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莪术提取物对大肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究
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作者 程梅 罗凯 +2 位作者 张志杰 余志武 陈铁军 《中国处方药》 2025年第3期38-42,共5页
目的探讨莪术提取物(榄香烯)对大肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法CCK-8法检测莪术提取物不同浓度作用下HT-29细胞增殖抑制情况。将HT-29细胞分为实验组1(榄香烯10μmol/L)、实验组2(榄香烯20μmol/L)、实验组3(榄香烯4... 目的探讨莪术提取物(榄香烯)对大肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法CCK-8法检测莪术提取物不同浓度作用下HT-29细胞增殖抑制情况。将HT-29细胞分为实验组1(榄香烯10μmol/L)、实验组2(榄香烯20μmol/L)、实验组3(榄香烯40μmol/L)和对照组(不做处理),并予以相应浓度干预,分别使用克隆形成实验、流式细胞术检测细胞克隆形成能力、细胞凋亡率,使用Western blot检测细胞凋亡蛋白[环氧合酶-2(Cox-2)、髓细胞白血病-1(Mcl-1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]表达。结果与莪术提取物(0μmol/L)相比,莪术提取物(5μmol/L)作用24 h时的细胞增殖抑制率升高(P<0.05),莪术提取物(10μmol/L)作用8 h、16 h时的细胞增殖抑制率升高(P<0.05);莪术提取物作用8 h、16 h、24 h情况下,HT-29细胞增殖抑制率随着莪术提取物作用浓度逐渐升高(P<0.05)。与对照组HT-29细胞相比,实验组1~3的克隆形成数均降低(P<0.05),细胞凋亡率均升高(P<0.05),Cox-2、Mcl-1蛋白表达均降低(P<0.05),Bax蛋白表达均升高(P<0.05),且存在浓度效应。结论莪术提取物可抑制HT-29细胞增殖,促进凋亡,可能是通过调节Cox-2、Mcl-1和Bax蛋白表达实现对HT-29细胞增殖、凋亡调节。 展开更多
关键词 大肠癌 ht-29细胞 莪术提取物 细胞增殖 凋亡
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PolyphyllinⅥ诱导铁死亡抑制结肠癌细胞株HT-29和SW480增殖机制研究
2
作者 李斌 易小江 《消化肿瘤杂志(电子版)》 2025年第1期56-64,共9页
目的 探讨重楼皂苷polyphyllin Ⅵ通过诱导铁死亡抑制结肠癌细胞株HT-29和SW480增殖的相关机制。方法 常规培养细胞株HT-29和SW480,实验分为阴性对照组、二甲基亚砜组、polyphyllin Ⅵ组(用浓度为5μmol/L polyphyllin Ⅵ处理的细胞)和p... 目的 探讨重楼皂苷polyphyllin Ⅵ通过诱导铁死亡抑制结肠癌细胞株HT-29和SW480增殖的相关机制。方法 常规培养细胞株HT-29和SW480,实验分为阴性对照组、二甲基亚砜组、polyphyllin Ⅵ组(用浓度为5μmol/L polyphyllin Ⅵ处理的细胞)和polyphyllin Ⅵ+ferrostatin-1组(用浓度为5μmol/L polyphyllin Ⅵ+100μmol/L铁死亡抑制剂ferrostatin-1联合处理的细胞)。采用高通量转录组测序分析polyphyllin Ⅵ组的差异表达基因并进行基因富集分析。采用CCK-8法检测各组细胞株的增殖活力。采用活性氧、铁浓度、谷胱甘肽浓度检测实验和透射电镜检测分析各组细胞株的铁死亡改变。最后采用蛋白质印迹法和定量聚合酶链反应分别验证铁死亡相关蛋白和基因在polyphyllin Ⅵ组中的表达水平。结果 转录组测序和基因富集分析显示polyphyllin Ⅵ可通过铁死亡通路作用于细胞株HT-29和SW480。CCK-8法结果显示polyphyllin Ⅵ可抑制细胞株HT-29和SW480的增殖活力。与阴性对照组相比,polyphyllin Ⅵ组的活性氧水平增加(P<0.001)、谷胱甘肽浓度降低(P<0.05)、铁离子相对浓度增加(P<0.001),且透射电镜检测显示polyphyllin Ⅵ组细胞株的线粒体数量减少,膜密度增高。与polyphyllin Ⅵ组相比,polyphyllin Ⅵ+ferrostatin-1组的细胞株增殖活力增强,活性氧水平降低(P<0.001)、谷胱甘肽浓度增加(P<0.01)、铁离子相对浓度降低(P<0.001),且细胞株的线粒体数量上升,膜密度降低。长链酰基辅酶A合酶4 (long-chain acyl-coenzyme A synthase4,ACSL4)蛋白和mRNA表达水平在polyphyllin Ⅵ组中均上升,而谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidases,GPX)4的蛋白表达水平则下调。结论 PolyphyllinⅥ可通过诱导铁死亡过程来抑制结肠癌细胞株HT-29和SW480的增殖能力,潜在作用路径为GPX4/ACSL4通路。 展开更多
关键词 PolyphyllinⅥ 结肠癌 细胞株ht-29和SW480 铁死亡
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熊果酸通过拮抗Bcl-2诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡
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作者 贾沛芝 刘锦洪 +3 位作者 刘云 魏丽慧 张铃 林久茂 《广东药科大学学报》 2025年第3期57-63,共7页
