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自噬影响组蛋白修饰标记H3K4me3调控小鼠早期胚胎发育
1
作者 胡静 朱伶 +2 位作者 谢娟 孔德营 刘豆豆 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第5期1147-1155,共9页
背景:自噬作为细胞发育的一个关键调控机制,在胚胎发育的不同阶段发挥着重要作用。目前对于胚胎中自噬如何通过组蛋白修饰来调控胚胎发育的机制尚不明确。目的:探究胚胎中自噬对H3K4me3修饰的影响以及对胚胎发育的影响。方法:将小鼠受... 背景:自噬作为细胞发育的一个关键调控机制,在胚胎发育的不同阶段发挥着重要作用。目前对于胚胎中自噬如何通过组蛋白修饰来调控胚胎发育的机制尚不明确。目的:探究胚胎中自噬对H3K4me3修饰的影响以及对胚胎发育的影响。方法:将小鼠受精卵分为对照组和自噬抑制剂处理组(磷酸氯喹处理组,3-甲基腺嘌呤处理组),分别体外培养至不同时期,分为早期2-细胞胚胎、中期2-细胞胚胎、晚期2-细胞胚胎、4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚期胚胎、囊胚期胚胎。通过免疫荧光检测分析各组晚期2-细胞胚胎的活性氧、自噬标记蛋白LC3B、P62和DNA损失标记物γH2AX以及各阶段胚胎组蛋白H3K4me3的表达;通过染色体靶向切割和标签化(CUT&Tag)检测各组晚期2-细胞胚胎中H3K4me3修饰变化。结果与结论:①自噬抑制后,小鼠胚胎发育阻滞;②免疫荧光结果显示,自噬抑制后,与对照组相比,自噬抑制剂处理组的活性氧和γH2AX没有显著差异;③自噬抑制剂处理相对于对照组晚期2-细胞胚胎的H3K4me3水平显著升高;④CUT&Tag结果显示,自噬抑制后,H3K4me3在基因近端启动子区域富集显著增加,并且H3K4me3特异性结合基因增多;⑤结果表明,自噬可能通过调控H3K4me3修饰水平从而影响胚胎发育。 展开更多
关键词 小鼠 自噬 H3k4me3 胚胎发育 组蛋白修饰 活性氧 DNA损伤 小鼠胚胎 甲基化
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广东省2020—2022年O10:K4型副溶血性弧菌的病原学特征分析
2
作者 邹敏 何冬梅 +6 位作者 欧阳方竹 王博俊 黄玉梅 陈启方 陈乐妍 柯昌文 柯碧霞 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2025年第2期124-130,共7页
目的 了解广东省2020-2022年O10:K4型副溶血性弧菌的耐药特性、分子特征及其流行情况,为副溶血性弧菌感染的防治提供科学依据。方法 对2020—2022年广东省分离自感染患者临床标本的副溶血性弧菌菌株进行血清学鉴定、药敏实验、多位点序... 目的 了解广东省2020-2022年O10:K4型副溶血性弧菌的耐药特性、分子特征及其流行情况,为副溶血性弧菌感染的防治提供科学依据。方法 对2020—2022年广东省分离自感染患者临床标本的副溶血性弧菌菌株进行血清学鉴定、药敏实验、多位点序列(MLST)分型和全基因组测序,同时利用微生物基因注释系统对测序结果开展耐药基因与毒力因子注释。结果 290株副溶血性弧菌可分为24种血清型,其中O10:K4占31.38%(91/290)。91株O10:K4型副溶血性弧菌药敏试验显示,所有菌株均对氨苄西林中等耐药,对其他药物敏感。在290株副溶血性弧菌菌株中选取75株开展全基因组测序,经MLST分型和系统发育进化关系分析发现,75株菌株中,O10:K4型副溶血性弧菌共48株,其中ST3型共47株,为主要型别(97.92%,47/48),且与O3:K6菌株遗传进化距离最近,还出现了4种新型副溶血性弧菌基因序列型别:ST3485、ST3486、ST3488和ST3494。O10:K4型副溶血性弧菌具有大流行菌株的独特遗传标志(toxRS/new+、orf8+、tdh+和trh-)且携带多种毒力基因,毒力基因分布与O4:KUT和O3:K6血清型相似。结论 2020—2022年广东省副溶血性弧菌以O10:K4为优势血清型,与O3:K6流行克隆群具有类似分子特征且对多种抗菌药物敏感。副溶血性弧菌基因序列呈现高度多样性且具有明确的系统发育分支,以ST3为本地优势克隆群。 展开更多
关键词 O10:k4型副溶血性弧菌 血清学鉴定 全基因组测序 耐药基因 毒力因子
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大肠杆菌K4无抗生素表达系统的构建与果糖软骨素合成途径优化
3
作者 孙婕妤 朱雨豪 +6 位作者 石智诚 肖森 黄子洋 徐志兵 堵国成 陈坚 康振 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第22期1-9,共9页
