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绵羊Izumo2 cDNA的克隆及原核表达 被引量：1
1
作者 丹彤 周晓婷 +1 位作者 王耀新 邢万金 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第5期500-505,共6页
克隆绵羊Izumo2cDNA片段后原核表达并纯化GST-IZUMO2融合蛋白,为下一步研究IZUMO2在睾丸和精子上的定位及与其它精卵融合相关蛋白的相互作用奠定基础.以绵羊睾丸组织总cDNA为模板,根据GenBank序列(XM_004015399.1)设计引物克隆绵羊Izumo... 克隆绵羊Izumo2cDNA片段后原核表达并纯化GST-IZUMO2融合蛋白,为下一步研究IZUMO2在睾丸和精子上的定位及与其它精卵融合相关蛋白的相互作用奠定基础.以绵羊睾丸组织总cDNA为模板,根据GenBank序列(XM_004015399.1)设计引物克隆绵羊Izumo2cDNA,全长为813bp,构建原核表达质粒pGEX-Izumo2,转化E.coli BL21(DE3)感受态菌,用IPTG诱导表达,并采用SDS-PAGE切胶纯化法纯化GST-IZUMO2融合蛋白,用Western-blot鉴定所得融合蛋白.克隆了813bp的绵羊Izumo2cDNA片段,其中编码区为666bp,BLAST结果显示其与GenBank数据库中的绵羊预测序列相似度为99%,并在E.coli BL21(DE3)中成功诱导表达了分子量约为50kD的GST-IZUMO2融合蛋白,为制备抗绵羊IZUMO2蛋白的抗体和进一步研究IZUMO2在绵羊睾丸中的分布和功能奠定了基础. 展开更多
关键词 绵羊 izumo2 CDNA克隆 原核表达
原文传递
猪IZUMO2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
2
作者 刘松柏 李菊 +5 位作者 蒋明财 朱文俊 张新科 李莉 卫恒习 张守全 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期399-404,共6页
IZUMO2蛋白是公猪精液中与其繁殖性能密切相关的一种蛋白。为进一步确定IZUMO2蛋白在公猪组织和细胞上的表达定位,本试验通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)技术验证猪IZUMO2核苷酸CDS全长序列,构建原核表达... IZUMO2蛋白是公猪精液中与其繁殖性能密切相关的一种蛋白。为进一步确定IZUMO2蛋白在公猪组织和细胞上的表达定位,本试验通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)技术验证猪IZUMO2核苷酸CDS全长序列,构建原核表达质粒pET-28a-IZUMO2,并在大肠杆菌中异源表达。将IZUMO2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA和Western Blot测定多克隆抗体效价及特异性反应。结果表明:猪IZUMO2核苷酸CDS序列全长为627 bp,信号肽序列为60 bp,成功构建pET-28a-IZUMO2原核表达载体;Western Blot和SDS-PAGE结果表明,IZUMO2重组蛋白分子质量为22ku,主要以包涵体形式存在,最佳表达条件是0.4mmol/L的IPTG诱导4h;切胶纯化回收的蛋白满足免疫需求,制备的多克隆抗体效价达1:128000,可以特异性识别猪IZUMO2重组蛋白。本研究验证了猪IZUMO2核苷酸的CDS全长序列,制备了猪IZUMO2原核蛋白和猪IZUMO2多克隆抗体,为IZUMO2蛋白的表达定位以及功能探究提供了试验基础。 展开更多
关键词 猪 izumo2蛋白 原核表达 切胶纯化 多克隆抗体
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