目的探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对人结直肠癌HT-29细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的调控作用。方法体外培养HT-29细胞,UA干预,MTT法检测细胞活力,流式细胞术、凝胶电泳、DAPI染色检测细胞凋亡,流式细胞术测定线粒体... 目的探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对人结直肠癌HT-29细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的调控作用。方法体外培养HT-29细胞,UA干预,MTT法检测细胞活力,流式细胞术、凝胶电泳、DAPI染色检测细胞凋亡,流式细胞术测定线粒体膜电位(JC-1染色)与细胞色素C(cytochrome C)释放,Western blot法测定Bcl-2表达,比色法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9活性;成孔活性技术与表面等离子共振技术检测Bcl-2与UA相互作用;构建Bcl-2过表达HT-29细胞,UA干预后采用RT-PCR与Westernblot法测定Bcl-2表达,DAPI染色与流式细胞术检测凋亡率。结果UA诱导HT-29细胞凋亡,导致线粒体膜电位丧失与CytochromeC释放增加,抑制Bcl-2的表达,提高Caspase-3和Caspase-9的活性(P<0.05);UA可与Bcl-2特异性结合,提高线粒体外膜的通透性;UA可抑制Bcl-2过表达HT-29细胞中Bcl-2的表达,提高凋亡率(P<0.05)。结论UA可通过拮抗Bcl-2诱导HT-29细胞凋亡。 展开更多
关键词 熊果酸 结直肠癌 BCL-2 ht-29细胞 凋亡
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黄芪多糖通过调控miR-20a/TGFBR2分子轴降低结直肠癌HT-29/DDP细胞的顺铂耐药性 被引量:14
4
作者 招志辉 丘振文 招远明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期417-425,共9页
目的:探讨黄芪多糖(APS)通过调控miR-20a/TGFBR2分子轴对结直肠癌(CRC)顺铂耐药细胞HT-29/DDP增殖、侵袭、凋亡和耐药性的影响及其机制。方法:以人CRC HT-29细胞、HT-29/DDP细胞为亲本和耐药细胞模型,将HT-29/DDP细胞随机分为4组:对照组... 目的:探讨黄芪多糖(APS)通过调控miR-20a/TGFBR2分子轴对结直肠癌(CRC)顺铂耐药细胞HT-29/DDP增殖、侵袭、凋亡和耐药性的影响及其机制。方法:以人CRC HT-29细胞、HT-29/DDP细胞为亲本和耐药细胞模型,将HT-29/DDP细胞随机分为4组:对照组、APS处理组、过表达miR-20a+APS组、沉默TGFBR2+APS组。用不同质量浓度的APS(0、0.5、1.0、1.5和2.0 mg/ml)处理HT-29/DDP细胞后,以qPCR和Wb实验检测细胞中miR-20a和TGFBR2的表达水平;用CCK-8、Transwell和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测对HT-29/DDP细胞增殖、侵袭和凋亡的影响;用双荧光素酶报告基因验证miR-20a与TGFBR2的靶向作用关系。构建裸鼠皮下CRC HT-29/DDP细胞移植瘤模型,观察APS对移植瘤生长的影响及其机制。结果:APS显著抑制HT-29/DDP细胞的增殖(P<0.01),且呈剂量依赖性。miR-20a在经APS处理后的HT-29/DDP细胞中低表达(P<0.01)、TGFBR2的表达水平显著上调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实miR-20a靶向作用TGFBR2并下调其表达水平。体内外实验证实APS通过靶向下调miR-20a对TGFBR2的抑制作用,提高HT-29/DDP细胞的药物敏感性,进而抑制该细胞增殖、侵袭和促进凋亡(均P<0.01);同时发现,该作用与抑制PCNA、Bcl-2蛋白而促进Bax、Caspase-3蛋白表达有关联。结论:APS通过下调miR-20a对TGFBR2表达的抑制作用,从而逆转HT-29/DDP细胞对顺铂的耐药性。 展开更多
关键词 黄芪多糖 结直肠癌 ht-29细胞 ht-29/DDP细胞 顺铂 miR-20a/TGFBR2分子轴
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基于靶细胞萃取与UPLC-Q-TOF-MS联用筛选两面针抑制人结肠癌HT-29细胞的药效成分及其时间互补优势组合研究
5
作者 张佳诺 陈月华 +4 位作者 王文瑀 袁楚 朱珈莹 韩雨潼 宋慧鹏 《中医药信息》 2025年第7期29-35,共7页
目的:采用靶细胞萃取技术与超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOFMS)分析两面针根提取液中的药效成分,并探究这些成分对人结肠癌细胞的抑制作用,以及它们在不同时间点的组合作用。方法:选取人结肠癌HT-29细胞作为靶细... 目的:采用靶细胞萃取技术与超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOFMS)分析两面针根提取液中的药效成分,并探究这些成分对人结肠癌细胞的抑制作用,以及它们在不同时间点的组合作用。方法:选取人结肠癌HT-29细胞作为靶细胞,在细胞对数生长期加入2 mg/m L两面针药液进行4 h孵育,随后收集并分析细胞样品;利用UPLC-Q-TOF-MS/MS检测与靶细胞结合的成分;同时,设置不同浓度的两面针根提取液、两面针碱、白屈菜红碱、血根碱及其两两混合液组,采用MTT比色法检测药物对人结肠癌HT-29细胞的抑制作用,计算各组细胞的抑制率。结果:筛选出3个可能的药效成分,分别为血根碱、两面针碱和白屈菜红碱。这3个单体化合物以及两面针提取液均对人结肠癌HT-29细胞的增殖具有抑制作用(P <0.05)。提取液的质量浓度越高,其抑制作用越强。此外,单体混合液的抑制效果优于单体,且两两混合后表现出互补的抑制效果,这种抑制效果随时间、浓度的变化而有所不同。结论:本研究从两面针根提取物中鉴定出3个抗癌成分,并证实其对人结肠癌HT-29细胞的抑制效果。不同成分的组合展现出一定的时间互补优势,为抗癌药物的研发及进一步探索机制和全面药效评估提供了实验基础。 展开更多