果糖软骨素是酶法合成硫酸软骨素的关键前体物质。目前果糖软骨素的生物合成面临诸多挑战,包括合成效率低、提取工艺复杂以及生产过程中对抗生素的依赖等问题,严重限制了其规模化生产和应用。为了解决上述问题,该研究以可天然合成与转... 果糖软骨素是酶法合成硫酸软骨素的关键前体物质。目前果糖软骨素的生物合成面临诸多挑战,包括合成效率低、提取工艺复杂以及生产过程中对抗生素的依赖等问题,严重限制了其规模化生产和应用。为了解决上述问题,该研究以可天然合成与转运果糖软骨素的大肠杆菌K4作为底盘细胞,构建了一个无抗性基因质粒表达载体pMUT2ΔHyp3,该质粒在无抗生素压力下可维持9 d的遗传稳定性。通过重组过表达谷氨酸棒状杆菌来源的尿苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)-葡萄糖脱氢酶编码基因ugdA2与枯草芽孢杆菌来源的UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶编码基因glmU强化前体合成,果糖软骨素摇瓶产量提升至0.95 g/L。进一步优化发酵培养基组分,产量达到1.35 g/L。最终在3 L发酵罐中无抗生素发酵,48 h产量可达到7.5 g/L,收率达4.4%(质量分数)。该研究不仅实现了果糖软骨素的合成,解决了重组大肠杆菌K4发酵抗生素依赖的问题,也为硫酸软骨素的绿色酶法制造提供了规模化生产的基础。 展开更多
关键词 无抗生素表达系统 果糖软骨素 硫酸软骨素 多糖 大肠杆菌k4
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Bi3+掺杂K4(Sr,Ca)Ge3O9窄带荧光粉的发光性能调控研究
4
作者 温润祺 张晨曦 +3 位作者 勾庆东 余美东 刘建蒂 孙心瑗 《井冈山大学学报(自然科学版)》 2025年第6期10-16,共7页
采用高温固相法制备了K4SrGe3O9:xBi3+(0≤x≤0.01)与K4Sr(1-y)CayGe3O9:0.002Bi3+(0≤y≤1)系列荧光粉,并通过X射线衍射、荧光光谱、荧光衰减曲线及X射线激发发射光谱等手段,对荧光粉的结构与发光性能进行了研究。结果表明,K4SrGe3O9:x... 采用高温固相法制备了K4SrGe3O9:xBi3+(0≤x≤0.01)与K4Sr(1-y)CayGe3O9:0.002Bi3+(0≤y≤1)系列荧光粉,并通过X射线衍射、荧光光谱、荧光衰减曲线及X射线激发发射光谱等手段,对荧光粉的结构与发光性能进行了研究。结果表明,K4SrGe3O9:xBi3+荧光粉在313 nm激发下,最佳掺杂浓度为x=0.002,发射峰位位于363 nm,得到相应半高宽为45 nm的窄带发射峰,荧光衰减时间为540 ns。在此基础上,通过Ca2+逐渐替代Sr2+制备了K4Sr(1-y)CayGe3O9:0.002Bi3+系列荧光粉。在此替换下,由于替换后样品的晶体收缩效应,XRD衍射峰主峰峰位向高角度偏移0.46°,同时观察到因替代的局域对称性破坏以及不完全替代的成分起伏,导致替代后发射峰半高峰宽变宽(约为48 nm)。通过对结构的探讨,本实验研究再一次确认窄带发光对高对称性结构的需求。本研究成果对未来在高对称性结构晶体中掺杂制备窄带发光荧光粉提供了实验研究基础与科学依据。 展开更多
关键词 Bi3+掺杂 k4(Sr Ca)Ge3O9 窄带发光 高对称晶体结构 LED
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低温等离子体调节H3K4me2刺激灵芝生长和灵芝酸积累
5
作者 张莹 黄青 《生物学杂志》 北大核心 2025年第3期1-8,共8页
研究从表观遗传学角度探讨纳秒脉冲介质阻挡放电等离子体(NS-DBD)刺激灵芝生长和灵芝酸生物合成机制。通过高效液相色谱法检测发现,NS-DBD可以促进灵芝酸的生物合成。生化指标检测发现,NS-DBD诱导了灵芝胞内活性氧的积累,使总超氧化物... 研究从表观遗传学角度探讨纳秒脉冲介质阻挡放电等离子体(NS-DBD)刺激灵芝生长和灵芝酸生物合成机制。通过高效液相色谱法检测发现,NS-DBD可以促进灵芝酸的生物合成。生化指标检测发现,NS-DBD诱导了灵芝胞内活性氧的积累,使总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶等抗氧化酶的活性升高。同时伴有灵芝酸生物合成相关基因转录水平的上调。免疫荧光和染色质免疫沉淀测序方法证实,NS-DBD处理后,灵芝酸合成通路上的基因hmgr、pmvk、mvd、sqs和ls的H3K4me2修饰水平都发生了显著变化。其中,基因hmgr、pmvk、mvd和ls的H3K4me2修饰主要分布于基因的外显子区域,而基因sqs的H3K4me2修饰则分布于上游2 kb和外显子区域。研究表明,NS-DBD通过刺激ROS积累调节灵芝酸合成通路上一些关键基因的H3K4me2修饰水平,进而调节灵芝的生长和灵芝酸的合成。 展开更多
关键词 低温等离子体 介质阻挡放电(DBD) 灵芝 灵芝酸 刺激效应 H3k4me2
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扰动流调控内皮细胞组蛋白去甲基化酶KDM5B和H3K4me3对颈动脉斑块形成的影响
6
