexinA2, Rad52, Gli1, epithelial-mesenchymal transition genes and cell cycle genes.Results: LMP2A, AnnexinA2, Rad52 and Gli1 mRNA expression in nasopharyngeal cancer lesions were significantly higher than those in rhinitis mucosa inflammation lesions, and the higher the clinical stage, the higher the LMP2A, AnnexinA2, Rad52 and Gli1 mRNA expression in nasopharyngeal cancer lesions;E-cadherin mRNA expression in nasopharyngeal cancer lesions was significantly lower than that in rhinitis mucosa inflammation lesions and negatively correlated with LMP2A and Gli1 while N-cadherin, Vimentin and ZEB2 mRNA expression were significantly higher than those in rhinitis mucosa inflammation lesions and positively correlated with LMP2A and Gli1;CyclinD1, CyclinE and PCNA mRNA expression in nasopharyngeal cancer lesions were significantly higher than those in rhinitis mucosa inflammation lesions and positively correlated with with AnnexinA2 and Rad52.Conclusion:The high expression of LMP2A, AnnexinA2, Rad52 and Gli1 in nasopharyngeal carcinoma can promote epithelial-mesenchymal transition and cell cycle process in cancer cells. 展开更多
关键词 NASOPHARYNGEAL CARCINOMA lmp2a AnnexinA2 Rad52 GLI1 Cell cycle
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GM-CSF与LMP2A融合基因重组卡介苗的免疫学特性 被引量:6
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作者 陈廷 王晖 +2 位作者 吕厚东 司传平 薛庆节 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期509-512,共4页
目的对融合的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子( gramulocyte-macrophase colony-stimu-latingfactor, GM-CSF)基因与EB病毒(Epstein-Barr virus)基因LMP2A进行鉴定并对rBCG进行免疫学特性研究。方法用免疫印迹法( Western blot )检... 目的对融合的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子( gramulocyte-macrophase colony-stimu-latingfactor, GM-CSF)基因与EB病毒(Epstein-Barr virus)基因LMP2A进行鉴定并对rBCG进行免疫学特性研究。方法用免疫印迹法( Western blot )检测rBCG中融合基因表达;将表达融合基因的rBCG注射小鼠,用酶联免疫吸附试验( ELISA)检测血清特异性抗体表达水平,乳酸脱氢酶法检测细胞免疫功能,观察rBCG的作用;建立小鼠EBV阳性的肿瘤模型并观察rBCG的治疗效果。结果 rBCG能分泌性表达目的蛋白,该目的蛋白能被GM-CSF抗体及LMP2 A抗体识别;ELISA结果显示rBCG能刺激小鼠产生相应抗体,注射小鼠的细菌数量为5×10^8个时,抗体最大滴度为1∶27900[(326.5±7.8) pg/ml];rBCG组对EBV阳性胃癌细胞(GT39细胞)的杀伤率为(89.6±6.8)%,显著大于对照组(P<0.05)。 PBS及BCG对照组的肿瘤体积明显大于rBCG治疗组,3组肿瘤体积分别为(1964.0±548.7) mm3、(1268.7±72.4) mm3、(168.6±78.8) mm3。结论 GM-CSF与LMP2A融合基因重组卡介苗成功表达目的蛋白,免疫小鼠后产生体液免疫和细胞免疫;rBCG能有效抑制小鼠体内的肿瘤生长。 展开更多
关键词 GM-CSF lmp2a 重组卡介苗 细胞毒性T淋巴细胞 小鼠
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EBV潜伏膜蛋白LMP2A的研究进展 被引量:4
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作者 朱伟(综述) 罗兵(审校) 《国际病毒学杂志》 2007年第4期120-123,共4页
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)与多种人类恶性肿瘤如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌(na-sopharyngeal carcinoma,NPC)、何杰金氏病(Hodgkin's disease,HD)等的发生有关,肿瘤组织中EBV主要以潜伏感染的形式存在。在EBV潜伏感染细胞中,... EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)与多种人类恶性肿瘤如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌(na-sopharyngeal carcinoma,NPC)、何杰金氏病(Hodgkin's disease,HD)等的发生有关,肿瘤组织中EBV主要以潜伏感染的形式存在。在EBV潜伏感染细胞中,可表达的EBV基因有10多种,包括EBV核抗原(EB nuclear antigen,EBNA)1,2,3A,3B,3C和LP;潜伏膜蛋白(latent membrane protein,LMP)1,2A和2B;EBV编码的小RNA(EBER)1和2;以及BamHⅠ-A向右开放读码框(BARF0)的转录产物。NPC和其他EBV相关恶性肿瘤中可持续检测到LMP2A的转录物,提示LMP2A在体内病毒持续感染和EBV相关疾病中可能有重要作用。 展开更多
关键词 EBV潜伏膜蛋白 lmp2a BURKITT淋巴瘤 CARCINOMA PROTEIN 病毒持续感染 恶性肿瘤 EBV基因
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EB病毒潜伏膜蛋白2A抗原表位的融合表达及其意义 被引量:2
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作者 陈云 姚堃 +4 位作者 许文嵘 周锋 徐建 尹全章 谢芳艺 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期26-30,共5页
为了探讨含有EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)抗原表位片断表达的融合蛋白在鼻咽癌血清学检测中的应用意义,通过重叠延伸PCR方法,合成了3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖LMP2A的主要的4个抗原表位,将它们拼接在一起构建一个多肽融合基因,克隆... 为了探讨含有EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)抗原表位片断表达的融合蛋白在鼻咽癌血清学检测中的应用意义,通过重叠延伸PCR方法,合成了3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖LMP2A的主要的4个抗原表位,将它们拼接在一起构建一个多肽融合基因,克隆到PGEX-4T-2载体中表达融合蛋白,以GST亲和层析柱法纯化融合蛋白,鉴定后以此为抗原检测鼻咽癌患者的血清。结果表明,获得了含EB病毒LMP2A主要的4个抗原表位的融合蛋白(EC2A),蛋白纯度达90%以上,ELISA结果显示鼻咽癌患者血清的检出率为77.9%,正常人群血清为阴性,与常规的VCA-IgA法进行比较,有9份(13.3%)血清VCA-IgA为阴性而EC2A-IgG检出阳性,为鼻咽癌的临床检测提供了新思路,也为后续的单克隆抗体制备奠定了基础。 展开更多
关键词 EB病毒 lmp2a 重叠PCR 表位
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EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定 被引量:1
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作者 陈云 周锋 +3 位作者 孙倍成 刘根焰 王冰 姚堃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1013-1015,1019,共4页
目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A,转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株。方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因,克隆到测序载体pMD18-T... 目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A,转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株。方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因,克隆到测序载体pMD18-T中,经测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pGEZ-Term中,与两辅助病毒载体PHIT456、PHIT60通过Lipofectamine2000共转染包装细胞293T,测定产生的重组逆转录病毒滴度并感染小鼠成纤维细胞L929,经Zeocine筛选后得到稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western blot法检测细胞中LMP2A mRNA和蛋白表达情况。结果:重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A经测序鉴定正确;转染后上清中病毒的滴度为5×108cfu/L,感染L929细胞后用Zeocine筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Westernblot检测结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达EBV-LMP2A。结论:表达EBV-LMP2A细胞株的构建为蛋白制备与纯化奠定了物质基础,也为后续的EBV相关性疾病疫苗的研究提供了新思路。 展开更多
关键词 EB病毒 lmp2a 逆转录病毒 重组
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