关键词 两面针 靶细胞萃取 人结肠癌ht-29细胞 UPLC-Q-TOF-MS 细胞增殖
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赖氨酸、天冬酰胺与葡萄糖美拉德反应产物对丙烯酰胺诱导的HT-29和SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
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作者 郝瑞芳 冯雅蓉 《晋中学院学报》 2025年第3期20-26,共7页
以丙烯酰胺(AA)诱导的人结肠腺癌细胞(HT-29)和人神经母细胞瘤株(SH-SY5Y)细胞损伤模型为样本,通过观察细胞形态、分析细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率,评价美拉德产物对细胞损伤的保护作用。结果表明,用300μg/m L AA分别对HT-29和S... 以丙烯酰胺(AA)诱导的人结肠腺癌细胞(HT-29)和人神经母细胞瘤株(SH-SY5Y)细胞损伤模型为样本,通过观察细胞形态、分析细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率,评价美拉德产物对细胞损伤的保护作用。结果表明,用300μg/m L AA分别对HT-29和SH-SY5Y处理6 h和8 h,细胞均受损,细胞存活率分别下降至71.8%和69.9%。经不同分子量的赖氨酸/葡萄糖反应产物和天冬酰胺/葡萄糖反应产物(H-LGP、L-LGP、H-AGP和L-AGP)预孵育后,50μg/m L的H-LGP、H-AGP和L-AGP对HT-29保护作用最强,细胞存活率最高达107.2%,LDH为119.0%。不同浓度的四种产物均对AA诱导的SH-SY5Y损伤有显著保护作用,存活率最高达93.6%,LDH为123.6%,且保护作用与添加物剂量呈相关性。 展开更多
关键词 赖氨酸/葡萄糖美拉德反应产物 天冬酰胺/葡萄糖美拉德反应产物 丙烯酰胺 ht-29细胞 SH-SY5Y细胞
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清肠化湿方对HT-29细胞IL-6/JAK2/STAT3的影响 被引量:17
7
作者 赵青春 沈洪 +2 位作者 程海波 朱磊 李沐涵 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期883-885,共3页
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种反复发作的肠道慢性非特异性炎症性疾病,发病机制尚未明确,细胞因子IL-6及其介导的信号通路在非可控性肠道炎症过程中起关键作用[1]。导师沈洪教授所拟清肠化湿方(QHR),治疗轻、中度UC,... 溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种反复发作的肠道慢性非特异性炎症性疾病,发病机制尚未明确,细胞因子IL-6及其介导的信号通路在非可控性肠道炎症过程中起关键作用[1]。导师沈洪教授所拟清肠化湿方(QHR),治疗轻、中度UC,取得良好效果[2]。 展开更多
关键词 清肠化湿方 溃疡性结肠炎 ht-29 IL-6 JAK2 STAT3
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NGX6基因对人结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响 被引量:14
8
作者 王晓艳 沈守荣 +2 位作者 刘芬 李晓玲 范松青 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期45-50,共6页
NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减... NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减少了S,G2,M期细胞数.利用蛋白质印迹和流式细胞术分析NGX6转染前后HT-29细胞周期素(cyclins)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor,CKI)的表达变化,发现NGX6可下调HT-29细胞中cyclinE、cyclinD1的表达及上调p27的表达,对cyclinA和cyclinB的表达无明显影响,p16在三组结肠癌细胞中均无表达.研究结果表明,NGX6在HT-29细胞中通过下调cyclinE、cyclinD1和上调p27的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而发挥其在结肠癌中的抑瘤作用. 展开更多
关键词 NGX6 ht-29细胞 细胞周期 细胞周期素 细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CKI)
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苦参碱抑制大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2表达的研究 被引量:38
9
作者 黄建 张鸣杰 邱福铭 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期240-243,共4页