作者 吴丽丽 沈宇 《中国动脉硬化杂志》 2025年第2期117-124,共8页
[目的]探讨扰动流是否通过调控组蛋白去甲基化酶KDM5B和表观遗传修饰影响内皮细胞功能和动脉粥样硬化斑块形成。[方法]通过部分颈动脉结扎术(PCL),利用单细胞数据分析和免疫荧光染色观察扰动流作用下野生型小鼠颈动脉内皮细胞组蛋白甲... [目的]探讨扰动流是否通过调控组蛋白去甲基化酶KDM5B和表观遗传修饰影响内皮细胞功能和动脉粥样硬化斑块形成。[方法]通过部分颈动脉结扎术(PCL),利用单细胞数据分析和免疫荧光染色观察扰动流作用下野生型小鼠颈动脉内皮细胞组蛋白甲基化水平和组蛋白去甲基化酶的表达变化;利用qPCR和Western blot检测暴露于扰动流诱导的内皮细胞KDM5B和H3K4me3的表达;利用普通转录组测序分析KDM5B敲降对内皮细胞功能的影响;内皮细胞成环实验验证KDM5B对血管生成的影响;PCL结合高脂饲料喂食2周构建颈动脉斑块模型分析KDM5B敲降对斑块形成的影响。[结果]血管内皮细胞上存在大量H3K4me3甲基化修饰。扰动流使内皮细胞H3K4me3水平下降(P<0.01),并上调组蛋白去甲基化酶KDM5B表达(P<0.05)。与对照组相比,抑制KDM5B活性或敲降KDM5B表达后可以提高内皮细胞H3K4me3水平(P<0.05)。与Con313对照组相比,KDM5B敲降可以抑制内皮细胞血管生成,并使ApoE^(-/-)小鼠颈动脉斑块面积减少41.45%(Con313对照组:42.17%±1.90%,shKDM5B敲降组:24.69%±1.60%,P<0.01)。[结论]血液扰动流通过促进KDM5B表达,降低H3K4me3修饰,促进血管生成和动脉粥样硬化斑块形成,靶向KDM5B-H3K4me3轴可作为心血管疾病相关的候选治疗靶点。 展开更多
关键词 扰动流 H3k4me3 KDM5B 内皮细胞 颈动脉斑块形成
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DPY30介导H3K4甲基化调控PCNA表达促进结直肠癌细胞进展 被引量：1
7
作者 王凯 王彬彬 +2 位作者 李志祥 王庆康 喻大军 《蚌埠医科大学学报》 2025年第5期568-574,共7页
目的:探讨DPY30介导H3K4甲基化促进增殖细胞核抗原(PCNA)表达从而影响结直肠癌细胞进展的分子机制。方法:收集结直肠癌病人样本,免疫组织化学法检测DPY30表达;构建沉默DPY30载体,采用细胞克隆实验、CCK-8实验、3D成球实验、细胞凋亡实... 目的:探讨DPY30介导H3K4甲基化促进增殖细胞核抗原(PCNA)表达从而影响结直肠癌细胞进展的分子机制。方法:收集结直肠癌病人样本,免疫组织化学法检测DPY30表达;构建沉默DPY30载体,采用细胞克隆实验、CCK-8实验、3D成球实验、细胞凋亡实验检测沉默DPY30对结直肠癌增殖和转移能力的影响,Western blotting检测通过干扰DPY30影响H3K4组蛋白甲基化从而降低PCNA表达情况,采用PCR和Western blotting检测干扰DPY30后对PCNA表达情况影响。结果:DPY30在结直肠癌中过表达(P<0.01),且与不良病理分期相关。细胞克隆实验、CCK-8实验、3D成球实验、细胞凋亡实验提示,相较于NC组,沉默DPY30组细胞增殖能力抑制,而凋亡增多(P<0.05~P<0.01)。Western blotting结果显示,沉默DPY30抑制H3K4甲基化表达水平,同时,PCNA表达下降(P<0.05~P<0.01)。结论:DPY30通过介导H3K4甲基化促进PCNA表达,从而参与结直肠癌进展。 展开更多
关键词 结直肠癌 DPY30 H3k4甲基化 增殖细胞核抗原
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血管生成抑制因子K4K5 cDNA基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：14
8
作者 官孝群 王跃祥 +1 位作者 吴良成 宋后燕 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期126-130,共5页
应用PCR方法 ,扩增人纤溶酶原cDNA基因中K4K5cDNA片段 ,与酵母表达载体 pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9kkk 18。该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G418 YPD筛选高拷贝表型 ,PCR筛选K4K5cDNA与酵母染色体整合形成的阳性克隆 ,阳性克隆用甲醇诱... 应用PCR方法 ,扩增人纤溶酶原cDNA基因中K4K5cDNA片段 ,与酵母表达载体 pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9kkk 18。该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G418 YPD筛选高拷贝表型 ,PCR筛选K4K5cDNA与酵母染色体整合形成的阳性克隆 ,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达产物r K4K5分子量约 2 1 5kD ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 15 0～ 2 5 0mg/L。初步纯化产物抑制牛毛细血管内皮 (BCE)细胞增殖与鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成。 展开更多
