对柚单染色体LA-PCR-AFLP技术体系中外源DNA污染问题中不同试验用水、加接头连接前后步骤对水污染的敏感度以及LA-PCR形成的非特异性亮带现象进行对比研究。结果表明:8种试验用水中BT水(Bioteke,RNase-free and DNase-free Water)的防...对柚单染色体LA-PCR-AFLP技术体系中外源DNA污染问题中不同试验用水、加接头连接前后步骤对水污染的敏感度以及LA-PCR形成的非特异性亮带现象进行对比研究。结果表明:8种试验用水中BT水(Bioteke,RNase-free and DNase-free Water)的防控效果最佳;水的质量对LA-PCR过程中接头连接之前的步骤影响最大,对加接头之后的步骤也有一定的影响;非特异性亮带为引物自连形成的多聚体,与外源污染无关。本试验通过对外源污染的来源和关键步骤实施严格防控,经过dot blot验证,使外源污染能够得到有效控制。这为建立高质量的柚单染色体文库奠定了基础。展开更多
应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR(linker-adaptor PCR)扩增后用D IG标记制备探针,然后用Southern b lot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明:用该法制备的涂染探针是成功的,原位...应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR(linker-adaptor PCR)扩增后用D IG标记制备探针,然后用Southern b lot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明:用该法制备的涂染探针是成功的,原位杂交也获得了阳性结果,可以初步验证毛冠鹿中的Y染色体.展开更多
文摘对柚单染色体LA-PCR-AFLP技术体系中外源DNA污染问题中不同试验用水、加接头连接前后步骤对水污染的敏感度以及LA-PCR形成的非特异性亮带现象进行对比研究。结果表明:8种试验用水中BT水(Bioteke,RNase-free and DNase-free Water)的防控效果最佳;水的质量对LA-PCR过程中接头连接之前的步骤影响最大,对加接头之后的步骤也有一定的影响;非特异性亮带为引物自连形成的多聚体,与外源污染无关。本试验通过对外源污染的来源和关键步骤实施严格防控,经过dot blot验证,使外源污染能够得到有效控制。这为建立高质量的柚单染色体文库奠定了基础。
文摘应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR(linker-adaptor PCR)扩增后用D IG标记制备探针,然后用Southern b lot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明:用该法制备的涂染探针是成功的,原位杂交也获得了阳性结果,可以初步验证毛冠鹿中的Y染色体.