目的从基因和蛋白水平探讨中药成分苦参碱 (matrine)对大肠癌HT-2 9细胞环氧化酶-2(COX-2 )表达的影响。方法分别采用RT-PCR、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度苦参碱处理HT-2 9细胞前后COX-2mRNA、蛋白及其产物前列腺素E2 (PGE2 ... 目的从基因和蛋白水平探讨中药成分苦参碱 (matrine)对大肠癌HT-2 9细胞环氧化酶-2(COX-2 )表达的影响。方法分别采用RT-PCR、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度苦参碱处理HT-2 9细胞前后COX-2mRNA、蛋白及其产物前列腺素E2 (PGE2 )水平的改变。结果苦参碱可抑制HT-2 9细胞COX-2mRNA、蛋白表达及PGE2 合成水平 ,但对COX 1无影响。当苦参碱 2 .0mg/ml处理时 ,COX 2mRNA表达在处理后 6h和 9h时抑制率均为 10 0 % ;细胞培养液PGE2 合成水平在 9h时抑制率为6 3.9% ;COX-2蛋白表达在 12h和 2 4h时抑制率分别为 4 8%和 10 0 %。结论苦参碱具有选择抑制HT-2 9细胞COX-2的基因转录、蛋白表达和功能活性等作用 ,在一定浓度和时间范围内 。 展开更多
关键词 苦参碱 大肠癌 ht-29细胞 环氧化酶-2 表达 中药 中医药疗法
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金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱导人结肠癌 HT-29 细胞凋亡 被引量:17
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作者 和磊 罗婧 +2 位作者 王亚芸 石玉杰 任建武 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期170-174,191,共6页
目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内... 目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内活性氧水平、线粒体膜电位、细胞周期和细胞凋亡率变化;蛋白免疫印迹检法测蛋白Caspase-3,9和胞内细胞色素C的表达。结果:金钗石斛脂溶性生物碱提取物能降低HT-29结肠癌细胞存活率,呈剂量和时间效应,48 h半数抑制浓度(IC50)为0.72 mg/m L;金钗石斛脂溶性生物碱提取物能诱导HT-29细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G2期;金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱使线粒体膜电位降低,胞内活性氧浓度升高;激活型Caspase-9,3与胞内细胞色素C表达水平增高。结论:金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29结肠癌细胞的生长具有抑制作用并诱导细胞凋亡,其可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 金钗石斛 脂溶性生物碱 ht-29细胞 细胞凋亡 活性氧
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大黄素对HT-29细胞IL-8分泌及NF-κB活化的影响 被引量:14
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作者 王青 周婷 +2 位作者 周联 董燕 王培训 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1451-1454,共4页
目的研究大黄素对IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞的IL-8分泌及NF-κB活化的作用,为其临床应用提供实验依据。方法用IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞来建立体外细胞炎症模型,采用ELISA检测HT-29细胞的IL-8分泌;以... 目的研究大黄素对IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞的IL-8分泌及NF-κB活化的作用,为其临床应用提供实验依据。方法用IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞来建立体外细胞炎症模型,采用ELISA检测HT-29细胞的IL-8分泌;以免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜观察HT-29细胞NF-κB核转位。结果大黄素在10~80mol.L-1能降低IFN-γ+LPS所引起的HT-29细胞IL-8的大量产生,并且呈明显的剂量依赖关系;大黄素不同浓度组可抑制IFN-γ+LPS刺激造成的NF-κB激活,;有剂量依赖关系。结论大黄素能有效抑制IFN-γ+LPS诱导的IL-8分泌和NF-κB激活。 展开更多
关键词 大黄素 ht-29细胞 白介素-8 核因子-ΚB
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辽东楤木叶总皂苷对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用及机制研究 被引量:9
12
作者 尹丽颖 李凤金 +3 位作者 边晓燕 牛雯颖 敖鹏 肖洪彬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1545-1548,共4页