关键词 k4K5cDNA 克隆表达 毕赤酵母 新生血管生成 血管生成抑制因子
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乙肝清HPMC K4M/PVP K30骨架缓释片的研制与体外评价 被引量：7
9
作者 王兴 张卫国 +3 位作者 李晓倩 李莹 王萍 雷磊 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2012年第1期50-55,共6页
目的进行乙肝清HPMC K4M/PVP K30骨架缓释片的研制与体外评价。方法以中药赶黄草和贯叶连翘的提取物为原料药,以HPMC K4M和PVP K30两种粘度不同,水合行为差异较大的亲水高分子材料联合使用作为骨架材料,制备缓释12 h的"乙肝清骨架... 目的进行乙肝清HPMC K4M/PVP K30骨架缓释片的研制与体外评价。方法以中药赶黄草和贯叶连翘的提取物为原料药,以HPMC K4M和PVP K30两种粘度不同,水合行为差异较大的亲水高分子材料联合使用作为骨架材料,制备缓释12 h的"乙肝清骨架缓释片"。以"HPMC+PVP K30"总量在处方中的百分量和HPMC在"HPMC+PVP K30"总量中的百分量为考察因素,通过处方单因素考察和星点设计—效应面法进行优化,得到最佳的制剂处方。并通过均一性实验和体外释药行为研究进行体外评价。结果本片剂优化处方中最低HPMC K4M与PVP K30用量不得低于20%。最佳制剂处方为骨架材料HPMC+PVP K30总量占片剂质量的27.03%,HPMC占HPMC+PVP K30总量的49.04%。本处方具有良好的重现性与稳定性;片剂药物释放符合一级释放模型。结论制备了载药量40%的乙肝清提取物缓释片,并优化得到了其最佳的制剂处方。 展开更多
关键词 HPMC k4M/PVP K30 缓释片 中药提取物 释药行为
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组蛋白H3K4甲基转移酶KMT2D研究进展 被引量：6
10
作者 阎晗 于明航 +1 位作者 尹洁 王玺 《天津医科大学学报》 2018年第6期562-565,共4页
组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D(KMT2D),属于哺乳动物H3K4甲基转移酶家族成员,在成人组织中广泛表达,对于早期胚胎发育有重要作用。C-末端的SET区域负责组蛋白H3K4甲基化,维持KMT2D蛋白的稳定性。KMT2D与WRAD、NCOA6、PTIP、PA1和H3K27去... 组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D(KMT2D),属于哺乳动物H3K4甲基转移酶家族成员,在成人组织中广泛表达,对于早期胚胎发育有重要作用。C-末端的SET区域负责组蛋白H3K4甲基化,维持KMT2D蛋白的稳定性。KMT2D与WRAD、NCOA6、PTIP、PA1和H3K27去甲基化酶UTX组成复合物,在其中起到支架蛋白的作用,维持UTX的稳定性。KMT2D主要催化哺乳动物H3K4单甲基化,与转录因子共同作用于增强子区域,从而调控基因表达。KMT2D在调节细胞发育、分化、新陈代谢和肿瘤抑制方面具有重要作用,其突变导致多种疾病发生。进一步研究KMT2D有助于揭示其异常所引发多种疾病的病因,并且对开发临床药物提供有力的帮助。 展开更多
关键词 KMT2D H3k4甲基转移酶 H3k4甲基化 增强子 表观遗传调控
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沉默MAP4K4通过调控PPARγ/ABCA1通路缓解ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤 被引量：15
11
作者 王玉香 燕燕 +2 位作者 李永芳 李艾帆 李彦玲 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2021年第1期54-59,共6页
