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皮蝇Hypodermin C基因的克隆及重组表达载体的构建 被引量：1
1
作者 杨东英 罗建勋 +8 位作者 唐立刚 关贵全 马米玲 刘志杰 刘爱红 党志胜 王艳华 殷宏 欧阳五庆 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第5期3-6,共4页
参照牛皮蝇HypoderminC(HC)基因的核苷酸序列 ,设计了 1对引物 ,以牛皮蝇总RNA为模板 ,用RT PCR扩增了牛皮蝇HC基因 ,将扩增基因进行克隆测序。测序结果表明 ,所获得基因与已知序列同源性达 99.4 5 %。同时 ,将该基因与表达载体 pGEX 4... 参照牛皮蝇HypoderminC(HC)基因的核苷酸序列 ,设计了 1对引物 ,以牛皮蝇总RNA为模板 ,用RT PCR扩增了牛皮蝇HC基因 ,将扩增基因进行克隆测序。测序结果表明 ,所获得基因与已知序列同源性达 99.4 5 %。同时 ,将该基因与表达载体 pGEX 4T 1连接 ,构建并获得阳性重组表达载体。 展开更多
关键词 皮蝇 hypoderminc基因 基因克隆 表达载体 牛皮 蝇蛆病
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纹皮蝇Hypodermin C基因原核表达及间接ELISA检测方法的建立
2
作者 王文龙 刘春霞 +1 位作者 阮风雷 呼和巴特尔 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期877-881,共5页
为建立牛皮蝇蛆病的抗体检测方法,本研究从纹皮蝇Ⅰ期幼虫中提取总RNA,采用RT-PCR扩增了Hypodermin C(HC)基因。将该基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中进行原核表达。获得了31 ku以包涵体形式表达的重组HC蛋白。Western blot结果... 为建立牛皮蝇蛆病的抗体检测方法,本研究从纹皮蝇Ⅰ期幼虫中提取总RNA,采用RT-PCR扩增了Hypodermin C(HC)基因。将该基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中进行原核表达。获得了31 ku以包涵体形式表达的重组HC蛋白。Western blot结果表明表达产物能够与阳性牛血清IgG特异性结合,具有良好的抗原活性。以纯化的重组HC作为包被抗原建立了牛皮蝇蛆病间接ELISA诊断方法,实验确定抗原最佳包被浓度为15.63μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,阳性标准判定为待检血清OD值>0.256。所建立的诊断方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性。应用该检测方法对230份临床血清进行检测,阳性率为20.6%。研究结果表明该间接ELISA方法是一种有效的牛皮蝇蛆病血清学检测方法。 展开更多
关键词 纹皮蝇 hypodermin c 原核表达 间接ELISA
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HypoderminC基因DNA疫苗的构建及其免疫原性试验
3
作者 刘春霞 白红岩 +2 位作者 娜仁高娃 呼和巴特尔 王文龙 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期13-15,共3页
本试验以Hypodermin C(HC)基因原核表达载体pETHC为模板,PCR扩增HC基因,克隆测序后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了DNA疫苗pcDNA-HC。pcDNA-HC体外转染小鼠胎儿成纤维细胞后,间接免疫荧光技术检测目的基因在转染细胞中的表... 本试验以Hypodermin C(HC)基因原核表达载体pETHC为模板,PCR扩增HC基因,克隆测序后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了DNA疫苗pcDNA-HC。pcDNA-HC体外转染小鼠胎儿成纤维细胞后,间接免疫荧光技术检测目的基因在转染细胞中的表达。以DNA疫苗pcDNA-HC免疫小鼠,对小鼠进行体液免疫水平检测。结果表明,所构建的DNA疫苗能转染到小鼠胎儿成纤维细胞中并正确表达,免疫小鼠血清IgG滴度随免疫次数的增加而升高。 展开更多
关键词 牛皮蝇蛆病 hypoderminc DNA疫苗
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纹皮蝇HypoderminC基因真核表达质粒构建及小鼠免疫试验
4
作者 白红岩 刘春霞 +1 位作者 呼和巴特尔 王文龙 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第8期1-5,共5页
根据GenBank发表的Hypodermin C(HC)基因序列设计引物,以原核表达载体pET-HC为模板,PCR扩增HC基因,将克隆基因插入到真核表达载体pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-HC。将重组质粒pVAX1-HC转染小鼠胎儿成纤维细胞,以间接免疫荧光法检... 根据GenBank发表的Hypodermin C(HC)基因序列设计引物,以原核表达载体pET-HC为模板,PCR扩增HC基因,将克隆基因插入到真核表达载体pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-HC。将重组质粒pVAX1-HC转染小鼠胎儿成纤维细胞,以间接免疫荧光法检测HC基因在细胞中表达。用真核表达质粒pVAX1-HC经双侧胫前肌注射昆明小鼠,对小鼠进行体液免疫和细胞免疫研究。结果表明,小鼠血清抗体水平和淋巴细胞增殖水平明显高于非免疫对照组。本研究成功构建了真核表达质粒pVAX1-HC,为纹皮蝇核酸疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 纹皮蝇 hypodermin c基因 真核表达质粒 免疫 小鼠
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皮蝇素C蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化
5
作者 高兴春 徐梅倩 何国声 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期552-556,共5页
利用PCR技术从重组质粒pGEM-T/HC中扩增HCcDNA片段,克隆到pPIC9k毕赤酵母表达载体中,获得重组质粒pPIC9k-HC,重组质粒线性化后电激转化入毕赤酵母GS115菌株中,重组子经G418筛选、PCR鉴定得到含外源基因的重组子,然后在含0.5%甲醇的培养... 利用PCR技术从重组质粒pGEM-T/HC中扩增HCcDNA片段,克隆到pPIC9k毕赤酵母表达载体中,获得重组质粒pPIC9k-HC,重组质粒线性化后电激转化入毕赤酵母GS115菌株中,重组子经G418筛选、PCR鉴定得到含外源基因的重组子,然后在含0.5%甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白,经SDS-PAGE检测发现表达蛋白质的相对分子量约为28kD,表达量约为121mg/L,表达上清经超滤浓缩和阴离子交换层析初步纯化,所得纯化产物经Western-blot表明具有与兔抗HC血清特异性结合的能力;明胶电泳检测显示具有水解酶活性,为今后进行大规模的牛皮蝇蛆病的调查提供了一种生产大量廉价抗原的方法。 展开更多
关键词 Hc 毕赤酵母 表达纯化
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