目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)对HT-29细胞生长的抑制作用及作用机制。方法采用MTT法检测ETS对HT-29细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测ETS对HT-29细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测ETS对HT-29细胞PLK1蛋白表达的影响。结果 ET... 目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)对HT-29细胞生长的抑制作用及作用机制。方法采用MTT法检测ETS对HT-29细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测ETS对HT-29细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测ETS对HT-29细胞PLK1蛋白表达的影响。结果 ETS对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,IC50值为39.62 mg·L-1。在10~40 mg·L-1剂量作用下,可剂量依赖性诱导HT-29细胞凋亡。ETS主要将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而可剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖。ETS可明显抑制HT-29细胞PLK1蛋白的表达。结论 ETS体外可明显抑制HT-29细胞的生长,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞、细胞凋亡及抑制PLK1蛋白表达有关。 展开更多
关键词 辽东楤木 皂苷 人结肠癌ht-29细胞 细胞周期 胞凋亡 PLK1蛋白
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二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用 被引量:9
13
作者 黄幼生 苏琦 +4 位作者 周秀田 苏坚 廖前进 解娜 葛玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1128-1132,共5页
目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT... 目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。 展开更多
关键词 二烯丙基二硫 结肠癌 ht-29细胞 细胞周期 eye-lin E蛋白
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Survivin shRNA和APC片段双基因的载体构建及其在HT-29细胞的表达 被引量:11
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作者 袁禧先 段厚羽 +4 位作者 曹锋 杜井峰 朱艳丽 程开 杨延涛 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第4期369-374,共6页
目的研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达,同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法... 目的研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达,同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法构建3对互补Survivin shRNA片段,从其中筛选出一条最佳干扰shRNA片段,与APC功能片段(aa1020-1698)相连接构建双基因共表达质粒载体。将HT-29细胞分为实验组、空载组、空白组3组,慢病毒对HT-29进行侵染,观察是否有绿色荧光表达及对转染细胞进行realtime PCR、Western blot检测Survivin、APC基因表达水平。通过检测Caspase-3活性来检测细胞凋亡情况。结果 1Real time PCR检测后显示对Survivin基因起到最佳干扰效果的片段为shRNA3序列。2构建出的shRNA载体经过送序验证比对后,3对shRNA序列与最初设计的序列完全相同。在HT-29细胞中可见绿色荧光,实验组Survivin相对含量(31.71±1.49)较空载组(100±0)、空白组(95.12±2.15)明显减少(P<0.05),APC mRNA表达水平较空载组(0±0)、空白组(0.51±0.15)明显增加(P<0.05)。实验组Survivin蛋白相对含量(0.18±0.01)较空白组(0.24±0.04)、空载组(0.22±0.03)明显减少,APC蛋白表达水平(0.147±0.016)较空白组(0.095±0.012)、空载组(0.108±0.015)明显升高(P<0.05)。3实验组凋亡相对比值(0.573±0.050)较空白组(0.390±0.040)、空载组(0.407±0.030)明显增加(P<0.05)。结论成功构建Survivin-shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体,并能够在HT-29结肠癌细胞中成功表达,该双基因共表达载体可为后续利用该载体进行基因治疗的基础实验提供材料。 展开更多
关键词 ht-29 SURVIVIN SHRNA APC有效片段 双基因 慢病毒
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乳酸菌体外粘附人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的研究 被引量:21
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作者 李平兰 杨华 张 篪 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期19-22,共4页