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAP4K4)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法采用100 mg/L ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)建立细胞损伤模型。RT-PCR检测HUVEC中MAP4K4的mRNA表达水平。Western ... 目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAP4K4)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法采用100 mg/L ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)建立细胞损伤模型。RT-PCR检测HUVEC中MAP4K4的mRNA表达水平。Western blot法测定MAP4K4、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3(C-Caspase-3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达量。CCK8法检测细胞存活率。ELISA试剂盒检测细胞凋亡。DCFH-DA用于检测细胞活性氧(ROS)水平。丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性分别用其试剂盒进行检测。结果ox-LDL能明显上调MAP4K4的表达。另外,沉默MAP4K4能够显著增加细胞活性,且抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡;同时可抑制Bax和C-Caspase-3的蛋白表达并促进Bcl-2的蛋白表达量。此外,下调MAP4K4能够明显抑制ROS生成及MDA含量,并增加抗氧化酶SOD和CAT活性。机制研究显示沉默MAP4K4能够激活PPARγ/ABCA1信号通路。结论沉默MAP4K4通过激活PPARγ/ABCA1信号通路抑制ox-LDL诱导的HUVEC细胞凋亡和氧化应激从而减轻血管内皮细胞损伤,为治疗As提供理论依据。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 内皮细胞 MAP4k4 氧化应激 凋亡
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miRNA-199a-3p调控MAP3K4在胃癌中的表达 被引量：9
12
作者 闵小春 伍婷婷 +4 位作者 曾吉 张晓雪 刘晓明 景小鹏 金策 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第17期2817-2820,共4页
目的探讨胃癌中MIRNA-199A-3P调控候选基因MAP3K4的表达。方法收集35例胃癌及癌旁组织标本,采用茎环逆转录-聚合酶链式反应法检测胃癌组织及癌旁组织中MIR-199A-3P的表达水平,WESTERN BLOT法检测MAP3K4表达;细胞转染法检测MIR-199A-3P调... 目的探讨胃癌中MIRNA-199A-3P调控候选基因MAP3K4的表达。方法收集35例胃癌及癌旁组织标本,采用茎环逆转录-聚合酶链式反应法检测胃癌组织及癌旁组织中MIR-199A-3P的表达水平,WESTERN BLOT法检测MAP3K4表达;细胞转染法检测MIR-199A-3P调控MAP3K4表达,双荧光素酶报告基因检测系统验证MIR-199A-3P结合MAP3K4的3’UTR的靶位点。结果与癌旁组织相比,胃癌组织MIR-199A-3P高表达,且其候选基因MAP3K4低表达;MIR-199A-3P MIMICS转染抑制MAP3K4表达;MAP3K4是MIR-199A-3P作用的靶基因。结论 MIR-199A-3P是胃癌的一个癌基因,MAP3K4是受其调控的靶基因。 展开更多
关键词 胃肿瘤 MIR-199A-3P MAP3k4
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K4玻璃与可伐合金的阳极焊机理分析 被引量：2
13
作者 喻萍 孟庆森 +2 位作者 张丽娜 潘川 薛锦 《西安交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期26-28,共3页
通过K4玻璃与可伐合金的阳极焊试验,初步研究了在阳极焊过程中离子的传输和结合机理,即在外加电场和温度的作用下使焊接材料中发生离子的迁移,从而使阳极焊得以实现.通过K4玻璃与铝片焊接的对比试验,说明材料的线膨胀系数对焊接过程产... 通过K4玻璃与可伐合金的阳极焊试验,初步研究了在阳极焊过程中离子的传输和结合机理,即在外加电场和温度的作用下使焊接材料中发生离子的迁移,从而使阳极焊得以实现.通过K4玻璃与铝片焊接的对比试验,说明材料的线膨胀系数对焊接过程产生了极大的影响.利用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)和X射线衍射(XRD)等手段对界面的微观结构进行分析,认为在K4玻璃与可伐合金的结合面处形成了以FeSiO3和Fe7SiO10以及一些非晶态物质为主的过渡层,将K4玻璃与可伐合金连接在一起,并发现被焊材料的热膨胀系数对阳极焊质量有着重要的影响. 展开更多
关键词 阳极焊 可伐合金 k4玻璃 结合机理 离子传输机理 界面结构
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白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定 被引量：6
14
作者 孔倩倩 廖红 +3 位作者 李芳秋 马春芳 史利宁 胡毓安 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期919-921,930,共4页
目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板... 目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定。结果成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。结论成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。 展开更多
关键词 白念珠菌 H3k4甲基转移酶 基因克隆 原核细胞表达
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MicroRNA-25通过调控MAP2K4抑制糖尿病肾病纤维化的研究 被引量：6
15
作者 王晓莉 刘洁婷 +4 位作者 张春雷 王超男 冯彪 初彦辉 张涛 《医药导报》 CAS 2015年第4期425-431,共7页
目的检测microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及不同条件培养下的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达,探讨其对糖尿病肾病纤维化的调节作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测microRNA-25的表达。生物信息学预测、细胞瞬时转染和Western blo... 目的检测microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及不同条件培养下的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达,探讨其对糖尿病肾病纤维化的调节作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测microRNA-25的表达。生物信息学预测、细胞瞬时转染和Western blot验证microRNA-25的下游靶蛋白。结果 microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及高糖培养下的HK-2中表达降低(P<0.01)。MAP2K4可能是microRNA-25的下游靶蛋白。过表达microRNA-25可以从蛋白水平上抑制MAP2K4、α-SMA的表达(P<0.01)。结论 microRNA-25可以通过调控MAP2K4从而抑制糖尿病肾病纤维化的进展。 展开更多
关键词 microRNA-25/miRNA-25 纤维化 糖尿病肾病 MAP2k4
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SASH1通过MAP2K2和MAP4K4与ERK信号通路交互作用 被引量：5
16
作者 王晶 贺勇 +3 位作者 张继旺 廖娟 曾家伟 周定安 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第11期1530-1536,共7页
目的探讨新候选抑癌基因SASH1与细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的两个关键分子MAP2K2和MAP4K4的蛋白-蛋白相互作用关系。方法用XhoⅠ和HpaⅠ构建SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro反转录病毒载体,转染HEK-293T细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定... 目的探讨新候选抑癌基因SASH1与细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的两个关键分子MAP2K2和MAP4K4的蛋白-蛋白相互作用关系。方法用XhoⅠ和HpaⅠ构建SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro反转录病毒载体,转染HEK-293T细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定表达外源性SASH1基因的细胞系。Western blot检测外源性Flag-SASH1蛋白表达,利用pull-down实验、质谱技术、免疫沉淀鉴定和分析与SASH1结合的并可能调节细胞增殖、转移和凋亡等的关键蛋白。