用实验室保存的24株乳酸菌菌种做了对人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的体外粘附性试验。发现双歧杆菌的粘附能力较高,平均在 10.5个/细胞;乳杆菌的粘附能力较低,平均在 3.2个/细胞;球菌的粘附能力很低,平均在 2.3个/细胞。其中双歧杆菌中 Bi... 用实验室保存的24株乳酸菌菌种做了对人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的体外粘附性试验。发现双歧杆菌的粘附能力较高,平均在 10.5个/细胞;乳杆菌的粘附能力较低,平均在 3.2个/细胞;球菌的粘附能力很低,平均在 2.3个/细胞。其中双歧杆菌中 Bifidobacterium bifidum 02菌株粘附能力最好,达到(18.4±2.7)个/细胞。乳杆菌中 Lactobacillus acidophilus 99101粘附能力最好,达到(10.2±1.8)个/细胞。同时,同种不同株的乳酸菌粘附能力有差异,而同属中,来自人粪便与来自猪粪便的乳酸菌的粘附能力没有明显差异。 展开更多
关键词 体外粘附试验 人结肠腺癌细胞 乳酸菌 ht-29细胞 活菌制剂
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SurvivinshRNA-APC双基因共表达慢病毒载体对HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长情况的影响 被引量:10
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作者 袁禧先 温超 +4 位作者 曹雅 杜井峰 程开 朱艳丽 段厚羽 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第6期584-590,共7页
目的在转录后水平进行干预的RNA干扰技术在多基因治疗中的应用越来越广泛。文中旨在构建人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过联合RNAi和外源性补充的方式研究Survivin shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体对结肠癌裸鼠移植瘤生长情... 目的在转录后水平进行干预的RNA干扰技术在多基因治疗中的应用越来越广泛。文中旨在构建人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过联合RNAi和外源性补充的方式研究Survivin shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体对结肠癌裸鼠移植瘤生长情况的影响。方法选取35只裸鼠随机数字表法分为5组,即Survivin shRNA-APC双基因组、Survivin shRNA组、APC组、空载组和空白组,每组7只;将已经构建好的处于对数生长期的双基因共表达Survivin shRNA-APC、Survivin shRNA及APC稳转株,空载稳转株,HT-29结肠癌细胞(均为2×106/mL)分别注射至5组裸鼠左前腋下成瘤,构建人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型;通过测量瘤体体积、重量,检测移植瘤生长抑制率,Real time PCR检测移植瘤组织survivin mRNA的表达,免疫组化检测Survivin蛋白的表达,TUNEL检测凋亡情况。结果与空白组比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组移植瘤平均体积、平均重量均减少(P<0.05);与空载组比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组平均体积、平均移植瘤重量亦减少(P<0.05),而体积抑制率、瘤重抑制率均增加(P<0.05);与双基因组比较,APC组、Survivin shRNA组移植瘤平均体积、平均重量均增加(P<0.05)。与空白组和空载组相比,APC组、Survivin shRNA组、Survivin shRNA-APC双基因组移植瘤组织Survivin mRNA和蛋白表达相对含量明显降低(P<0.05);与Survivin shRNA组、APC组相比,双基因组移植瘤组织Survivin mRNA和蛋白表达相对含量亦明显降低(P<0.05)。与空白组裸鼠移植瘤组织结肠癌细胞凋亡指数[(9.89±0.31)%]比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组[(31.19±1.79)%、(33.64±2.03)%、(56.72±3.17)%]明显升高(P<0.05),而APC组、Survivin shRNA组、双基因组亦较空载组[(10.06±0.43)%]明显升高(P<0.05);与Survivin shRNA组、APC组相比,Survivin shRNA-APC双基因组移植瘤组织癌细胞凋亡指数明显升高(P<0.05)。结论 Survivin shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体能够使Survivin基因的表达水平降低,促进结肠癌细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长,且优于单个基因的影响。 展开更多
关键词 皮下移植瘤 双基因共表达慢病毒载体 Survivin shRNA APC ht-29
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藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制 被引量:9
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作者 叶记林 吴爱莲 +3 位作者 王冬艳 彭建明 于有江 刘延庆 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期256-262,共7页
背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸... 背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和(或)GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果:联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制(抑瘤率达67.0%)和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论:GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。 展开更多
关键词 藤黄酸 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 ht-29细胞 Nrf2 Bcl-2 Bax DR5
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半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响 被引量:14
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作者 芦冲 张睿苏 +5 位作者 高彦宇 马育轩 赵志宏 王琳 李杰明 李冀 《中医药学报》 CAS 2016年第2期51-54,共4页
目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组... 目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P<0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P<0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P<0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 半枝莲 含药血清 细胞凋亡 ht-29细胞 细胞周期
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bcl-2和p53在丹皮酚诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡中的作用及其机制 被引量:11
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作者 计春燕 谭诗云 +1 位作者 汪毅 刘长青 《中国全科医学》 CAS CSCD 2007年第5期364-366,共3页
目的探讨bcl-2和p53在丹皮酚(paeonol,Pae)诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用及可能的作用机制。方法应用透射电镜技术和原位末端标记(TUNEL)法观察不同浓度的Pae对HT-29细胞凋亡的诱导作用,应用免疫细胞化学技术检测用药前、后... 目的探讨bcl-2和p53在丹皮酚(paeonol,Pae)诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用及可能的作用机制。方法应用透射电镜技术和原位末端标记(TUNEL)法观察不同浓度的Pae对HT-29细胞凋亡的诱导作用,应用免疫细胞化学技术检测用药前、后凋亡相关基因bcl-2及p53表达的变化,并与对照组比较。结果透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态;Pae在15.63mg/L、62.50mg/L、250.00mg/L3种浓度下作用48h均可诱导HT-29细胞凋亡,TUNEL法显示各组凋亡指数(AI)间差别有显著性意义(P<0.05);免疫细胞化学染色显示Pae作用后HT-29细胞bcl-2及p53蛋白表达显著降低。结论Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡,其作用可能与下调bcl-2及p53蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 ht-29细胞 基因 BEL-2 基因 P53 丹皮酚
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耐5-氟尿嘧啶的人结肠癌HT-29/5-FU细胞株的建立及其生物学特性 被引量:8
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作者 邱婷婷 项晓军 +6 位作者 雷婉 郝超 张凌 冯苗 余锋 黎军和 熊建萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期328-332,共5页
目的建立耐5-氟尿嘧啶人结肠癌细胞株(HT-29/5-FU)并观察其生物学特性。方法采用5-FU持续接触浓度递增法诱导;观察细胞形态变化和克隆形成率;MTT法测定生长曲线和药物敏感性;Western blot法分析胸苷酸合成酶(TS)、二氢嘧啶脱氢酶(DPD)... 目的建立耐5-氟尿嘧啶人结肠癌细胞株(HT-29/5-FU)并观察其生物学特性。方法采用5-FU持续接触浓度递增法诱导;观察细胞形态变化和克隆形成率;MTT法测定生长曲线和药物敏感性;Western blot法分析胸苷酸合成酶(TS)、二氢嘧啶脱氢酶(DPD)的表达情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果 HT-29/5-FU的耐药指数为3.59;与HT-29细胞相比,HT-29/5-FU细胞形态发生改变、生长缓慢、克隆形成率降低,TS和DPD高表达;S期细胞比例增多,更能耐受5-FU诱导的细胞凋亡。结论 HT-29/5-FU细胞株生物学性状的改变可能是5-FU化疗耐药机制的重要组成部分,有助于阐明肿瘤潜在耐药机制和逆转肿瘤耐药。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 ht-29细胞 氟尿嘧啶 抗药性 细胞培养
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