用SASH1-siRNA1和SASH1-siRNA2分别转染MDA-MB-231细胞系,以空白组和Negative-siRNA组为对照。72 h后Western blot检测SASH1的干扰效果和P-ERK1/2水平。结果成功构建稳定表达SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro重组质粒的HEK-293T细胞系,SASH1与MAP2K2和MAP4K4结合并发生相互作用。SASH1-siRNA有效抑制MDA-MB-231细胞SASH1蛋白表达(P<0.05),且P-ERK1/2在SASH1抑制组表达增加。结论 MAP2K2和MAP4K4是SASH1的重要的候选结合蛋白,SASH1可能通过与其直接或间接结合串话ERK信号传导通路,进而调节细胞增殖和迁移等细胞生物学功能。 展开更多
关键词 SASH1基因 胞外信号调节激酶 MAP2K2 MAP4k4
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let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路减少脑出血大鼠神经元调亡 被引量：10
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作者 杨慧 万广 +2 位作者 高绚照 柳毅 王守春 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1055-1062,共8页
目的:研究微小RNA let-7a对脑出血(ICH)大鼠神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:从48只健康SD大鼠中随机选取8只作为假手术组,将2μLⅦ型胶原酶注入其余大鼠苍白球以构建ICH模型。将造模后的大鼠随机分为模型(2μL生理盐水)组、let-7a... 目的:研究微小RNA let-7a对脑出血(ICH)大鼠神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:从48只健康SD大鼠中随机选取8只作为假手术组,将2μLⅦ型胶原酶注入其余大鼠苍白球以构建ICH模型。将造模后的大鼠随机分为模型(2μL生理盐水)组、let-7a激动剂(agomir)组、阴性对照(NC)agomir组、let-7a拮抗剂(antagomir)组和NC antagomir组,每组8只,在侧脑室注射相应药物。7 d后进行神经功能评分;HE染色观察病理损伤;RT-qPCR和Western blot检测相关蛋白表达水平;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;利用生物信息学软件预测let-7a与丝裂原活化的蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)的靶向关系,并在HEK293T细胞中用双萤光素酶报告基因实验进一步验证。结果:动物实验中,let-7a过表达时,神经功能评分降低,病理损伤减轻,胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)低表达,神经元凋亡减少,cleaved caspase-3和cleaved PARP低表达(P<0. 05)。细胞实验中,MAP4K3是let-7a的靶基因之一,且两者为负向调控;let-7a过表达抑制MAP4K3/MKK4/JNK的表达。结论:let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路,减少ICH大鼠神经元凋亡。 展开更多
关键词 脑出血 微小RNA let-7a MAP4K3/MKk4/JNK信号通路 神经元 细胞凋亡
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K4菌剂对马铃薯晚疫病菌的抑制作用及防病促生效果 被引量：3
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作者 王文丽 马忠明 +1 位作者 李娟 赵旭 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第7期122-128,共7页
【目的】明确K4菌剂对马铃薯晚疫病菌的抑制作用和增产机制,为该菌剂的应用提供科学依据。【方法】制备K4菌液、无菌滤液,应用四线法、抑制率测定法和盆栽试验,研究K4菌株发酵液的产酸过程,以及K4菌液和无菌滤液对马铃薯晚疫病菌菌丝生... 【目的】明确K4菌剂对马铃薯晚疫病菌的抑制作用和增产机制,为该菌剂的应用提供科学依据。【方法】制备K4菌液、无菌滤液,应用四线法、抑制率测定法和盆栽试验,研究K4菌株发酵液的产酸过程,以及K4菌液和无菌滤液对马铃薯晚疫病菌菌丝生长、游动孢子释放、孢子囊萌发产生芽管的抑制作用及在马铃薯上的防病促生效果。【结果】K4菌株在发酵过程中产生酸性物质使发酵液的pH不断降低,到达生长稳定期时发酵液的pH在5.45~5.49。K4菌液对马铃薯晚疫病菌的菌丝生长、游动孢子释放和孢子囊萌发产生芽管有明显的抑制作用,抑制率分别为71.17%,93.01%,71.28%,而K4无菌滤液对马铃薯晚疫病菌的游动孢子释放和孢子囊萌发的抑制率分别为65.48%,49.42%。在离体叶片上,K4菌液和无菌滤液对马铃薯晚疫病的防效相当,在45.37%~45.87%。在盆栽试验中,接病前喷施K4菌液及无菌滤液对马铃薯晚疫病的防效达到了38.50%和20.66%,使马铃薯茎叶干质量较对照分别增加6.98%和2.77%,块茎干质量较对照分别增加126.42%和67.64%。【结论】K4菌液对马铃薯晚疫病菌的抑制效果好于K4无菌滤液,表明K4菌液对马铃薯晚疫病的抑制机理为竞争抑制和菌体代谢产物抑制双重抑制作用。 展开更多
关键词 k4菌剂 马铃薯晚疫病菌 抑制作用 防效
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应用K4b^2心肺功能测定仪对日常体力活动能量消耗的测定 被引量：13
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作者 刘健敏 李颜 杨晓光 《科学技术与工程》 2010年第5期1215-1218,共4页
应用K4b2心肺功能测定仪对日常体力活动的能量消耗进行现场测定,以期为我国体力活动指南的制定提供基础资料。选取23名北医青年学生作为受试者,其中男11名,女12名,应用K4b2心肺功能测定仪对受试者在静息、慢走(3km/h)、快走(6km/h)、慢... 应用K4b2心肺功能测定仪对日常体力活动的能量消耗进行现场测定,以期为我国体力活动指南的制定提供基础资料。选取23名北医青年学生作为受试者,其中男11名,女12名,应用K4b2心肺功能测定仪对受试者在静息、慢走(3km/h)、快走(6km/h)、慢跑(8km/h)、骑自行车(12km/h)状态下的能量消耗进行测定。各项体力活动的能量消耗及代谢当量由大到小排列,依次为慢跑((6.26±1.22)kcal.kg-1.h-1,6.0MET)、骑自行车((4.30±0.67)kcal.kg-1.h-1,4.2MET)、快走((3.75±0.73)kcal.kg-1.h-1,3.6MET)、慢走((1.24±0.26)kcal.kg-1.h-1,1.2MET)、静息((1.08±0.24)kcal.kg-1.h-1,1.0MET),按照体力活动强度分级,属于中低强度体力活动。慢走、快走、慢跑、骑自行车等日常体力活动适于在中国人群中推广。 展开更多
关键词 k4b2 日常体力活动 能量消耗
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MAP4K4对肝癌细胞生物学活性的影响及机制 被引量：4
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作者 刘安文 蔡婧 张树辉 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期140-145,共6页
目的检测MAP4K4对肝癌细胞生物学活性的影响并初步探讨其作用机制。方法选取四种肝癌细胞(Hep3B,HepG2,SMMC7721,Huh-7)采用实时定量PCR和Western blot方法分别检测MAP4K4 mRNA和蛋白水平的表达。设计靶向MAP4K4的特异性siRNA核苷酸序... 目的检测MAP4K4对肝癌细胞生物学活性的影响并初步探讨其作用机制。方法选取四种肝癌细胞(Hep3B,HepG2,SMMC7721,Huh-7)采用实时定量PCR和Western blot方法分别检测MAP4K4 mRNA和蛋白水平的表达。设计靶向MAP4K4的特异性siRNA核苷酸序列质粒转染组及空载体质粒转染组,用Lipofectamine 2000法分别转染到MAP4K4蛋白表达活性最强的肝癌细胞,QRT-PCR和Western blot方法检测干扰效率,并对转染后肝癌细胞进行WST-8细胞增殖实验,平板克隆形成实验,PI染色法细胞周期检测,Annexin V法细胞凋亡检测;对干扰组及对照组细胞进行基因芯片检测,以进一步探究MAP4K4基因在肝癌细胞中可能的作用机制。结果 MAP4K4在各细胞株的表达依次为:HepG2>Hep3B>Huh-7>SMMC7721;MAP4K4的干扰效率达50%以上;MAP4K4基因敲减后细胞生长减慢;平板克隆形成能力减弱;细胞周期阻滞于S、G2期;细胞凋亡明显增加;MAP4K4基因敲减后,其上游的基因:TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、MyD88、IRAK、TRAF6、TIRAP的表达明显下调,下游基因TAK1(MAP3K7)和MKK3的表达也明显下调。结论 MAP4K4基因敲减可以阻滞细胞周期的进程,抑制肝癌细胞的恶性增殖,其机制可能是通过NF-κB信号转导途径、JNK信号转导途径发挥作用。 展开更多
关键词 MAP4k4 肝癌细胞 SIRNA 基因芯片
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